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宁波大学生命科学与生物工程学院2000年7月一．浮游植物定量调查（一）采样点的选择由于水面大小、水深、水流等条件不同，不同水域的采集点选择也有差别，有条件时采样点可适当多设一些，一般情况下建议下列位置应设采样点：水库库心区、各湖区的中点、上游、下游、水库大坝附近及库（湖）湾等有代表的区域。（二）采样层次、采水量及采样次数①凡水深不超过二米者，可于采样点水下0.5米处采水。②水深2-10米以内,应于距库底0.5米处另采一个水样。③水深超过10米时，应于中层处增采一个水样。深水湖泊、水库可根据具体情况确定采样层次。采样次数可多可少，有条件时可逐月采样一次，一般情况可每季采样一次，最低限度应在春季和夏未秋初各采样一次。每一采样点应采水1000毫升，如系一般性调查，可将各层所采水样等量混合，取1000毫升水样固定；或者分层采水分别计数后取平均值。分层采水可以了解每一采样点各层水中浮游植物的数量和种类。采得水样后应立即加入15毫升碘液（即鲁哥氏液）固定（鲁哥氏液配制方法：将6克碘化钾溶于20毫升水中，待其完全溶解后，加入4克碘充分摇动，待碘全溶解后加入80毫升水即可）。采水器，各种采水器均可，但一定要能分层采水，一般水深不超过10米可用1000毫升或1500的玻瓶采水器，水更深(如海洋)必须用颠倒采水器、北原式采水器或其它形式的采水器。（三）沉淀与浓缩以采水器采得水样后，须经浓缩沉淀方适于研究和保存。凡以碘液固定的水样瓶塞要拧紧，还要加入2-4%的甲醛固定液以利保存。定量水样应放入1000毫升分液漏斗中，静置24-36小时后，用内径为30毫米的橡皮乳胶管，接上橡皮球，利用虹吸法将沉淀上层清液缓慢吸出（切不可搅动底部，万一动了应重新静置沉淀），剩下30-50毫升沉淀物，倒入定量瓶中以备计数。为不使漂浮水面的某些微小生物等进入虹吸管内，管口应始终低于水面，虹吸时流速流量不可过大，吸至澄清液1/3时，应控制流速流量，使其成滴缓慢流下为宜。采水时，每瓶上都应贴好标签，写明时间、地点、站号、样品号、水层、温度等内容，同时记录卡片以致备查。（四）计数将浓缩沉淀后水样充分摇均后，吸出0.1毫升，置于0.1毫升计数框内（表面积最好20×20平方毫米）在400-600倍显微镜下观察计数，每瓶标本计数二片取其平均值，每片大约计算100个视野，但视野数可按浮游植物多少，而酌情增减；如果平均每个视野有十几个细胞，数50个视野就可以了；如果平均每个视野只有5-6个，就要数100个视野，如平均每个视野不超过1-2个时，要数200个视野以上，总之，每片计数的细胞总数应在1000-2000个以上，同一样品的二片计算结果和平均数之差如不大于其均数的15%，其均数视为有效结果，否则还必须测第三片，直至三片平均数与相近二数之差不超过均数的15%为止，这两个相近的值的均数，即可视为计数结果。计数过程中常可碰到某些个体的一部分在视野中，而另一部在视野外，可规定在视野上半圈者计数，下半圈者不计数，此外，数量最好用细胞数表示，对不可用细胞数表示的群体或丝状体，可求出其平均细胞数。计数时优势种类尽可能鉴别到种，其余鉴别到属。注意不要把微型浮游植物当作杂质而漏计。其他要求：1、校正计数框容积。2、定量用的盖玻片应以碱水或肥皂水洗净备用，用前可浸于70%酒精中，用时取出以细绢拭干。3、滴取样品以后最好用液体石腊封好计数框四周，以防计数过程中干燥。4、以台微尺测所用显微镜一定倍数下的视野直径。5、选取或自制好与计数框同样容积的吸管备用。6、定量时应将浓缩标本水样充分摇匀，快吸快滴。7、加上盖玻片后不应有气泡出现。8、计数后的定量样品应保存下来。