机能学实验标本的制备与疾病动物模型

机能学实验标本的制备与疾病动物模型 1。蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本制备（1）如何制备蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本？其主要操作步骤什么？①破坏脑和脊髓：用左手食指、中指夹住蟾蜍的两个前肢，无名指和小指夹住两后肢，拇指按住头，右手持探针沿蟾蜍头顶中央向后滑动，当触及凹陷处时（即枕骨大孔），将探针垂直刺入枕骨大孔，到达脊椎椎管，改变探针方向，向上刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织。将探针退至进针处，再向尾侧方向刺入脊椎椎管，反复提插探针捣毁脊髓。待其四肢松软、呼吸停止，表示脊髓和脑已被完全破坏，否则应按上述方法反复进行；②剪除躯干上部和内脏：用一只手捏住蟾蜍的骶髂关节，另一只手持粗剪刀在骶髂关节水平以上0.5—1cm处剪断脊柱，用组织镊夹住脊柱断端，提起蟾蜍使其头部自然下垂，用粗剪刀沿脊柱两侧剪除头胸部和内脏，保留后肢、骶骨、脊柱及其由它发出的坐骨神经；③剥皮：左手持组织镊夹住脊柱断端，注意镊子不要夹在神经上，右手捏住脊柱背部皮肤的边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。剥至大腿时，如果阻力较大，可先剥下一侧大腿的皮肤，再不另一侧。皮肤全部剥离后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。洗净双手及用过的全部手术器械；④分离两腿：用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿脊柱的中线剪开脊柱，再经耻骨联合中央剪开，将蛙腿分成两半，并将分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中（在剪开脊柱和耻骨联合时不要伤及坐骨神经并保持神经的完整）；⑤游离坐骨神经：取一侧下肢标本，用蛙钉将蛙腿背位固定于干净的腊盘上（固定三点：脊柱、膝关节、脚掌）。用玻璃分针沿脊柱侧游离腹腔部坐骨神经，再循骨二头肌和瓣膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经之大腿部分，直至胫腓神经分叉处。取一段缝合线，穿过脊柱根部的坐骨神经，将其结扎并用眼科剪剪断。手执结扎线将神经轻轻提起，顺序向下剪断所有神经分支，将神经搭在腓肠肌上，加滴任氏液。用粗剪刀剪断骨二头肌、瓣膜肌、骨四头肌肌腱，自膝关节周围剪除并刮净所有大腿肌肉，在距膝关节1cm剪断股骨；⑥完成坐骨神经—腓肠肌标本：用玻璃分针穿透腓肠肌跟腱，逐步游离腓肠肌至膝关节处，在腓肠肌跟腱处穿线结扎，提起结扎线，在其下方剪断跟腱。用粗剪刀水平方向伸进腓肠肌和小腿之间，在膝关节处剪断小腿，使其分离。拿掉固定于膝关节处的蛙钉，将制备好的坐骨神经—腓肠肌标本放入盛有新鲜任氏液的培养皿中待用。（2）如何验证蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本的兴奋性：验证神经肌肉标本兴奋性常用的方法有两种：①锌铜弓刺激。将锌铜弓在任氏液中浸湿后触及坐骨神经，如果腓肠肌发生一次明显而迅速的收缩，则表示标本的兴奋性性良好。②用刺激器给与神经一次中等强度的电刺激，如引起肌肉一次明显的收缩，则表示标本的兴奋性性良好。（3）制备坐骨神经—腓肠肌标本时应注意哪些问题？①破坏脑和脊髓前，可先用纱布夹捏蛙头部两侧的耳后腺以排出蟾酥，避免其溅入眼内；如果溅入眼内，应立即用清水冲洗；②破坏脑和脊髓要完全，待其四肢松软、呼吸停止，表示脊髓和脑已被完全破坏，否则应按上述方法反复进行；③皮肤和内脏全部剥离后，须洗净双手及用过的全部手术器械。切勿用自来水冲洗标本；用剪刀沿正中线平分脊柱和耻骨联合时，要保证神经的完整，不要伤及神经；④分离标本时，只能用玻璃分针，不可用金属器械分离或用手触摸标本。