CRISPRCAS9慢病毒系统概述

CRISPR/CAS9慢病毒系统吉凯基因CRISPR/CAS9系统原理让我们用心，换取您的放心！CRISPR/CAS9系统：基因组定点切割系统。定点：sgRNA，碱基互补配对切割：CAS9蛋白，核酸内切酶让我们用心，换取您的放心！无模板随机修复（NHEJ）读码框移位蛋白无表达Knockout有模板重组修复(HDR)精确插入碱基KnockinCRISPR/CAS9系统原理GeneknockoutGeneknockinCRISPR/CAS9VSRNAi-敲除效果lentiCRISPRsabolishedEGFPfluorescencein93±8%ofcellsafter11days.参考文献：Science.2014Jan3;343(6166):84-7.doi:10.1126/science.1247005Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutscreeninginhumancells.CRISPR/CAS9VSRNAi-靶点一致参考文献：Science.2014Jan3;343(6166):84-7.doi:10.1126/science.1247005Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutscreeninginhumancells.靶点间一致的概率：CRISPR/CAS9：78±27%shRNA：20±12%CRISPR/CAS9VSRNAi-表型呈现RNAi敲减OK无表型CRISPR/CAS9表型明显参考文献：Science.2014Jan3;343(6166):84-7.doi:10.1126/science.1247005Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutscreeninginhumancells.CRISPR/CAS9VSRNAi对比RNAiCAS9作用水平mRNA水平基因组水平靶位点范围仅转录本所有基因组序列，如外显子，内含子，启动子，增强子，基因间序列等靶蛋白消除水平不完全消除完全消除靶蛋白功能部分丧失完全丧失消除后具功能靶基因表型呈现不一定呈现肯定呈现针对同一基因多靶点表型一致率20±12%78±27%参考文献：Science.2014Jan3;343(6166):84-7.doi:10.1126/science.1247005Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutscreeninginhumancells.与RNAi相比，CRISPR/CAS9在基因功能学研究中具有独到优势：CRISPR/CAS9系统载体质粒慢病毒腺病毒构建时间7days，快25days，较快45days，慢使用范围少数易转细胞，窄大多数细胞，宽大多数细胞，宽导入效率少数较高多数高多数高细胞分裂表达水平减弱，直至丢失稳定表达减弱，直至丢失对细胞状态影响较大小较大持续表达时间短长，可永久表达较长，终会丢失功能学研究适用度局限适用细胞状态影响大让我们用心，换取您的放心！慢病毒载体在基因功能学研究中具有独到优势：新高大上：CRISPR/CAS9与慢病毒Paper1:High-throughputscreeningofaCRISPR/Cas9libraryforfunctionalgenomicsinhumancells.•IF：42Journal:Naturedate：2014MayPaper2:Genome-widerecessivegeneticscreeninginmammaliancellswithalentiviralCRISPR-guideRNAlibrary.•IF：39.08Journal：NatBiotechnoldate：2014MarPaper3:GenerationofmousemodelsofmyeloidmalignancywithcombinatorialgeneticlesionsusingCRISPR-Cas9genomeediting.•IF：39.08Journal：NatBiotechnoldate：2014JunPaper4:Improvedvectorsandgenome-widelibrariesforCRISPRscreening.•IF：26Journal：NatMethodsdate：2014Jul让我们用心，换取您的放心！方式一：双慢病毒载体介导的CRISPR/CAS9•Paper1:High-throughputscreeningofaCRISPR/Cas9libraryforfunctionalgenomicsinhumancells.•IF：42Journal:Naturedate：2014May让我们用心，换取您的放心！CAS9稳定表达细胞株CAS9表达慢病毒sgRNA表达慢病毒EGFP绿色荧光筛选细胞出现表型感染稳定细胞株基因功能确定吉凯CAS9双载体慢病毒系统介绍切割：Lenti-CAS9-puro表达CAS9蛋白+puromycin筛选定位：Lenti-sgRNA-EGFP/RFP/G418表达sgRNA+EGFP荧光标记让我们用心，换取您的放心！吉凯CAS9双载体慢病毒系统介绍切割：Lenti-CAS9-puro滴度可达2E+8已成功构建两株CAS9稳定表达细胞株定位：Lenti-sgRNA-EGFP滴度可达3E+8以上可成功引入突变ctlncC1C2Cas9ncG1ncG2ncG3让我们用心，换取您的放心！吉凯CAS9双载体慢病毒系统介绍-wt缺失23bp增加10bpCAS9双载体慢病毒系统可成功对靶位点造成修饰缺失37bp增加1bp-wt例1：例2：让我们用心，换取您的放心！吉凯CAS9双载体慢病毒系统介绍吉凯所设计sgRNA具有高阳性率。让我们用心，换取您的放心！吉凯CAS9双载体慢病毒系统介绍吉凯所设计sgRNA具有高阳性率。方式二：单慢病毒载体介导的CRISPR/CAS9让我们用心，换取您的放心！•Paper5:Genome-scaleCRISPR-Cas9knockoutscreeninginhumancells.•IF：31Journal:Sciencedate：2014Jan感染一个病毒，同时表达CAS9蛋白和sgRNA吉凯CRISPR/CAS9单载体慢病毒系统介绍定位：sgRNA切割：CAS9标记：Puromycine/EGFP让我们用心，换取您的放心！吉凯CRISPR/CAS9单载体慢病毒系统介绍CAS9蛋白表达可对靶位点有效切割可成功引入突变ctlncC112ncCas9CRISPR/CAS9慢病毒系统应用Gene功能研究：针对敲减无功能基因感染后细胞进行相关功能研究，并多靶点验证CRISPR/CAS9HCS高内涵筛选系统文库：（敬请期待）HumansgRNALibraryMousesgRNALibrary与深度测序联用，功能相关靶基因筛选让我们用心，换取您的放心！境况1：基因RNAi后无表型?换用CRISPR/CAS9慢病毒试试!Science.2014Jan3;343(6166):84-7.RNAi敲减OK无表型CRISPR/CAS9表型明显境况2：基因组突变疾病相关研究？RNAi间接甚至不可用！慢病毒介导的CRISP/CAS9技术！让我们用心，换取您的放心！Paper1:MLL3ishaploinsufficient7qtumorsuppressorinacutemyeloidleukemia.IF：24Journal:cancercelldate：2014MayMDS（骨髓发育不良症候群）和AML（急性髓细胞样白血病）常见染色体7q部分缺失。通过CRISPR/CAS9技术验证其上MLL3基因是发挥作用基因。Paper2:GenerationofmousemodelsofmyeloidmalignancywithcombinatorialgeneticlesionsusingCRISPR-Cas9genomeediting.IF：39.08Journal：NatBiotechnoldate：2014Jun恶性肿瘤往往存在多处基因组突变。通过慢病毒介导的CRISPR/CAS9技术对小鼠hematopoieticstemcell(HSC）5个基因进行修饰，导致恶性肿瘤AML。境况3：RNAi有功能！CRISPR/CAS9锦上添花！CancerCell.2014May12;25(5):652-65.doi:10.1016/j.ccr.2014.03.016.Epub2014May1.MLL3isahaploinsufficient7qtumorsuppressorinacutemyeloidleukemiaRNAi证明：CRISPR/CAS9验证：境况4：老树开新花！CRISPR/CAS9老基因研究！JOrthopRes.2014Oct27.doi:10.1002/jor.22745.TargetingCdk11inosteosarcomacellsusingtheCRISPR-cas9system.增殖转移侵袭检测原理让我们用心，换取您的放心！