一升水中的浮游植物的数量（N）可用下列公式计算：N=Cs/（Fs×Fn）×V/U×Pn式中：Cs---计数框面积（mm2）Fs---每个视野的面积Fn---计数过的视野数V---一升水样经沉淀浓缩后的体积（mL）U---计数框体积（mL）Pn---每片计数出的浮游植物个数如果计数的显微镜固定不变，Fn、V、U亦固定不变，公式中Cs/（Fs×Fn）×V/U用常数K代替，上述公式可简化为N=K×Pn（五）生物量的换算因为浮游植物中不同种类的个体大小相差较悬殊，用个体数或细胞数都不能反映水体丰欠的真实情况，且浮游植物的个体极小，除特殊情况外无法直接称重，一般按体积来换算。球形、圆盘形、圆锥形、带形等可按求体积公式计算。纤维形、多角形、新月形以及其它种种形状可分割为几个部分计算。由于浮游植物大都悬浮于水中生活，，其比重应近于所在水体水的比重即近于1。因此体积值（立方微米）可直接换算为重量值（109立方微米=1毫克）。由于同一种类的细胞大小可能有较大的差别，同一属内的差别就更大了，因此必须实测每次水样中主要种类的细胞大小并计算平均重量，其它种类可以参考附表1计算。定量结果应列出总生物量，各门生物量和优势种属。在条件许可时还可以用较简便的测定叶绿素法，来对照或代替生物量，但叶绿素法不能反应水体中的种类组成情况。浮游植物的平均重量，优势种（属）和次优势种（属）最好实测，这时可以从每次采集的样品中随机抽查10-20个细胞或个体测定其大小。一般种类可按附表1计算。表中所谓“大”、“中”、“小”是按该种类平均大小换算的，如果无法判定所见种类属于那一级时，可按“中”的计算。为了减轻镜视和计算时的工作量，避免在个别种属鉴定时的困难，对于种类很多而数量有限的微型浮游生物，也可以仅鉴定到门，再按下列大、中、小三级的平均重量计算生物量（单位：10-4毫克）：小的（如小球藻、小型栅藻细胞等等）-------------------------------------------------0.0005中的（如平裂藻群体、粉状微襄藻群体等等）----------------------------------------0.002大的（如衣藻细胞、栅藻群体等等）----------------------------------------------------0.005很多浮游植物的定量数据精细到百位、十位甚至个位，这种按推算得来的数字并无实际意义，建议有效数字用万位（必要时加小数点）即可。这样的数值与附表平均重量相乘即得出生物量的毫克数（免去10-4）。二．浮游动物调查（一）采样点的选择同浮游植物。（二）采样层次和采样次数同浮游植物（三）采样水量原生动物可用浮游植物采水器，采水一升即可，而轮虫、无节幼体、枝角类和桡足类则须用较大容积（2.5升）采水器，采10升水样用25号浮游植物过滤（亦可将此10升水样混合，先取出一升水样供浮游植物和小型浮游动物定量用，余者供过滤较大型浮游动物之用），定性水样可用13到18号定性浮游生物网，于采样点上进行水平拖曳，较大水体可将定性网缚于船上以慢速拖曳，时间一般为10-20分种，较小水体可将网缚于2米长的竹竿上，置网于水中，使网口在水下0.5米处作“∞”形拖曳以定性用。采水器：同浮游植物采水器(四)沉淀与浓缩1．计算原生动物，所采的一升水样加入15毫升碘液，带回实验室后放入1000毫升分液漏斗中静置沉淀24小时，然后按照浮游植物的浓缩方法，浓缩到10-20毫升（也可将浮游植物标本再浓缩到10-20毫升使用）。2．计算轮虫、无节幼体和甲壳动物（枝角类、桡足类）需采10升水样，于现场用25#浮游生物网过滤，浓缩样品集中于1000毫升的广品瓶中，并加入甲醛固定（每1000毫升样品中加入4毫升甲醛液）(五)计数1.原生动物将标本充分摇匀，吸出0.1毫升或0.5毫升注入相应大小的计数框中，盖上盖玻片，在中倍解剖镜下进行全片计数，每份样品计数2片，然后按浓缩的倍数换算成一升水中的含量。2.轮虫和无节幼体将标本充分摇匀，吸出0.5毫升注入相应大小的计数框中，盖上盖玻片，在中倍解剖镜下进行全片计数，每份样品计数2片，然后按浓缩的倍数换算成一升水中的含量。3.枝角类，桡足类计数时如果水样中二种生物数量不多（总数不超过几十个），可将全部浓缩样品进行计数。