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GB大肠菌群计数2大肠菌群(coliforms)的检验•大肠菌群：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。•该菌群主要来源人的粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。•检验方法：1、MPN法；2、平板计数法3大肠菌群大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠埃希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。4《GB/T4789.3-2010食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》•第一法：MPN法5GB/T4789.3-2010大肠菌群(coliforms)检测MPN法的解决方案用途GB使用的培养基（中文名称）GB使用的培养基（英文名称）Oxoid英文名称Oxoid中文名称货号规格初发酵月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤Laurylsulfatetrypose,LSTLaurylTryptoseBroth（LaurylSulphateBroth）月桂基胰蛋白示肉汤（月桂基硫酸盐肉汤）CM0451B500gCM0451R2.5kg复发酵煌绿乳糖胆盐肉汤BrilliantgreenlactoseBile,BGLBBrilliantGreenBile2%Broth煌绿2%胆盐肉汤CM0031B500g6结果观察•6.2初发酵试验•每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。•6.3复发酵试验•用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。7《GB/T4789.3-2010食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》•第二法：平板计数法8GB/T4789.3-2010大肠菌群(coliforms)检测平板计数法的解决方案用途GB使用的培养基（中文名称）GB使用的培养基（英文名称）Oxoid英文名称Oxoid中文名称货号规格计数结晶紫中性红胆盐琼脂Violetredbileagar,VRBAVioletRedBile(Lactose)Agar紫红胆盐（乳糖）琼脂CM0107B500gCM0107R2.5kgCM0107T5kg证实煌绿乳糖胆盐肉汤BrilliantgreenlactoseBile,BGLBBrilliantGreenBile2%Broth煌绿2%胆盐肉汤CM0031B500g9结果观察•8.3平板菌落数的选择选取菌落数在15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。•8.4证实试验从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h～48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。10Brilliance™大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基•用于食品、水和环境样本中的大肠杆菌和大肠菌群的检测•大肠杆菌/大肠菌群显色琼脂：CM1046B制成培养基：BO8004M(100ml/瓶);BO8004T(250ml/瓶);BO8004V(500ml/瓶);•原理：培养基中含有两种显色底物Rose-Gal(检测β-半乳糖苷酶)和X-Glu(检测β-葡萄糖醛酸酶)•使用方法：采取涂布法、倾注法或滤膜法均可；37°C培养24h11Brilliance™大肠杆菌/大肠菌群选择性显色培养基操作流程：