细菌鉴定的总体思路..

临床常见细菌鉴定的思路检验科张诗海细菌鉴定的指南一、培养特性1、温度2、气体3、营养要求4、PH5、湿度细菌鉴定的指南二、生长特性1、生长速度2、菌落特征3、液体培养基的生长特性三、细菌的形态与染色四、生理及生化特性五、血清学诊断六、致病性试验：动物接种细菌的分类及鉴定步骤细菌的分类单位由高到低分7个层次，界门纲目科属种有的种还分血清型（如沙门菌及志贺菌等）和生物型（如流感、副流感嗜血杆菌1-8生物型等）还有噬菌体分型（如伤寒沙门菌、铜绿等）。细菌鉴定步骤1、首先必须分离有单个菌落的纯培养2、革兰氏染色，先确定是G-b，G+b，G+c，G-c3、如为G-b，G-c先做氧化酶试验，如为G+c或G+b先做触酶，根据结果，选择最少几项关键性鉴定试验。G+c(动力、触酶、O/F)-w/-F-+O/--+F+/--F微球菌气球菌链球菌葡萄球菌革兰阳性球菌之葡萄球菌一、革兰阳性球菌，排列成葡萄状，触酶（+）：首先做血浆凝固酶试验、甘露醇、尿素及对新生霉素的敏感性，如果确定不了，再加做麦芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸盐，同时结合菌落颜色和溶血情况。几种常见葡萄球菌的鉴定凝固酶甘露醇尿素新生金葡++-S中间+--S表皮--dS腐生-++R溶血-d-S革兰阳性球菌之链球菌二、革兰阳性球菌，排列成链状，触酶（-）：根据溶血情况，先做①七叶苷②6.5%NaCl③肉汤。β溶血：1、①-②-③沉淀生长，加做杆菌肽S为化脓性链球菌2、①-②-③微混，加做CAMP+为B群链球菌（无乳链球菌）3、①-②-③沉淀生长，加做杆菌肽R，为β溶血性链球菌（非A、B）4、①+②③沉淀生长，加做杆菌肽R，为咽峡链球菌（草链中的一种）革兰阳性球菌之—链球菌α溶血：1、①-或+②-③沉淀生长，为草链2、①-②-③混浊生长，加做胆汁溶菌试验+，菊糖+，OptochinS，为肺炎链球菌不溶血或α溶血：1、①+②-③混浊生长，为D群链球菌2、①+②+③混浊生长，为肠球菌革兰阳性球菌如D群链球菌和肠球菌要进一步鉴定：D群链球菌乳糖+-牛链马肠链肠球菌山梨醇+-棉子糖甘露醇+-+-粪肠球禽肠球屎肠球坚忍肠球革兰阳性球菌之—绿色气球菌绿色气球菌是一种条件致病菌，它可引创面感染、败血症等。绿色气球菌在血平板上生长灰色、光滑、有α溶血的菌落。革兰染色为G+C，排列呈四联状。绿色气球菌生化反应试验+%试验+%试验+%触酶*0麦芽糖100阿拉伯糖48硝还*0蔗糖100棉子糖19七叶苷*100乳糖90木糖106.5%NaCl*100果糖100山梨醇0葡萄糖*100蕈糖90甘露醇*86水杨苷76*为确诊试验革兰阳性球菌之—溶血孪生球菌本菌染色多变，可以染成阴性，呈单个或成双、短链排列。血板上35度培养24h形成较大的菌落，呈水滴状，易融合生长，48h后菌落周围出现宽大的透明溶血环，有自溶现象，类似肺炎链球菌的菌落。肉汤培养中呈混浊生长，6.5%高盐肉汤中能生长。生化反应：触酶-，氧化酶-，分解葡萄糖、果糖；不分解乳、麦、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、卫矛醇；七叶苷-，靛基质-。对青、氯霉素敏感，对丁胺卡那耐药。革兰阳性球菌之—马红球菌马红球菌是马、猪和牛的致病菌，近来发现本菌也可引起艾滋病、血液病和肾移植病人的肺部感染。本菌为革兰阳性无动力杆菌，为多形态，有时呈杆状，有时呈球状。在血平板上35℃24-48h，可长出淡桔红色到粉红色的粘液样大菌落，不溶血。生化反应：触酶+，氧化酶-，硝还+，靛基质-，枸盐-，明胶酶-，脲酶不定，不分解糖类，可形成类CAMP样反应。G-c(触酶、氧化酶、O/F)++o脑膜炎奈瑟氏菌淋病奈瑟氏菌其他奈瑟菌布兰汉菌属金黄色奈瑟菌革兰阴性双球菌氧化酶+脑膜炎卡他布淋病双球菌兰汉菌奈瑟菌葡萄糖+-+麦芽糖+--硝还-+-DNA酶+G-b(动力、氧化酶、触酶、O/F)-++-莫拉菌属+++--++fw--++-+++0/f-++f+++F--+O/----F++++-+-嗜血杆菌黄色杆菌莫拉菌属假单胞菌巴斯德菌弧菌属不动杆菌产碱杆菌军团菌属弯曲杆菌属邻单胞气单胞++/--F肠杆菌科革兰阴性杆菌之—嗜血杆菌嗜血杆菌为G-小杆菌，在巧克力平板上生长灰色、透明的小菌落，似露滴状，有时呈球杆菌，有时呈丝状，一般情况下在血平板上不生长。