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Waterse2695高效液相色谱仪操作规程1目的指导和规范Waterse2695高效液相色谱仪的操作。2适用范围该操作规程适用于Watere2695高效液相色谱仪的操作。3职责检验员应按操作规程进行仪器操作，质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。4操作4.1仪器组成和开机4.1.1仪器组成本仪器由Waterse2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、WatersELSD2424蒸发光散射检测器、Empower3色谱工作站和打印机组成。Waterse2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气，可容纳120个样品瓶的自动分离单元，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘；显示器，键盘用户界面。4.1.2开机4.1.2.1依次接通Waterse2695分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。4.1.2.2接通Waterse2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约3mn内各部件的初始化完成，待主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。4.2溶剂管路系统的准备4.2.1流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu／Status】，进入“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”，按[Enter】。4.2.2灌注当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时，需进行干灌注(DryPrime)，注入流动相。否则，进行湿灌注(WetPrime)以驱除气泡。干灌注：按主机面板上[Menu／Status】，进入“Status(1)”显示，按[DirectFunction】，选择“DryPrime”，选溶剂通道，如OpenA，选“DurationIIi按数字键输入5分钟，按”COntinue”，待限定时间结束后，重复操作，使所需的溶剂通道注满流动相。湿灌注：进入“Status(1)”显示，选溶剂通道，输入100％，按[DirectFunction]，选“WetPrime”，按【OK】，根据面板提示设置流速及时间(默认流速为7．5ml／min，一般不用更改，时间可设置为5min)，按【0K】。4.3样品管理系统的准备4.3.1冲洗自动进样器在“status(1)”，屏幕下，光标选“Composition”，输入流动相的组成。按【DirectFunction]，光标选“PurgeInjector”，按【Enter]，显示“PurgeInjector”屏幕，输入“SampleLoopVolumes6．0”，光标下移“CompressionCheck”，按任意数字键，按【OK]。4.3.2冲洗进样针在主屏幕下，按【Diag]，显示“Diagnostics”屏幕，按【PrimeNdlWash】，显示“PrimeNeedleWash”屏幕，按[Start]，30s内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit】。4.3.3冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【Diag]，显示”Diagnostics”屏幕，按【PrimeSealWash】，显示“PrimeSealWash”屏幕，按[Start]，30s内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit】。待排放口有水流出，按【Half】、【Close】、【Exit】。4.3.4装入样品与转盘打开样品舱门，显示DoorisOpen屏幕，将样品盘取出，把样品瓶插入样品盘后，装入样品盘，按【Next】直至所有样品盘装毕，关好舱门。4.4色谱柱平衡换上检验所需的色谱柱和流动相，进入Status(1)”显示，选择流路、设定流速、柱温，按【Enter】开始注入流动相，通常情况下约15～30分钟色谱柱可达到平衡，可以开始进样，采集数据。5Empower3软件的应用5.1建数据采集方法5.1.1双击电脑屏幕上的Empower快捷图标，出现Empower登录界面，输入用户名和密码。5.1.2单击高级键，选择用户类型和QuickStart界面。5.1.3选择QuickStart界面，点击“确定”，然后选择选定的操作项目以及色谱系统(仅查看数据可选择色谱系统中的“没有系统”)，单击“确定”。5.1.4登录Empower的QuickStarlt界面。5.2编辑仪器方法和方法组（以e2695_2998为例）。5.2.1．采集栏单击“方法组编辑向导”：5.2.2选择“新建”选项。5.2.3弹出仪器方法编辑器。5.2.4单击“2695”，弹出2695编辑界面。5.2.4.1Aliance系统(包括2695、2795和2695D)通用编辑页面中，可选择“单次输送体积”，请针对不同的流速选定适当的单次输送体积，以确保最佳的流速精度与准度。5.2.4.2查看脱气选项，确认设置正确。5.2.4.3流量选项中设置“泵模式”、“总流量”以及流动相配比。5.2.5单击2998，弹出2998编辑界面。5.2.5.13D数据采集：在通用栏中选择启用3D数据，输入检测波长的范围；5.2.5.2采集2D数据，点击“2D通道”，最多可同时采集8个不同波长的通道的数据。5.2.6点击“文件”，选择“另存为”：输入仪器方法名称，点击“保存”；点击“文件”，选择“退出”。5.2.7在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步(N)”。5.2.8在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择“无处理”、“无报告”)，点击下一步。5.2.9输入方法组名称，单击“完成”。5.3进样点击进入“平衡系统／监视基线”界面，选择相应的仪器方法，点击“平衡／监视器，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击“进样”。5.3.1．单进样：点击，进入“定义单进样参数”编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数，点击“进样”。5.3.2使用向导建立样品组和样品组方法。5.3.2.1选择“运行样品”，然后单击“样品队列”，进入样品列表。5.3.2.2单击“新建样品组向导”，建立样品组。5.3.2.3选择创建样品组方法类型为“Lc或PDA”，然后点击“定义样品板”。5.3.2.4在“选择标准进样在那里开始”中选择合适的选项。检查开始加载样品瓶的位置是否正确，点击“下一步”。