膜蛋白提取方法

膜蛋白提取试剂盒产品组成：产品编号BB-3103-1BB-3103-2规格50T100T试剂A10ml20ml试剂B20ml40ml试剂C10ml20ml蛋白酶抑制剂混合物250μl500μl储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。有效期：一年。产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。贝博膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于WesternBlotting、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，请使用贝博其它货号的试剂盒。应用实例：144图片说明：用膜蛋白提取试剂盒提取细胞样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。使用方法：A．细胞蛋白提取1.取5-10×106个以上细胞①，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。2.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。3.细胞样品中加入200μl冷的试剂A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟，中间每隔几分钟涡旋混匀或用移液器吹打混匀。注：此步如果细胞裂解不充分，下步有大量细胞沉淀，请延长冰浴裂解时间至30分钟或更长，直至细胞充分裂解，中间每隔几分钟充分混匀。4.再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，13000×g条件下离心5分钟。5.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴5-10分钟，37℃下②1000g-2000g力离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白约为20-50μl。6.收集上层部分留作备用分析③。7.用150-200μl冰冷的试剂B稀释下层膜蛋白部分，混匀后冰浴2min，37℃水浴5-10分钟，37℃下②1000g-2000g力离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白约为20-50μl。8.按步骤7再次抽提膜蛋白(此步骤可以选做)。9.用50-200μl冷的试剂C稀释下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。10.将上述蛋白提取物定量④后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验⑤。B．组织蛋白提取1.取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。2.在4℃，500g条件下离心2-3分钟，弃上清。3.按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。参考文献：●GeZhao,SiyuanLi,WeiZhao,etal.PhageDisplayagainstCornealEpithelialCellsProducedBioactivePeptidesThatInhibitAspergillusAdhesiontotheCorneasPLoSONEMarch2012|Volume7|Issue3,（IF=4.411）●ShunmingZhu,FeiSun,etal.ApelinstimulatesglucoseuptakethroughthePI3K/Aktpathwayandimprovesinsulinresistancein3T3-L1adipocytesMolecularandCellularBiochemistry2011Volume353,Numbers1-2,（IF=2.168）●LIAO,LIHONG,etal.TheInfluenceofDown-RegulationofSuppressorofCellularSignalingProteinsbyRNAionGlucoseTransportofIntrauterineGrowthRetardationRatsPediatricResearch2011Volume69,Issue6,pp497-503（IF=2.803）●李素芬,杨鹰.不同浓度瘦素对人胚胎绒毛滋养细胞膜胰岛素受体磷酸化的抑制作用第三军医大学学报,2010,32(23):2530-2532.●何鸿保孙浩等.5-Aza-CdR对肾细胞癌Caki-1细胞生长及E-钙黏蛋白基因表达的影响江苏大学学报,2011年01期●余冬梅陈明.雷米普利通过干预瞬时感受器阳离子通道C3的表达对心肌纤维化的影响重庆医科大学学报,2011年01期相关产品：产品产品号产品产品号总蛋白提取试剂盒BB-3101磷酸化蛋白富集试剂盒BB-3108核蛋白提取试剂盒BB-3102膜蛋白提取试剂盒BB-3103Bradford蛋白定量试剂盒BB-3411BCA蛋白定量试剂盒BB-3401ECL化学发光检测试剂盒BB-3501蛋白MarkerBB-3721细胞蛋白提取试剂盒BB-3121细菌膜蛋白提取试剂盒BB-3151组织蛋白提取试剂盒BB-3122植物总蛋白提取试剂盒BB-3124细菌蛋白提取试剂盒BB-3123植物膜蛋白提取试剂盒BB-3152酵母蛋白提取试剂盒BB-3125蛋白酶抑制剂混合物BB-3301磷酸化蛋白提取试剂盒BB-3105磷酸酶抑制剂混合物BB-3311SDS-PAGE凝胶配制试剂盒BB-3702SDS-PAGE上样BufferBB-3703