HIV抗原与抗体的检测

HIV抗体和抗原检测重庆市疾病预防控制中心HIV基因结构—HIV的蛋白质主要由三组基因编码—GagP55P17、P24、P15—PolP64P53P31P34P31—Envgp160gp120gp41—P24gp41抗体最具有诊断意义艾滋病的病原学诊断方法（一）HIV抗原检测方法（二）HIV感染的血清学诊断方法HIV抗原检测方法•病毒分离：•逆转录酶测定•ELISA法•原位杂交（InSiteHybridization）•PCR•病毒载量：RT-PCR、bDNA、NASBAHIV感染的血清学诊断方法•ELISA方法•凝集实验•免疫荧光法（IFA）•免疫印迹实验（WesternBlot，WB）•放射免疫沉淀实验ELISA方法•间接法ELISA•竞争抑制法ELISA•夹心法ELISA第一代全病毒第二代基因工程抗原或合成肽第三代双抗原夹心第四代测抗体和抗原每一代HIV试剂实验原理每一代HIV试剂实验原理solidphasehumansample第一代,第二代conjugatemicrowellHIVantigenanti-humanIgGenzymehumanantibody每一代HIV试剂实验原理solidphasehumansampleY第一代,第二代第三代conjugatemicrowellHIVantigenanti-humanIgGenzymehumanantibody每一代HIV试剂实验原理solidphasehumansampleYY第一代第二代第三代第四代conjugatemicrowellHIVantigenanti-humanIgGenzymehumanantibodymcanti-p24ELISA方法检测影响因素•反应时间•温度•酶结合物的稳定性•加标本量HIV抗体检测•检测试剂筛查试剂要求:注册批准；批批检合格；评估优良；有效期内使用采供血使用酶免试剂;按要求使用快速试剂HIV抗体检测•确认试剂注册批准；分类:WBLIAIFAHIV抗体检测检测要点¾严格按照试剂说明书操作,不得擅自更改¾注意防止交叉污染¾严格遵守实验操作规程样品重复检测筛查试剂原有试剂另外一种筛查试剂阴性反应筛查检测阳性反应均阳性反应一阴一阳送确认实验室进行确认均阴性反应阴性报告筛查试验流程HIV抗体检测程序及流程确认试验流程免疫印迹法(HIV/2混合型)HIV-1阳性反应不确定反应阴性反应HIV-1阳性报告阴性报告出现HIV-2指示条带免疫印迹法(HIV-2)阳性反应阴性反应报告HIV-2血清学阳性必要时测核酸不确定反应阴性报告每3个月随访一次,共2次,仍属可疑,则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性确认试验流程HIV抗体确认结果的判定¾HIV-1抗体阳性¾HIV-2抗体血清学阳性¾HIV抗体阴性¾HIV抗体不确定检测结果的报告和处理•筛查试验阴性:出具HIV抗体阴性报告阳性:出具HIV抗体待复查,不能出具HIV抗体阳性报告;同时:填送检单;采二次血;标本上送;上一级实验室复测做好检测后咨询、保密检测结果的报告和处理•确认试验阴性:出具HIV抗体阴性确认报告阳性:出具HIV抗体阳性确认报告不确定：出具HIV抗体不确定确认报告，3个月后复查必要时HIV-1P24抗原或核酸检测做好检测后咨询、保密艾滋病筛查实验室艾滋病筛查中心实验室艾滋病确认实验室艾滋病确认中心实验室同级卫生行政部门国家艾滋病参比实验室省级卫生行政部门中国CDC性艾中心每季首月5日前报告上季检测情况每季首月10日前报告上季检测情况每季首月15日前报告上季检测情况每季首月20日前报告上季检测情况每季首月5日前报告上季检测情况没有艾滋病筛查中心实验室的地区HIV抗体检测情况的报告HIV感染监测的检测策略HIV感染报告疫情要求¾实验室条件¾试剂要求¾阳性判定条件HIV-1P24抗原检测适用范围¾抗体不确定或窗口期的辅助诊断¾新生儿的辅助鉴别诊断¾第4代ELISA试剂阳性，WB阴性标本的辅助诊断¾病程和疗效监测HIV-1P24抗原检测试剂操作要求结果报告和解释¾阳性须经中和实验证实¾阳性不能确诊¾阴性不能排除谢谢！