搜索
华润三九医药股份有限公司CRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第1页/总6页标题Waterse2695型高效液相色谱仪标准操作程序起草日期颁发部门：研发事业部页数审核日期分发部门：QA审核日期批准日期生效日期变更记载：原文件号批准日期生效日期变更原因及目的：文件系统修订。1目的：Waterse2695型高效液相色谱仪的一般标准操作程序。2范围：Waterse2695型高效液相色谱仪。3责任人：相关实验人员4设备部件及名称4.1Waterse2695分离单元．4.22998型二极管阵列检测器．4.3Empower色谱工作站．各部件可独立操作或通过色谱工作站控制，色谱数据处理由色谱工作站完成，其操作系统为WindowsXPProfesionalSP3，工作站软件为色谱管理软件。5标准操作程序5.1开机前准备5.1.1检查桌面是否清洁、整齐。5.1.2检查设备是否清洁，连接管线是否正常，色谱柱是否需要更换。5.1.3检查电源线有无破损。5.1.4接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。5.1.5准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比便例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。如需使用，应重新过滤。流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。5.1.6准备样品。为延长层析柱使用寿命，建议使用流动相溶解样品，如果不是，一定要做预试验，确保样品在流动相溶液中不出现沉淀。如果样品中成份复杂，特别含有强保留成分，建议过C18小柱预处理。样品在进样前必须经0.45μm的微孔滤膜滤过，根据溶剂性质选择合适的滤膜。过滤完毕华润三九医药股份有限公司CRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第2页/总6页后，置于样品盘上，记录样品所放的位置号。5.2开机接通稳压电源，待电压稳定在220V时，依次打开下列仪器的电源：高压泵、柱箱、系统控制仪、色谱工作站。接通2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约1min后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。5.3溶剂管理系统的准备5.3.1流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【Menu/Status】，进入“Status（1）”屏幕。5.3.1.1湿启动在“Status（1）”屏幕下，光标选“Compomtion”中欲使用的流动相，输入流动相组成及比例，按【Enter】再用光标选“Degasser”中的“Normal”，按【Enter】。按【DirectFunction】，光标选“WetPrime”，输入流速及时间，按【OK】。5.3.1.2当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时，进行干启动。在“Status（1）”屏幕下，按【DirectFunction】，光标选“DryPrime”，按【Enter】，显示“DryPrime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA】，光标选“Duration”，按数字键输入5min，按【Continue】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。5.4样品管理系统的准备5.4.1冲洗自动进样器在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”，输入流动相的组成。按【DirectFunction】，光标选“PurgeInjector”，按【Enter】，显示“PurgeInjector”屏幕，输入“SampleLoopVolumes6.0”，光标下移“CompressionCheck”，按任意数字键，按【OK】。5.4.2冲洗进样针在主屏幕下，按【Diag】，显示“Diagnositcs”屏幕，按【PrimeNdlWash】，显示“PrimeNeedleWash”屏幕，按【Start】，30s内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit】。5.4.3冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【Diag】，显示“Diagnosities”屏幕，按PrimeSealWash，显示“PrimeSealWash”屏幕，按【Start】，待排放口有水流出，按【Halt】、【Close】、【Exit】。5.4.4装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“DoorisOpen”屏幕，装入样品盘，按【Next】，直至所有样品盘装毕，关仓门。5.5Empower色谱工作站操作5.5.1登录点击桌面上Empower图标，出现Empower登录窗口，输入用户名和密码，然后单击“确定”，进入Empower。每次登录前必须输入用户名和密码。注：出厂设置的用户名为system，密码为manager。5.5.2项目管理5.5.2.1新建项目：双击“配置系统”进入，按“新建项目向导”提示建立新项目。注：项目名中不能出现空格。可使用下划线(_)分隔词。另外，名称不能以数字开头。项目是方法、结果、自定义字段、视图筛选器和原始数据的集合，由用户定义。该集合驻留在Empower数据库中并在“浏览项目”中显示。项目是为了方便用户归类、管理和检索相应的数据，应根据实际情况来决定是否建立，并不是每次开机都要创建。5.5.3数据采集5.5.3.1双击“运行样品”进入，在出现的页面的左框中选择欲存储采集数据的“项目”，在右框中选择所需的色谱系统，然后单击“确定”。5.5.3.2出现“运行样品”窗口后，选择“单一”或“样品”表单画面中的“创建方法组”快捷键，出现新华润三九医药股份有限公司CRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第3页/总6页方法组－选择仪器方法窗口。