微生物的鉴定思路

关于微生物的鉴定革兰氏染色初步分类非苛养菌鉴定苛养菌鉴定真菌的鉴定革兰氏染色[原理]革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说。[标本处理]1.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。2.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm离心10min.，取沉渣涂片染色。[报告方式]：革兰氏染色：检出G+球菌；G-球菌;检出G+杆菌；G-性杆菌革兰氏染色[注意事项]1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。2．玻片通过火焰温度不能太高。3．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不在出现紫色为止。[临床意义]通过革兰氏染色，将细菌分初步为革兰氏阳性和革兰氏阴性，便于临床治疗细菌的初步分类1、细菌的分离与纯化：自血平板挑出待检菌株的单菌落进行初步的鉴定。如果混有杂菌，应该重新转种分纯。2、染色与镜检：首先通过革兰氏染色确定基本的分类：（1）G+球菌（2）G-球菌（3）G-杆菌（4）G+杆菌。此外，如果镜下发现革兰氏染色阳性、椭圆形、有芽孢状的较大菌体，可能是真菌。临床标本中分离出较多的是G-杆菌中的肠杆菌、非发酵菌和G+球菌中的葡萄球菌、链球菌、肠球菌。G-球菌中的奈瑟氏菌亦常分离出，尤其在泌尿生殖系统标本中常见。细菌的初步分类1.触酶试验主要用于G+球菌的分类。葡萄球菌属：触酶（+）链球菌属及肠球菌：触酶（-）2.氧化发酵试验（O-F试验）根据细菌在无氧环境中能否利用碳源将细菌分为非发酵菌（氧化型或产碱型）和发酵菌（兼性厌氧菌）。G（-）杆菌中的肠杆菌O-F试验阳性，非发酵菌O-F试验阴性3.氧化酶试验主要用于G-杆菌的分类。肠杆菌的氧化酶（-），非发酵菌多数氧化酶（+），但嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌的氧化酶（-）。非苛养菌的鉴定主要有G+球菌、G+杆菌、G-球菌和G-杆菌这些细菌培养的条件不苛刻，这也是标本分离常见的细菌苛养菌的鉴定也相对比较简单，只要根据初步的分类，遵循其鉴定的途径，就可以做出完整的鉴定结果G+球菌的鉴定途径1.首先根据菌落特点和革兰氏染色判断是否为G+球菌。2.根据触酶结果判断为葡萄球菌or链球菌（肠球菌）（+）葡萄球菌菌落特点和G染色G+C触酶（—）链球菌和肠球菌葡萄球菌的鉴定1.对于葡萄球菌的鉴定首先根据G染色和触酶实验确定2.根据菌落特点、是否溶血及特点，初步判断是否需要做Co+：金黄色葡萄球菌Co实验—：其他葡萄球菌系列生化结果判断葡萄球菌到种NOTE：对于所有葡萄球菌都要判断其是否为MRS，以指导临床用药。链球菌的鉴定首先根据G染色和触酶结果确定为链球菌，然后再根据细菌的溶血情况和菌落特点判断鉴定途径G+C触酶（—）溶血性α溶血β溶血γ溶血Optochin杆菌肽cAMP胆七胆七RSSSS+--胆七肺链A群链球菌B群链球菌D群链球菌D群链球菌草绿色6.5%NaCl--+非肠球菌肠球菌肠球菌的鉴定根据G染色和触酶初步判断，再据生化和药敏结果鉴定到种G+C、触酶-胆七、高盐+氨苄西林敏感实验SR粪肠球菌屎肠球菌需氧G+b的鉴定根据G和抗酸染色（A）将其分为：A+：分支杆菌、奴卡氏菌A-：李斯特菌属，芽胞杆菌属、棒状杆菌属、乳酸杆菌属、丹毒丝菌属等需氧G+b的鉴定各属间鉴定，通过触酶和动力试验加以初步确定1、触酶（+）：动力（+）：李斯特菌属，芽胞杆菌属（大）动力（-）：棒状杆菌属2、触酶（-）：动力（+）：乳酸杆菌属（少）动力（--）：乳酸杆菌属，丹毒丝菌属需氧G+b的鉴定各属间鉴定，根据一些染色（G、A等）特点可初步判断1.