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版权：RKAILI///选修一：生物技术实践1高中生物必背核心知识点背多分选修一知识点专题1：果酒、果醋、腐乳、泡菜发酵1.果酒发酵先通氧有利于酵母菌大量快速繁殖，后无氧环境进行酒精发酵。酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。2.缺氧、酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，其他杂菌生长受到抑制。3.O2、糖源充足时，醋酸菌将糖分解成醋酸；缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变乙醛，乙醛再变醋酸。4.果酒自然发酵时，利用葡萄皮上野生的酵母菌；工业生产时，人工接种纯化的酵母菌，以提高发酵效率。5.果酒变果醋发酵改变两个条件：一通氧，因为醋酸菌是好氧细菌；二升高温度，因为酵母菌在18-25°C，而醋酸菌在30-35°C。6.果酒与果醋发酵流程：挑选葡萄→冲洗（再去梗）→榨汁→酒精发酵升温通氧醋酸发酵7.腐乳味道鲜美是因为：毛霉产生蛋白酶将蛋白质分解成小分子肽和氨基酸；脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸。8.腐乳制作时加盐的作用：（1）析出豆腐中的水分，使豆腐变硬；（2）抑制微生物生长，避免豆腐腐败变质。（3）调味。9.测定亚硝酸盐含量方法：比色法。样品处理液显色后与标准显色液比色。10.在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料11.泡菜腌制的时间过短、温度过高和食盐用量过低亚硝酸盐含量会增加。12.果酒表面的菌膜为醋酸菌；泡菜表面的白膜为酵母菌。专题2：微生物培养、纯化、计数、分离和鉴定1.微生物培养基主要含有碳源、氮源、水和无机盐四类物质。除此之外往往还需加入生长因子、调节PH等。加入琼脂则为固体培养基。加入抗生素可抑制细菌生长。2.培养基按作用（功能）分为：选择培养基和鉴别培养基；按物理属性分为：固体培养基和液体培养基。补充：液体培养基可以用快速扩繁微生物；而纯化和计数必须用固体培养基。注意：获得纯净微生物的关键是无菌技术（防止杂菌污染）。版权：RKAILI///选修一：生物技术实践23.消毒是杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法包括：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学试剂消毒法、紫外线消毒法。4.灭菌是指用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。5.培养基用高压蒸汽灭菌；接种环用灼烧灭菌；玻璃器皿用干热灭菌。6.培养基的制作过程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。7.倒平板：灭菌后的培养基冷却到50°C左右时，在酒精灯火焰旁倒平板；平板冷凝后要倒置（因为：防止培养皿盖上冷凝的水珠落入培养基，而造成污染）。8.常用的细菌培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养琼脂培养基；9.常用的酵母菌（真菌）培养基：麦芽汁琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基。10.用伊红美蓝培养基可鉴定大肠杆菌，菌落呈现黑色。11.微生物的纯化方法：平板划线法和稀释涂布平板法。纯化的目的：获得单菌落。12.菌落的概念：由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。13.菌落的特征：形状、大小、隆起程度和颜色等，可以用于鉴定菌种。14.微生物的计数方法：版权：RKAILI///选修一：生物技术实践3（1）显微镜直接计数法（比实际值偏大）→因为死菌和活菌都统计了；（2）稀释涂布平板法（比实际值偏小）→因为两个或多个细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落（单菌落）。15.稀释涂布平板法计数注意点：（1）计数时，每个稀释浓度一般涂布3个平板；（2）计数所用平板中的菌落在30-300之间；（3）计算统计的菌落数不是活菌数；（4）统计值比实际值偏小，计算公式：稀释倍数积涂布时所用稀释液的体每个平板计数平均值单位：个/ml注意：该公式基于原液为1ml。若原液为1L中取了1ml进行梯度稀释，那么在总数上乘1000，单位为个/L。16.若要检测培养基是否合格，可采选用多个空白培养基培养。若要其他因素对培养基计数造成的干扰，可设置对照组，即选用多个培养基，用无菌水涂布后培养。17.菌种的保存方法：临时保藏→用试管的固体斜面培养基接种后保藏在4℃冰箱中；长期保存→用甘油管藏法。18.分离鉴定分解尿素的细菌方法：以尿素为唯一氮源的培养基，并加入酚红指示剂。该菌合成脲酶将尿素分解成氨，PH值会升高，指示剂会变红。19.分离鉴定分解纤维素的微生物的方法：以纤维素为唯一碳源并加入刚果红，若培养基出现透明圈则说明该菌存在。20.纤维素酶是复合酶，C1酶和Cx酶将纤维素分解成纤维二糖，葡萄糖苷酶将纤维二糖分解为葡萄糖。专题4：酶的研究与应用1.果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶。2.