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中华人民共和国国家标准GBGBGBGB14963—2011食品安全国家标准蜂蜜中华人民共和国卫生部发布2011-04-20发布2011-10-20实施GB14963—2011I前言本标准代替GB14963－2003《蜂蜜卫生标准》以及GB18796－2005《蜂蜜》中的对应指标。本标准与GB14693－2003相比主要变化如下：——修改了范围；——增加了蜂蜜的定义；——将原料要求改为蜜源要求，并明确主要的有毒蜜源植物品种名称；——修改了感官要求；——修改了理化指标；——增加了污染物限量、兽药残留限量、农药残留限量要求；——增加了嗜渗酵母计数要求。GB14963—20111食品安全国家标准蜂蜜1范围本标准适用于蜂蜜，不适用于蜂蜜制品。2术语和定义蜂蜜蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。3技术要求3.1蜜源要求蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露应安全无毒，不得来源于雷公藤（TripterygiumwilfordiiHook.F.）、博落回[Macleayacordata(Willd.)R.Br]、狼毒（StellerachamaejasmeL.）等有毒蜜源植物。3.2感官要求感官要求应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽依蜜源品种不同，从水白色（近无色）至深色（暗褐色）按SN/T0852的相应方法检验滋味、气味具有特有的滋味、气味，无异味状态常温下呈粘稠流体状，或部分及全部结晶在自然光下观察状态，检查其有无杂质杂质不得含有蜜蜂肢体、幼虫、蜡屑及正常视力可见杂质（含蜡屑巢蜜除外）3.3理化指标理化指标应符合表2的规定。GB14963—20112表2理化指标项目指标检验方法果糖和葡萄糖／（g/100g）≥60GB/T18932.22蔗糖／（g/100g）桉树蜂蜜，柑橘蜂蜜，紫苜蓿蜂蜜，荔枝蜂蜜，野桂花蜜≤10其他蜂蜜≤5锌（Zn）／(mg/kg)≤25GB/T5009.143.4污染物限量污染物限量应符合GB2762的规定。3.5兽药残留限量和农药残留限量3.5.1兽药残留限量兽药残留限量应符合相关标准的规定。3.5.2农药残留限量农药残留限量应符合GB2763及相关规定。3.6微生物限量微生物限量应符合表3规定。表3微生物限量项目指标检验方法a菌落总数／（CFU/g）≤1000GB4789.2大肠菌群／（MPN/g）≤0.3GB4789.3霉菌计数／（CFU/g）≤200GB4789.15嗜渗酵母计数／（CFU/g）≤200附录A沙门氏菌0/25gGB4789.4志贺氏菌0/25gGB/T4789.5金黄色葡萄球菌0/25gGB4789.10a样品的分析及处理按GB4789.1执行。GB14963—20113附录A嗜渗酵母计数A.1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：A.1.1恒温培养箱：25℃±1℃。A.1.2冰箱：2℃～5℃。A.1.3均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。A.1.4天平：感量0.1g。A.1.5无菌试管：18mm×180mm。A.1.6无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度），10mL（具0.1mL刻度），或微量移液器及吸头。A.1.7无菌锥形瓶：500mL，250mL。A.1.8无菌培养皿：直径90mm。A.1.9无菌L型涂布棒：玻璃、塑料或者不锈钢材料制成，棒体直径不应大于2mm。A.1.10显微镜：10×～100×。A.2培养基和试剂A.2.130％葡萄糖溶液（pH6.5±0.5）A.2.1.1成分无水葡萄糖30.0g蒸馏水100mLA.2.1.2制法称量适量葡萄糖，溶解在蒸馏水中，必要时调节pH为6.4左右。分装后，115℃高压灭菌20min。A.2.2氯硝胺18%甘油（DG18）琼脂A.2.2.1成分酪蛋白胨5.0g无水葡萄糖10.0g磷酸二氢钾1.0g硫酸镁（MgSO４·H２O）0.5g氯硝胺0.002g无水甘油200g琼脂15g氯霉素0.1g蒸馏水1000mLA.2.2.2制法除氯霉素外，将全部成分加热煮沸至完全溶解，如有必要，调节pH为6.4左右。加入抗菌素，121℃高压灭菌15min，最终的pH应为5.6±0.2。灭菌后，立即在44℃～47℃水浴冷却至50℃以下，在每个灭菌平皿中倾注大约15mL～20mL培养基，放置在水平的台面上冷却固化备用。如有必要，可以放在36℃培养箱中过夜，使琼脂表面干燥无水珠。避光保存。A.3检验程序嗜渗酵母检验程序见图A.1。GB14963—20114图A.1嗜渗酵母检验程序图A.4操作步骤A.4.1样品采集和保存样品采集后，应尽可能及时检验。若不能及时检验，普通样品应置2℃～5℃冰箱保存，在24h内检验。冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2℃～5℃不超过18h解冻。A.4.2样品稀释A.4.2.1取样以无菌操作在天平上称取固体或液体检样25g，加入30％葡萄糖稀释液225g，用旋转刀片式均质器以8000r/min均质1min，或拍击式均质器拍击2min，制备成1:10的均匀稀释液。如无均质器，则将样品放入加有玻璃珠的无菌锥形瓶中，并充分振荡。A.4.2.2梯度稀释用灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL30％葡萄糖稀释液的试管内，置于漩涡混悬仪上混匀，制备1:100的稀释液。另取1mL灭菌吸管，按前操作依次制备10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。A.4.3涂布和培养A.4.3.1根据对检样污染情况的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度接种2个DG18琼脂平板。在充分混合稀释液之后，立即在每个平板表面接种0.1mL，接着用无菌的L型涂布棒进行充分的琼脂表面涂布。注意涂布棒下端不得触碰培养皿的侧缘。进行样品检验的同时，应同时在2个DG18琼脂平板表面接种0.1mL的稀释液作为空白对照。A.4.3.2接种完成后，尽快将全部平板置25℃±1℃恒温箱内避光培养。培养时勿翻转培养皿。为防止出现霉菌的过度蔓延生长掩盖了目标菌落，在培养48h后，即开始每日观察平板上面真菌生长情况。培养7d结束。A.4.4菌落计数A.4.4.1选择菌落数量在15～150之间的平板，计数菌落数量。25℃±1℃，5d～7d样品25g＋225g30％葡萄糖溶液，充分振荡或均质10倍系列稀释报告选择2个～3个适当稀释度，各0.1mL涂布2个DG18琼脂菌落计数。根据需要，显微镜下观察可疑菌落GB14963—20115A.4.4.2典型的嗜渗酵母在DG18琼脂平板上呈现为圆形、中心隆起、不透明、边缘整齐的菌落，直径1mm～2mm。必要时，可利用低倍显微镜直接观察平板上生长的菌落是否为细菌菌落。如出现霉菌菌落干扰时，不应计数丝状菌落。A.4.5报告参照GB4789.2的报告方式，以CFU／g为单位报告样品中嗜渗酵母的数量。