(PAS反应与联苯胺反应)

6实验三PAS反应与联苯胺反应一：实验目的：掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。二：实验原理：1、高碘酸—希夫试剂反应简称PAS（PeriodicAcidSchiffreaction）反应。组织内的多糖等都用PAS法来显示。其化学基础是利用过氧酸的氧化作用打开C—C键，将CH2OH—CH2OH变成CHO—CHO。同样，对CH2OH—CHO，CH2OH—COOH，CH2OH—CH2NH2等物质均有氧化作用而放出醛基，这种新生的醛基和无色品红作用形成紫红色化合物（见图1）。颜色的深浅与糖类的多少有关。2、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类化合物氧化为有色化合物（见图2），用联苯胺处理样本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为兰色的苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判断过氧化物酶的有无或多少。三：实验材料与试剂1.材料：土豆块茎、洋葱根尖或鳞茎表皮。2.器具：显微镜、载波片、单面刀片、培养皿、镊子、染色钵、盖玻片、吸水纸。3.试剂：（1）过碘酸酒精溶液：过碘酸（高碘酸）0.4g95%酒精35ml0.2mol/L醋酸钠5ml（即17.2g醋酸钠溶于1000ml蒸馏水）蒸馏水10ml该液需保存于冰箱，包黑纸，如变黄则失效。（2）Shiff试剂（详见指导书P75页）（3）0.1%钼酸铵溶液：称取0.1g钼酸铵溶于100ml0.85%盐水（4）联苯胺混合液（临用前配制）联苯胺0.2g95%乙醇100ml3%H2022滴（5）亚硫酸水溶液：取200ml自来水，加10ml10％的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml1mol/L的HCl，三者于使用前混匀。7（6）70％乙醇四：实验的方法和步骤1PAS反应（1）把马铃薯块茎徒手切成薄片，放入高碘酸溶液浸泡10min，用70%乙醇中浸片刻（2）将薄片浸入Schiff试剂染色15分钟（3）取出放入亚硫酸水中洗3次，每次1min(4)蒸馏水冲洗片刻，压片观察2.联苯胺反应（1）把洋葱根尖徒手切成20-40µm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块（2）浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5min（钼酸铵起催化作用）（3）浸在联苯胺溶液内2min至切片出现蓝色（4）在0.85%盐水溶液中洗1min（5）将薄片置于载玻片上展开，盖上盖玻片，显微镜检查五：实验结果1．PAS反应：块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色的淀粉颗粒，对照片无色或色淡。2．联苯胺反应：切片中含过氧化物酶部位呈现蓝色或棕色。六：作业：绘图表示PAS反应与联苯胺反应的染色结果，并分析。8图1图2