以免其对神经和肌肉的损伤；⑤分离神经干和其分支时，动作须轻柔，避免过度牵拉和其它不良刺激；⑥股骨的保留长度应为1cm左右，便于固定标本；⑦制作标本过程中，为防止标本干燥，须滴加任氏液，使其保持湿润；⑧标本制成后，用锌铜弓或中等强度电流单个刺激标本，验证标本的兴奋性是否良好；⑨标本制成后，应立即将其置于新鲜任氏液中，待其兴奋性稳定后方可进行实验。 2．蟾蜍坐骨神经—缝匠肌标本制备（1）制备坐骨神经—缝匠肌标本制备的方法是什么？一侧蟾蜍腰背下肢标本的方法同坐骨神经—腓肠肌标本制备1-4项相同。取一侧下肢，用蛙钉背位固定在蛙板上，在分离前要先辨认缝匠肌。缝匠肌起自耻骨的外侧，止于胫骨上端，是一条狭长而肌纤维平行的薄片状骨骼肌。确认缝匠肌后，用玻璃分针分别分离并剪去缝匠肌的内、外侧肌膜。坐骨神经分支由缝匠肌的中部内侧进入肌肉，分离肌膜时要仔细，先由上而下分离外侧，再分离内侧。从内侧分离到肌肉下1/3近中线处时，可以看见一条较细的神经进入肌肉时分成两条细小分支。沿此细小神经向中枢端分离，在大收肌和大内直肌的下方伴随着血管向上走行，于股骨头处汇入坐骨神经，用眼科剪由上而下剪断神经干周围的分支及附着在神经表面的结缔组织，直至进入缝匠肌部位。用玻璃分针在缝匠肌下方肌腱出轻轻挑起，并穿线结扎，剪断缝匠肌与耻骨端和胫骨端的联系，将神经与肌肉轻轻提起，放置盛有任氏液的培养皿中10-20min，待其兴奋性稳定后，便可进行实验。（2）制备坐骨神经—缝匠肌标本常遇到的问题是什么？如何解决？①由于缝匠肌纤维少而薄，坐骨神经从缝匠肌内侧分成两只相当细的分支进入肌肉，制备过程中易被损伤和扯断，因此，制备过程中应先辨清神经分支后，再选择合理的神经、肌肉分离途径。通常选择的分离方法是先分离肌肉，然后自上而下分离神经；②由于坐骨神经从肌肉内侧进入缝匠肌，分离内侧肌膜时须特别小心。另外，分离缝匠肌内、外侧肌膜是不宜过深；③缝匠肌纤维十分薄，在肌肤部同其它大腿肌群难以分离时，可先结扎并剪断其肌腱，轻轻拉起结扎线，再将肌群分离；④在标本制备过程中，应经常滴加任氏液以防神经干燥。标本制成后，须检查其兴奋性，并将标本浸入新鲜任氏液中。3．蟾蜍坐骨神经-腓神经标本制作（1）如何制备坐骨神经—腓神经标本制备一侧蟾蜍腰背下肢标本的方法同坐骨神经-腓肠肌标本制备1-4项相同。取一侧下肢标本，用蛙钉将蛙腿背位固定于干净的腊盘上（固定三点：脊柱、膝关节、脚掌）。用玻璃分针沿脊柱侧游离腹腔部坐骨神经，再循骨二头肌和瓣膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经之大腿部分，坐骨神经延伸至腘窝处分为胫神经和腓神经两支，再分叉的下端将胫神经剪断。腘窝处腓神经表面有肌肉和筋膜覆盖，应用眼科剪奖契机，然后沿腓神经沟仔细分离腓神经至腓肠肌跟腱处，取两段缝合线用任氏液浸湿，分别在脊柱侧坐骨神经根部和腓神经末端结扎并剪断，用组织镊夹住坐骨神经根部的结扎线轻轻提起，从坐骨神经根部到腓神经末端逐一剪掉神经分支，最后将坐骨神经-腓神经标本浸入放有任氏液的培养皿中。（2）备坐骨神经—腓神经标本需注意些什么？①分离神经标本一定要长一些，分离应从脊柱侧坐骨神经根部开始至腓肠肌跟腱处；②剪开腘窝处的肌肉和筋膜时要仔细，避免剪断腓神经；③在标本制备过程中，应经常滴加任氏液以防神经干燥。将标本浸入新鲜任氏液中数分钟，待其兴奋性稳定后开始实验。 4. 离体蛙心灌流标本（1）如何制备离体蛙心灌流标本①用左手食指、中指夹住蟾蜍的两个前肢，无名指和小指夹住两后肢，拇指按住头，右手持探针沿蟾蜍头顶中央向后滑动，当触及凹陷处时（即枕骨大孔），将探针垂直刺入枕骨大孔，到达脊椎椎管，改变探针方向，向上刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织。将探针退至进针处，再向尾侧方向刺入脊椎椎管，反复提插探针捣毁脊髓。待其四肢松软、呼吸停止，表示脊髓和脑已被完全破坏，否则应按上述方法反复进行；②蛙取仰卧位放在腊盘上，用蛙钉将其四肢固定，左手持组织镊夹住胸部中央的皮肤，右手持粗剪刀在胸前区横向剪开皮肤，再沿胸、腹中线纵向剪开皮肤，使切口呈三角形状，暴露剑突和腹部肌肉，沿腹白线剪开腹部肌肉；③剪断左、右锁骨，剪去胸骨，用眼科小镊子夹住心包膜轻轻提起，再用眼科小剪刀剪去心包膜，暴露心脏。（2）制备离体蛙心灌流标本应注意哪些事项？5. 怎样制备离体消化道平滑肌标本？