氧化酶（弱+），在血平板和MH上同时做卫星试验，两种平板上均阳性，为副流杆菌嗜血杆菌，血平板上阳性、MH上阴性，为流感嗜血杆菌。注：杜克嗜血杆菌是软性下疳的病原菌，72h后才生长细小的菌落，阴道分泌物培养时要注意。革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验涂片为革兰阴性杆菌，做氧化酶试验。1、氧化酶-做全套生化克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、葡萄糖、甘露醇、IMViC、硝酸盐革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验致病性大肠埃希菌克氏双糖、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、IMViC、山梨醇。迁徙生长，可能为变形杆菌克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、靛基质、麦芽糖。灰凸的菌落，染色为典型的阴性球杆菌克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、丙二酸盐、42℃。灰黄色菌落可能为嗜麦芽窄食假单胞菌同氧化酶+生化试验。革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验2、氧化酶+全套生化克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。可疑气单胞菌克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP（25℃）。可疑弧菌同气单胞菌生化试验，另加不同浓度的NaCl。肠杆菌科肠杆菌科为一大群革兰阴性杆菌，氧化酶阴性.多数菌种为周毛菌，能运动，少数无鞭毛，不能运动。绝大多数菌种在普通营养琼脂上生长良好。发酵葡萄糖，还原硝酸盐。临床常见的10多个菌属，30多个种。肠杆菌科与其他科细菌的区别试验肠杆菌科弧菌科非发酵菌葡萄糖发酵FFO/-氧化酶-++*形态杆状弧形或杆状态杆状鞭毛周毛或无单毛单毛、丛毛、周毛或无*不动杆菌和嗜麦芽窄食假单胞菌除外。肠杆菌科的初步分类肠杆菌科初步分类菌属苯丙氨酸葡萄糖酸盐埃希菌属——志贺菌属——沙门菌属——枸橼酸杆菌属——爱德华菌属——耶尔森菌属——克雷伯菌属—+肠杆菌属—+沙雷菌属—+哈夫尼亚菌属—+变形杆菌属+—摩根菌属+—普罗维登斯菌属+—苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性各菌属的鉴别枸橼酸爱德华结肠试验埃希菌属志贺菌属沙门菌属杆菌属菌属耶尔森菌动力+/--+++-*硫化氢--+/-+/-+-靛基质+-/+--/++-/+枸橼酸盐--+/-+--脲酶----/+-+/-赖氨酸+/--+/---+/-*25-30℃培养动力+葡萄糖酸盐阳性各菌属的鉴别试验克雷伯菌属肠杆菌属沙雷菌属哈夫尼亚菌属动力-+++山梨醇++/-+-DNase--+-明胶酶--+-苯丙氨酸阳性各菌属的鉴别试验变形杆菌属摩根菌属普罗维登斯菌属硫化氢+--枸橼酸盐+/--+/-鸟氨酸+/-+-大肠埃希菌与其他3种埃希菌的鉴别黄色素吲哚乳糖山梨醇戊五醇大肠埃希菌-+++-弗格森埃希菌-+--+赫曼尼埃希菌++d--伤口埃希菌d--/+--志贺菌属的生化反应试验反应试验反应葡萄糖产气-*吲哚d乳糖-**甲基红+蔗糖-VP-甘露醇+/-枸橼酸盐-卫矛醇-丙二酸盐-肌醇-KCN-水杨苷-明胶酶-硫化氢-赖氨酸-脲酶-动力-*福氏6型某些生物型、鲍氏志贺菌13、14型可产生少量气体。**宋内志贺菌可迟缓发酵乳糖志贺菌属的血清反应本菌属仅有菌体（O）抗原，而无鞭毛（H）抗原。某些菌株在新分离时，有表面（K）抗原，可阻止O抗原与相应诊断血清发生凝集反应。K抗原不耐热，加热100℃60min即可破坏，而O抗原为多糖复合物，耐热，加热后不被破坏，仍可与特异性抗血清凝集。根据生化反应和O抗原之不同，可将志贺菌属分为四个血清群。