可以在现有的仪器方法中选择一个或者单击“新建”来创建新的仪器方法。如果单击了“新建”，会出现仪器方法编辑器。窗口会为所选色谱系统中的每个仪器显示一个图标。选中不同的图标，即可编辑相应的仪器参数。请根据您的实验方法设置相应的每个仪器具体参数。编辑仪器参数完成后单击“文件”“另存为”，出现“保存仪器方法”对话框。输入仪器方法名，单击“保存”，保存该仪器方法。关闭“仪器方法编辑器”窗口。新建的仪器方法出现在仪器方法列表中。选中所要的仪器方法，单击“下一步”。出现“选择缺省方法”页。选择“处理方法”与“报告方法”（如尚未建立合适的方法，则接受默认设置），单击“下一步”，出现“命名方法组”页。输入方法组名（缺省设置成与刚建立的仪器方法名相同），必要时输入注释后，单击“完成”。回到运行样品窗口。5.5.3.3在“方法组”下拉菜单中选择欲使用的方法组，同时在下方的“仪器方法”下拉菜单中，选择欲使用的仪器方法。“监视器”键单击中“监视器”键，观察基线。5.5.3.4待系统平衡后，即可单击“停止”键，终止观察基线。随后等到系统空闲后，设定采集的参数样品名、功能、样品瓶以及样品体积与运行时间，最后单击“进样”或“运行”，开始采集数据。进样时状态条会做出指示。色谱数据被采集并显示在“实时”图中。注：如果不知道运行时间，第一次进样应设长一些，如填60min，进样确认后，进第二针时再改回适合的时间。注：“方法组”栏中，默认会出现刚刚建立好的方法组的名称，如果需要选择其它已经建立过的适用的采集方法组，则可从此栏的下拉菜单中选中即可。5.5.4数据处理5.5.4.1单击鼠标左键进入“浏览项目”，选择欲浏览数据所在的项目，然后单击“确定”，进入该项目。5.5.4.2在“通道”选项卡中，选中欲修改的标准品和样品信息。注：在Empower进行处理时，只有标样能够生成校正曲线，然后才能对未知样进行定量计算。如果在进样时没有正确设置样品类型，可在此窗口直接进行修改。也可针对具体情况，修改样品名称、样品重量以及稀释倍数。5.5.4.3在“通道”选项卡中选择欲处理的数据，单击（查看）打开。出现“查看－主窗口”。单击（处理方法向导），出现“处理方法向导”对话框，选择“新建处理方法”，然后单击“确定”。按向导提示完成处理方法的建立并保存。积分并保存全部结果。5.5.5数据的打印5.5.5.1单击鼠标左键进入“浏览项目”。选择欲打印数据所在的项目，然后单击确定，进入该项目。在“结果”选项卡中选择欲打印的结果，单击（预览出版）。注：如果在非“结果”选项卡（例如通道）中单击预览出版，则无法查看到积分结果。5.5.5.2出现“打开报告方法”对话框，选择“使用对选中的数据适用的报告方法”，或者在“使用以下的报告方法”下拉菜单中选择适当的报告方法，然后单击“确定”。此时若选择“峰综合报告”格式，可计算峰面积/保留时间的重现性等统计信息。如果只需要峰面积等信息，则可选择“缺省单个报告”。5.5.5.3在屏幕上即出现报告预览窗口，如预览后无误，单击（打印），打印报告。如果想批处理打印，可以在“项目”窗口中，点击“结果”标签，用“键盘Ctrl＋鼠标左键”选黑要出报告的样品，单击（打印）在随后出现的“后台处理及生成报告”页面中（见下图），确认“打印”方框中打勾，“处理”和“导出”方框中为空。选中‘使用指定的报告方法’，在其下拉菜单中选择所需的报告方法，点击‘确定’即可。5.6关机5.6.1数据采集完毕后，关闭检测器电源开关。华润三九医药股份有限公司CRSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.,Ltd.第4页/总6页5.6.2使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫，确保2695分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源开关。5.6.3处理数据并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关，并做使用登记。6注意事项6.1更换溶剂时，若液体流路中有气泡，可用注射器抽吸，彻底排除气泡6.2流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。6.3柱温箱一旦发生报警，一定要及时找到原因。若实验室湿度太高，则需采取相应的除湿措实。若柱温箱中发生漏液现象，则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液，长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传感器。6.4紫外检测器要“晚开、早关”，在流通池有溶液连续流动几分钟后方可开启。若不需要做样，可设置一个较低的流速（如0.05ml/min）。如果流动池中有气泡，则会提示漂移过大无法通过自检和校正。7维护保养规程7.1检查HPLC的日常操作条件：7.1.1检查温度：10—30℃；7.1.2检查相对湿度：＜80%7.1.3检查稳压电源是否正常工作；7.1.4检查线路连接是否正常；7.2泵的保养：7.2.1泵的排气:先拧松排气阀，用注射器将气泡抽出，反复进行直到气泡完全排出。7.2.2应尽量避免泵在很高的压力下长时间操作。7.2.2.1当泵出现压力明显高于正常值的情况，应先拆卸掉在线过滤器再连接好流路，观察泵压读数，若泵压读数依然很高，则在线过滤器没有堵塞。预柱、分析柱同样处理。发现哪个部件有堵塞则拆卸掉超声清洗20min，再连接好流路。7.2.2.2当泵压力不稳定时，需要将单向阀拆卸掉用异丙醇超声清洗20min。7.2.3溶剂过滤头要经常超声、清洗；每星期一次。7.2.4泵本身没有在线自清洗功能，需要将注射器吸满10%甲醇并连在泵的软管上对泵进行多次清洗。每星期清洗一次。7.3柱的保养：7.3.1新柱子在使用前一定要写上启用日期。7.3.2分析测定结束后，要用适当的溶剂来清洗柱。7.3.2.1若流动相中不含盐、酸和碱则用纯甲醇冲柱30min。7.3.2.2有盐、酸和碱则先用10%甲醇至少冲30min,再用纯甲醇冲30min。7.3.3在线过滤器要定时拆卸超声清洗，每月清洗一次。7.3.4预柱（保护柱）应拆卸超声清洗，也可在纯甲醇为流动相下低流速的反冲，一个月清洗一次。7.