棒状杆菌属：G+杆菌、菌体细长、无芽胞、无鞭毛、多形性、菌体染色不同，有异染颗粒2.产单核细胞李斯特菌：4°C可生长、有狭窄ß溶血与链球菌区别：触酶（+）3.红斑丹毒丝菌：无鞭毛，无芽胞，无荚膜、分解Glu乳糖、H2S（+）4：乳酸杆菌：触酶（-）、动力（-）、磺胺药物R青霉素S5：其他芽孢杆菌：注意这些细菌均有芽孢需氧G+b的鉴定分枝杆菌属：营养要求高，一般生长缓慢、有耐酸性，抗酸染色。奴卡氏菌：G+丝状，部分抗酸，有菌丝体、菌落粗颗粒状，边缘陷入培养基，表面干燥。灰白或淡黄色、溶菌酶：++G-C球菌G-C的致病菌主要有：奈瑟氏球菌和布拉汉氏菌，G均为双球菌，其氧化酶和触酶都为阳性1：奈瑟氏球菌：营养要求比较高而且适宜温度为35°C，硝还阴性2：布拉汉氏菌：营养要求不高，在18-42°C均可生长，硝还阳性。G-杆菌的鉴定G-杆菌为临床分离最多的细菌、其鉴定也相对成熟，目前有多种鉴定方法1.首先要根据G染色确定为G-杆菌，G-杆菌在Mac上能够生长（注意肠球菌在该培养基上也生长），一般它们对培养条件要求都较低2.个别细菌可以通过菌落特点判断，如Pae、Kpn等G-杆菌的鉴定程序G染色G-bOF实验和氧化酶实验OF（±）（-）OF（+）（+）OF（+）（+）ox（+）ox（-）ox（+）非发酵型细菌肠杆菌科弧菌科NOTE：对非发酵细菌中，不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌，其OX均为阴性G-杆菌的鉴定1.对于肠杆菌科细菌一般都要求判断是否产ESBL（ＥxtendedSpectrumβ-lactamasses)2.G-杆菌药敏结果可以帮助验证细菌鉴定的准确性，如奇异变形杆菌对于四环素、沙雷氏菌对于头孢唑林、嗜麦芽窄食单胞菌对泰能具有天然耐药性3.对于肠杆菌科的细菌，有的需要做血清学实验，如志贺氏和沙门氏的鉴定苛养菌的鉴定1.苛养菌主要是指营养要求高，培养条件比较苛刻，不容易培养。2.苛养菌在临床上涉及到的主要有：流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、奈瑟氏菌、布拉汉氏菌、军团菌等3.有一些特殊的实验可帮助苛养菌的鉴定，一些选择性培养基可帮助细菌的鉴定。苛养菌的鉴定嗜血杆菌的鉴定：1.该菌只能在营养条件高的巧克力平板上生长，菌落为圆形、无色、透明2.该菌生长需要X、V因子，因此利用卫星实验就可以帮助鉴定（副流感只需V因子，杜克氏只需X因子）3.该菌的药敏实验为HTM平板苛养菌的鉴定肺炎链球菌的鉴定1.该菌呈矛头状、成双排列，菌落为草绿色溶血，脐窝状2.该菌通过optochin敏感实验得到鉴定3.该菌的药敏实验平板为血平板，放CO2环境真菌的鉴定分类鉴定原则1:是否具有有性生殖过程，能否形成子囊孢子,具有掷孢子或冬孢子,以及孢子的形状,特点,数目以及能否形成真假菌丝分类到纲,目,科.2:根据菌落形态,细胞形状,增殖方式是否形成真假菌丝,结合少数糖类发酵和硝酸盐利用等试验分类归属.3:根据生理特征,其中糖的发酵和同化试验最为重要,利用硝酸盐分类到种.真菌的鉴定1.真菌可以通过沙包氏培养基选择性培养2.可以通过水片在较暗的视野下观看，G染色为G+，菌体较大3.通过芽管实验鉴定出Cal，该菌占真菌分离的80%以上4.CSF标本通过印度墨汁染色可以初步判断为新隐球菌5.其他真菌可通过生化实验鉴定到种6.曲霉菌（丝状菌）的鉴定厌氧菌的鉴定1.培养：建立一个无02环境2.分离方法：非选择培养基，要求降低氧化一还原电势。eg:L一半胱氨酸，硫乙醇酸钠。美兰监测厌氧袋是否漏氧：美兰：兰色or无色——无氧；变红，有氧，重新使用3.耐氧实验初步鉴定厌氧菌。4.染色注意有无芽胞5.厌氧菌的鉴定