如果样品中数量极大也可将全部浓缩样品摇匀，用大吸管吸容量的25%以上置计算框中在低倍镜下计算全片。不过鉴于甲壳类沉淀极快，所以操作时须特别敏捷，否则影响计数。计数具体要求:①校正计数框容积,②将浓缩为一定体积的样品充分摇匀，用一定容积的吸管，边摇吸取（吸管容积、管口应略大于浮游植物定量用吸管）③盖上盖片不应有气泡出现。（六）工作要求1．各类浮游动物优势种尽可能鉴定到种。2．参考附表2算出各类浮游动物（原生动物、轮虫、无节幼体、枝角类、桡足类）的生物量。3．在计数原生动物、轮虫和无节幼体标本时，每份样品要求计数二片。两次实测值与平均数之差不得大于其均数的15%，否则还必须测第三片，直至三片平均数与相近二数之差不超过均数的15%为止，这两个相近的值的均数，即可视为计数结果。4．定量样品应保存下来，以备核查时使用。表2浮游动物各大类的平均重量（毫克）小型中型大型特大型原生动物0．00003轮虫0．00030．00080．0050．02枝角类0．020．050．21．3桡足类0．010．030．090．2注：1、枝角类和桡足类小型指约0.5毫米，中型指约1毫米，大型指约1.5毫米的个体；2、桡足类无节幼体为0.004毫克（不在表内），桡足幼体则按小型计。3、特大型轮虫心指晶襄轮虫等，枝角类和桡足类指2毫米以上种类。三、底栖动物的定量调查（一）采样点的选定采样点应选择那些代表水域特性的地区和地带，如水库、江河流入内的库湾部分，水库的近坝区、消落区、沉入水下的旧河床淹没的其它地段。要能反映整个水体中的基本状况，因此在选点之前，要根据湖泊、水库或水域的详细地形图，对其形成及环境进行了解，从而根据不同生境特点（如水深、底质、水生植物等等）设置断面和采样点，断面上设置采样点的多寡视环境而酌情增减，通常设断面必须考虑几个因素：如底质、水深、水生高等植物的组成，入水口、出水口、湖湾以及受污染地区等，一个水体究竟要设多少断面，多少采样点为适，是难以统一的，必须具体情况具体分析，每一断面以及断面上的每一采样点（如第五断面第五点用▽5表示）的位置都需标在地形图上，采集时可按图上编号顺序进行。（二）样品的采集和处理鉴于底栖动物生长、繁殖的速度和浮游动物比较相对地慢，所以一般情况下每季采样一次，最低限度应在春季和夏未秋初各采样一次，有条件时可在生长期内每月一次。底栖动物定量采集工具可以用以下二种：①带网夹泥器（面积为1/6平方米）是一种大型底栖动物夹网，用来采集软体动物的定量样品②蚌斗式采泥器（改良彼得生采泥器）（面积1/16或1/20平方米）用来采集昆虫幼虫和寡毛类以及小型软体动物。采样：到达采样点后，先填写底栖动物采集记录，依次测定天气，气温，水温（表、底层），透明度，水深，然后进行采样，再记录底栖及水生植物情况等。采样时每个采样点上大型和小型底栖动物各采2次样品，大型底栖动物夹网在采得样品后，将网放在水中剧烈涤荡，以洗去样品中的污泥（网口需保持紧闭），然后提到船上打开，检出全部螺、蚌、蚬放入广口瓶中，并贴上标签（写明地点、编号，日期）然后带回室内处理；小型底栖动物采泥器（蚌斗式采泥器）采得的泥样先倒入40目/吋的铜筛中，然后将筛底放在水中轻轻摇荡，洗去样品中的小污泥（若样品量多可分几次洗）最后将筛中的渣滓倒入塑料袋中，并放进标签，将袋口缚紧带回实验室分检。定量样品采完后，分别在积压采样点上采一定数量泥样作定性标本用（方法同上），除此还可在沿岸和亚沿岸带的不同生境中用抄网捞取一些定性样品一天采集工作结束后，应随即在室内进行小型底栖动物的分检工作，如在炎热天气应将样品放入冰箱（或冷瓶）内保存，否则会因虫体死亡或腐烂而造成工作上的损失。（三）室内工作室内工作是样品的分检和定量工作。将塑料袋内的样品倒入上述筛内，在自来水中再进行冲洗，直到污泥完全洗净然后将渣滓倒入白色大解剖盘内，加入清水，拈出水蚯蚓和昆虫幼虫，分别放入一个已装好固定液的指管瓶中（水蚯蚓用4-10%甲醛，昆虫用75%酒精固定）直至样品全部检完为止。标本需用小镊子、解剖