A群即痢疾志贺菌，均有K抗原，国内仅发现1、2型。B群福氏志贺菌，C群鲍氏志贺菌，D群宋内志贺菌，仅1个血清型。沙门菌属的生化反应试验反应试验反应葡萄糖产气+*吲哚-乳糖-甲基红+蔗糖-VP-甘露醇+枸橼酸盐+/-麦芽糖+丙二酸盐-鼠李糖+KCN-水杨苷-明胶酶-硫化氢+***赖氨酸+***脲酶-动力+***伤寒沙门菌不产气**鸡沙门菌和雏沙门菌无动力***甲型副伤寒沙门菌赖氨酸、硫化氢均为阴性。枸橼酸杆菌属的鉴别菌种硫化氢吲哚侧金盏花醇丙二酸盐弗劳地枸橼杆菌+---/+异型枸橼酸杆菌-+++丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌-+--爱德华菌属爱德华菌属有3个菌种，只有迟缓爱德华菌有临床意义，可引起腹泻、伤口感染和败血症。生化特性是发酵葡萄糖产酸产气，不分解甘露醇、乳糖，产硫化氢，IMViC为++--。动力+，赖氨酸、鸟氨酸+，精氨酸-。耶尔森菌属耶尔森菌属包括11个菌种，其中最重要的为3个菌种。3种耶尔森菌的生化鉴别菌种动力VP吲哚脲酶山梨醇鸟氨酸鼠疫耶尔森菌25℃---d--35℃--假结核耶尔森菌25℃d--+--35℃--小肠结肠炎耶尔森菌25℃++/-d+/-++35℃--7种克雷伯菌属种间的主要鉴别菌种吲哚甲基红VP枸盐丙二鸟氨酸42℃4℃肺炎克雷伯菌--+++-+-产酸克雷伯菌+-/++++-+-臭鼻克雷伯菌-+--/+--+-鼻硬结克雷伯菌-+--+-+-解鸟氨酸克雷伯菌+++/-+++++植生克雷伯菌-/+++++-++土生克雷伯菌-d+d+-/+-+4种肠杆菌种间生化反应鉴别菌种山梨醇脲酶赖氨酸精氨酸阴沟肠杆菌++/--+产气肠杆菌+-+-格高菲肠杆菌-++-坂崎肠杆菌---+3种沙雷菌的生化鉴别试验粘质沙雷菌液化沙雷菌深红色沙雷菌阿拉伯糖-++棉子糖-++木糖-++乳糖--+山梨醇++-丙二酸盐--+鸟氨酸++-3种变形杆菌的鉴别菌种吲哚麦芽糖鸟氨酸脱羧酶普通变形杆菌++-奇异变形杆菌--+潘氏变形杆菌-+-3种普罗威登斯菌的生化鉴别菌种脲酶甘露醇侧金盏花醇鼠李糖雷极普罗威登斯菌++++/-斯图普罗威登斯菌-/+---产碱普罗威登斯菌--+-摩根菌属摩根菌属只有一个菌种，即摩根摩根菌，生化反应不活泼，发酵葡萄糖产酸，脲酶阳性，IMViC++--，苯丙、鸟氨酸+，赖氨酸、精氨酸-。非发酵菌的初步鉴定1、氧化酶试验2、葡萄糖发酵试验3、动力及鞭毛4、色素5、还原硝酸盐及产N2几种非发酵菌与弧菌科菌的鉴别血平板氧化酶克氏葡糖甘动力靛枸硝七乙明胶铜绿灰绿，溶血+-/-（O）-+-++-++嗜麦芽灰黄色--/-（O）-+-++/-+-+腐败红棕色+-/-H2S（O）-+--+/---+恶臭灰白色+-/-（O）-+-+/-----荧光灰色+-/-（O）-+-+-/+--+洋葱黄色（多BR）（+)/--/-（O）-+-+/--/++/-+/-+/-产碱灰色，α溶血+-/-（O)/--+-+-/+--/+-不动灰白色--/-（O)/----+/-----/+莫拉灰色+-/------+/-NDND-/+黄杆菌黄色+-/-（F)/---(+)/-+-/++/-+/-黄单胞黄色+-/-（O)/--+-(+)/--+/-+/-气单胞暗灰绿，溶血+-/+F+++-/+++/-ND+邻单胞灰白或灰色+-/+F-++-+-ND-注：（O）：弱阳性；O：氧化型；F：发酵型；ND：无资料非发酵菌之不动杆菌属不动杆菌属菌为革兰阴性球杆菌，氧化酶-，触酶+，靛基质-，甘露醇-，动力-，硝还-。不动杆菌属6个种的生化特性醋酸钙鲍曼溶血琼氏约翰逊洛菲生长于:44℃-+----41℃-+-+--37℃++++-+明胶--+---溶血--+---枸橼酸盐++++/-+-丙二酸盐++---/+-葡萄糖+++/----木糖-++/----乳糖++-++-非发酵菌之黄杆菌属黄杆菌属为革兰阴性杆菌，氧化酶+，触酶+，动力-，菌落产黄色素。临床常见黄杆菌的生化反应脑膜败血芳香短小吲哚+*-+*硝酸盐还原---ONPG+--DNA水解+++七叶苷水解+--明胶酶+++尿素酶-+-/+枸橼酸盐---*:量很少，要用二甲苯提取后才能测出弧菌科氧化酶+，发酵葡萄糖。弧菌科3个菌属的鉴别气单胞菌属邻单胞菌属弧菌属甘露醇+-+/-鸟氨酸