（1）用于离体肠管实验的小肠有十二指肠、空肠和回肠，可根据实验目的的不同进行选择：1）十二指肠是肠道自律性的起博点，频率较慢，自律性自上而下逐渐减弱；2）空肠多做定性实验，回肠多做定量实验。其制作方法是：取家兔或豚鼠 1 只，用硬器猛击动物后头延髓部，致其昏迷后立即使其成仰卧位，并沿腹白线剖开腹腔，找到十二指肠、空肠和回肠后剪取之，并放入冷台氏液内。先用 20ml 注射器抽取台氏液冲洗肠内容物，冲洗干净后将其剪成若干约 2.0cm长的小肠段。然后取一段肠段，把周围的脂肪和结缔组织剪除，对角悬挂，上端与张力换能器相连，下端与“L”型钩相连，并置于离体器官浴槽中（盛有定量的台氏液），保温（十二指肠 37℃，回肠 32℃）通气体，待调整好张力平衡后，稳定一段时间即可开始正式实验。（2）离体实验常用的动物和标本有哪些？离体实验的特点和条件是什么？答：常用的动物有豚鼠、家兔、猫、蟾蜍和大鼠等。常用的组织标本是心脏、心房、膀胱、子宫、气管、肺、肠和大动脉等。它具有实验条件易于控制、操作简便、结果准确、节省时间，可进行大量药物筛选的特点。因为离体实验需要模拟动物体内的环境，所以操作时一定要在生理环境下进行，故要有三个必要的条件：（1）适宜的温度：32~38±0.5℃；（2）通气体：一般需用95%O2和5%CO2的混合气体，1－2个气泡/s；（3）营养液：是含有机体所需的各种离子和葡萄糖的溶液，不同的组织所选用的营养液不同。 6．怎样制备进行离体兔耳血管灌流？取家兔 1 只，静脉注射戊巴比妥钠或乌拉坦麻醉后，仰卧位固定于手术台上。在家兔的另一耳根部剪毛，在凸面的正中间有一较粗的血管，即兔耳动脉。顺耳动脉走向切开皮肤2～ 3cm，并仔细分离出耳动脉约 1.0 长，在其下穿入两根丝线，接扎近心端。在两根线之间的动脉上剪一小“V”型切口，插入连接盛有乐氏液的兔耳灌流套管并予以接扎。然后用粗剪刀在兔耳的最根部剪下全兔耳，立即用乐氏液灌流并冲洗干净血管中存留的血液，直至流出的液体为无色为止。将剪下的兔耳固定在小玻璃板（或蜡板）上，再将此玻璃板以 45°固定于铁支架上。然后调整灌流液的压力（液面距耳动脉约60cm左右）、灌流速度（30～40滴/min），保持温度在38±0.5℃。待稳定一段时间后，即可通过灌流器给予药物，观察药物对血管的直接作用。 6．离体气管标本制备（1）常用的离体气管标本有那几种？有①气管片；②气管环；③气管连环；④气管螺旋条；⑤气道弹环标本；⑥完整气管。（2）怎样制备离体气管片标本？在常用的实验动物中，豚鼠的气管对药物的反应较其他动物敏感，而且更接近于人的气管，因此豚鼠的气管是最为常用的标本。取 200~400g体重的豚鼠 1 只，用硬器猛击豚鼠后头延髓部，致其昏迷后立即使其成仰卧位，切开颈部正中皮肤和皮下组织，细心分离出气管，自甲状软骨下剪取全部气管，放入盛有冷克­亨氏液的平皿中，剪除气管周围的结缔组织。然后在气管的腹面（软骨环面）纵形切开，再以 2～3 个软骨环的间隔横切，将取下的气管平分 2～4 段，每段气管片在气纵切口处用缝线缝上，相互连成一串，即成气管片标本，供实验用。（3）怎样制备离体气管螺旋条标本？答：同上剪取豚鼠气管，置于冷冷克-亨氏液中，把周围的结缔组织剪干净，从气管的一端向另一端螺旋形剪成条状，每2～3个软骨环剪一个螺旋条。（4）怎样制备离体气管环标本？答：同上取气管。取下气管后将其横切成宽度相近的 6～10 个环，并用丝线将 3～5 个环相互缝合成一串，方予离体器官浴槽中进行实验。随着科技的发展，描记手段的不断更新，使得描记用仪器的灵敏度大大提高，因此各气管片、气管环等标本所用的的片数或环数大大减少，用单片或单环即可描记。常见人类基本疾病动物模型复制在医学研究中，利用动物复制人类疾病动物模型（animalmodelsofhumandiseases）是常用的方法。借助于动物模型，可以较方便的研究人类疾病发生发展的规律，并寻找有效的治疗方法。 1. 水和电解质代谢紊乱动物模型用 10% 乌拉坦按 10ml/kg 体重注入家兔或豚鼠耳缘静脉麻醉,并仰卧固定。分离颈总动脉并插管。将心电图机各针形电极按导联线标志色分别插入四肢踝部皮上 : 右前肢(红), 左前肢(黄), 右后肢(黑), 左后肢(绿) 。打开心电示波器 , 选择 II 或 aVF 导联描记心电图。若此时 T 波高于 0.15V, 宜改用其他导联。若其他