5.3.2.5在描述标样中需要设置一下内容：样品组中的标样数：×；每瓶标样进样次数：X；进样体积：x；运行时间：XX；方法组XXX；点击“选项”：输入下一进样延迟时间X；点击下一步。5.3.2.6样品数：X；每瓶样品进样次数：X；进样体积：X；运行时间：X；方法组X；点击选项：输入下一进样延迟时间X；点击下一步。5.3.2.7在识别标准样界面中，输入标样名称，增量后缀使用1．在识别样品界面中，输入样品名称，增量后缀使用a。点击下一步。5.3.2.8运行模式选项中选择“只测试”。查看摘要，点击下一步。【注：弹出组分编辑器，输入标样中每个组分的名称(内标不需要输入含量)。可以直接关闭该窗口，在处理数据的时候再添加】。5.3.2.9点击完成，在菜单栏中选择文件。5.3.2.10为方法组命名并保存样品组方法。5.3.2.11单击“样品队列”，打开运行样品窗口，点击运行当前样品组方法键，选择运行。5.3.2.11选择需运行的样品组名称，点击运行。5.3.2.13样品组运行过程中，在“正在运行”栏中正在运行以及运行完毕的样品以红色显示。(注：以向导建立的样品组首行功能一般为清除校正，一般在运行样品前删除该行或改为“平衡”。)5.4建立数据处理方法5.4.12D数据处理方法5.4.1.1单击“浏览项目”键，在“样品组”中选择目标样品组。5.4.1.2在样品组上点击鼠标右键选择“查看相关→通道”，样品组在单个通道中显示。5.4.1.3选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看，会显示未处理的色谱图形。5.4.1.4点击处理方法向导快捷键，选择创建新处理方法，点击确定。5.4.1.5确认处理类型为LC，积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，选择确定。5.4.1.6常按鼠标左键，选择色谱图上最窄峰。(注：在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰。点击鼠标右键全视图可以还原色谱图。)5.4.1.7在色谱图的积分界面选择一段典型基线作为积分的阈值，点击下一步。5.4.1.8常按鼠标左键，在基线上选取积分的起止时间点。5.4.1.9建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰(或键入相应数值)。小于此峰高90％的峰将不被积分。点击下一步。5.4.1.10定量方法选择面积，组分信息选择含量，校正类型选择线性。点击下一步。5.4.1.11跨通道内标样界面点击否。5.4.1.12因为选择的是标样，点击峰1可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运行样品相应的名称。添加组分名称相匹配的标准含量，然后点击下一步。5.4.1.13如果是多点校正样品，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。(单点校正可在这里添加含量)。5.4.1.14选择外标法：5.4.1.15选择单一内标样，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的名称，然后点击下一步。5.4.1.16选择多重内标需要输入所有内标的名称。5.4.1.17为处理方法命名，点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果，包括积分。5.4.1.18如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事件。积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。5.4.1.19编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。有任何更改均需再次保存处理方法。5.4.1.20点击峰表底部可预览2D通道和峰。5.4.1.21点击“浏览项目”键，选择“通道”或“样品组”标签栏，右键点击目标样品组或通道并选择处理。5.4.1.22在处理界面，选择使用指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清除校正，选择校正并定量。5.4.1.23点击确定，数据处理，产生结果。可在结果栏中查看。5.4.2建立3D数据处理方法5.4.2.1点击“浏览项目”键，在“样品组”中选择目标样品组。5.4.2.2在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组中各个数据在单个通道中显示。5.4.2.3选择定量最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看。5.4.2.4在预览界面选择“轮廓线”标签栏，会显示未处理的轮廓图。5.4.2.5从处理或右键下拉菜单中选择提取色谱选项。5.4.2.6键入所需要提取的波长，按回车键，得到该波长的色谱图。5.4.2.7点击处理方法快捷键，选择创建新处理方法，确认处理类型为PDA，积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，点击确定。5.4.2.8常按鼠标左键，选择色谱图上最窄峰。(注：在色谱图区域内可以放大某个需要监测的峰。点击鼠标右键选择全视图可以还原色谱图。)5.4.2.9在色谱图的积分界面选择一段平滑的基线作为积分的阈值，点击下一步。5.4.2.10常按鼠标左键，在基线上选取积分的起止时间点。5.4.2.11建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰(或键入相应数值)。小于此峰高90％的峰将不被积分。点击下一步。5.4.2.12定量方法选择面积，组分信息选择含量，校正类型选择线性。点击下一步。5.4.2.13跨通道内标样界面点击否。5.4.2.14因为选择的是标样，点击峰1可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运行样品相应的名称。添加组分名称相匹配的标准含量，然后点击下一步。5.4.2.15如果是多浓度点的一组标样，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。(单一浓度可以在这里添加含量)。5.4.2.16选择外标法：5.4.2.17选择内标法单一内标样校正，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的名称，然后点击下一步。5.4.2.18选择多重内标需要输入所有内标的名称。5.4.2.19PDA纯化及匹配选项：5.4.2.20为处理方法命名，点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果，包括积分。5.4.2.21在“文件”下拉菜单中选择“另存为”方法组，将该处理方法存入方法组。(注：3D数据必须用方法组处理。)5.4.2.22如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，