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动物细胞工程2.2.2.动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合：2、原理：细胞膜具有一定的流动性1、概念：《选修3》P.52动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。诱导方式物理法：化学法：生物法：灭活的病毒（特有的方法）3、过程：（与植物细胞融合的基本原理相同）离心、电激、振动聚乙二醇细胞完成融合的标志：细胞核融合为一个核融合后形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，成为杂交细胞意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能5、动物细胞融合的应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段制备单克隆抗体（重要应用）主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）生物：灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法用胰蛋白酶处理使细胞分散后诱导细胞融合酶解法去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较二、单克隆抗体：⑴其由何种细胞产生？⑵主要分布在哪里？⑶如何得到抗体？提问？关于抗体抗原动物体内抗体刺激效应B细胞不仅产量低、纯度低而且制备的抗体特异性差，灵敏度低抗原不纯抗体不纯筛选单一的效应B细胞（但不能在体外大量增殖产生大量的抗体）抗原动物体内抗体刺激效应B细胞B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因1、每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，不同种类的B淋巴细胞分泌的抗体不同2、B淋巴细胞在体外培养时不能无限增值，骨髓瘤细胞能够无限增值制备单克隆抗体1、原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能产生足够数量的单一抗体。2、单克隆抗体的制备过程：获得杂交瘤细胞动物细胞培养提取单克隆抗体①将抗原注入小鼠体内获得效应B淋巴细胞②效应B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合③用特定培养基筛选出杂交瘤细胞①筛选能够产生所需抗体的细胞群②再在培养液或小鼠腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取细胞融合后培养液中有几种细胞B细胞、骨髓瘤细胞B与B融合、瘤瘤融合自身融合的细胞：未融合的细胞：杂交瘤细胞：B细胞与骨髓瘤细胞融合5种在整个制备的过程中要经过几次筛选？Ⅰ筛选得到杂交瘤细胞，Ⅱ筛选先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞下培养筛选出特异抗体的细胞群3、单克隆制备过程中用到的生物技术手段动物细胞融合动物细胞培养4、单克隆抗体的应用:应用:疾病的诊断、治疗和预防。优点:特异性强、灵敏度高，产量大实例:①各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌及血吸虫等数百种疾病的诊断；②在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士,能识别“自己”与“异己”，一旦发现致病因素便与之结合将其杀死。③若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。