果胶酶可以瓦解植物的细胞壁及胞间层。使浑浊的果汁里的果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，而使果汁变得澄清。所以可以用出汁率和澄清度来判断果胶酶的活性。3.设置温度梯度、PH梯度实验可以探究它们对酶活性的影响。4.果胶酶活性的实验观测指标：方法一：反应同样时间后，反应液过滤相同时间，用量筒测量出汁率。果汁量越多，酶活性越高。方法二：反应相同时间后，比较果汁的澄清度来比较酶活性的高低。5.加酶洗衣粉的酶制剂有四类：碱性蛋白酶和脂肪酶（最广泛）、淀粉酶和纤维素酶。版权：RKAILI///选修一：生物技术实践46.葡萄糖异构酶能将葡萄糖转化成果糖。该酶固定化后优点：能与反应物接触，又能与产物分离，同时固定在载体上的酶还可以被反复利用，降低成本。7.固定化技术包括：（1）包埋法→用多孔性载体（海藻酸钠）固定细胞；（2）化学结合法与物理吸附法→用于固定酶。8.固定化酵母细胞的方法：包埋剂海藻酸钠与酵母菌细胞混合均匀后，用注射器滴加到凝固剂CaCl2溶液中形成凝胶珠。9.制备凝胶珠时：（1）海藻酸钠浓度过低，酵母细胞会暴露在表面，固定效果差；（2）CaCl2浓度过低制得的凝胶珠过软，而成椭球形；（3）CaCl2浓度过高制得的凝胶珠过硬，不利于溶液（底物）进入凝胶内部发酵。专题5：蛋白质技术→血红蛋白的提取和分离1.血红蛋白的提取和分离一般分为四步：样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定。如图右图所示：2.第一步样品处理的注意事项：（1）洗涤红细胞（用生理盐水洗涤的目的：去除杂蛋白）→①柠檬酸钠的作用：防止血液凝固；②低速短时离心的作用：防止白细胞和淋巴细胞沉淀；③缓慢搅拌的目的是：防止红细胞破裂。④洗涤干净的标志是：离心后上清液中没有黄色。（2）释放血红蛋白→①蒸馏水的作用：使红细胞大量吸水胀裂；②加入甲苯的作用：溶解红细胞的细胞膜；③充分磁力搅拌的目的：加速红细胞的破裂。（3）分离血红蛋白溶液→①2000r/min离心10min：从上到下第三层红色透明为血红蛋白溶液；②滤纸过滤除去脂溶性沉淀层；③分液漏斗内静置，分出下层红色透明液。3.第二步粗分离的注意事项：（1）透析膜：是半透膜，蛋白质是大分子，它不能透过透析膜，而小分子物质可以自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换，进入到透析液。（2）1mL血红蛋白溶液装入透析袋中，再置于磷酸缓冲液中透析12h。版权：RKAILI///选修一：生物技术实践5（3）磷酸缓冲液的作用：调节PH，避免PH变化引起蛋白质结构改变。4.第三步纯化的注意事项：（1）纯化方法：凝胶色谱法，又称为分配色谱法。（2）原理：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。分子量较小的蛋白质进入凝胶内部，路程长、移动速度慢。分子量较大的蛋白质在凝胶外移动，路程短、移动速度快。（3）纯化的步骤：①凝胶色谱柱的制作；②凝胶色谱柱的填装；③样品的加入和洗脱。【注意】1.色谱柱填装时色谱柱中不能有气泡，因为会扰乱蛋白质的洗脱次序；2.色谱柱制作成功的标志是红色区带均匀一致地向下移动。5.第四步纯度鉴定的注意事项：（1）纯度鉴定方法：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法。（2）原理：在蛋白质样品加到凝胶上后，接通电源，所有SDS-蛋白质复合物都向着阳极迁移。大的蛋白质会遇到更多的阻力，因此它们迁移的速度比小的蛋白质慢。凝胶通过染色（常用的考马斯亮蓝染料）出现不同蛋白带，蛋白带越靠前的蛋白质分子量越小。（3）SDS的作用：使蛋白质解成单链；消除蛋白质自身净电荷对迁移速度的影响。专题6：植物有效成分的提取1.玫瑰精油（易挥发）——水蒸气蒸馏法；橘皮精油——压榨法；胡萝卜素（橘黄色，不溶于水，易溶于石油醚）——萃取法。2.采用哪种方法提取，取决于提取物的属性。如有效成分易挥发，化学性质稳定，不易水解，则选用蒸馏法。3.水蒸气蒸馏法的原理：利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又重新分出油层和水层。4.蒸馏的温度和时间会影响提取物的品质。蒸馏温度高、时间短产品品质差。5.柑橘和柠檬在水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题。6.水蒸气蒸馏得到的油水混合物中加NaCl易于油水分层；加无水Na2SO4吸水。7.压榨橘皮时先用石灰水浸泡（分解果胶，防止橘皮滑脱）可提高出油率；NaHCO3和Na2SO4可使橘皮油易于与水分离。8.β-胡萝卜素可氧化成维生素A，缺乏VA可患夜盲症、干皮症和幼儿生长发育不良。9.β-胡萝卜素提取方法：一是植物中提取，二是岩藻中获得，三是微生物发酵生产。版权：RKAILI///选修一：生物技术实践610.萃取剂特点：较高沸点；充分溶解胡萝卜素；不与水混溶（所以不能用酒精作为萃取剂）。11.萃取时，原料颗粒小，萃取时间长，萃取温度高，则萃取效果相对较好。12.萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量；13.萃取时应水浴加热是为了防止有机溶剂燃烧、爆炸；回流冷凝装置可以防止有机溶剂挥发；14.胡萝卜素的鉴定方法：纸层析法。标准样点在A、D两点。15.萃取胡萝卜素的步骤：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素