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1.复苏温度的选择:快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/min慢摇至其溶解，溶解后马上转入37℃水浴箱，手工慢摇恒温2～3min复苏,复苏后800转/min离心5min,吸去上清加入10ml含15%胎牛血清DMEM培养基,混匀后加入细胞培养板,每孔1ml，5%CO2温箱37℃培养.2.复苏培养基的选择:用DMEM培养基培养的细胞结果在接种密度为1×104/cm2、血清含量为15%时，经6h培养后细胞开始贴壁，12h后大部分细胞贴壁，且增值速度最快，4d后可以按1:3的比例传代。3.复苏的接种密度:最佳接种密度为1×104/cm2.4.消化酶以及消化时间的选择:先用pH7.2的PBS洗涤三遍后，再用0.25%的胰蛋白酶溶液消化0.5分钟效果比较好.5.培养基中血清浓度的选择:10%--20%.最好.15%就差不多.6.双抗浓度的选择:双抗浓度为0.5%时传代效果较好，条件易于控制，且细胞能顺利生长.7.培养基pH条件的选择:pH7.2,4.5%CO2时传代效果较好，条件易于控制，且细胞能顺利生长8.细胞传代条件的选择:推荐在汇合度在95%-100%时进行.细胞冻存:甘油和DMSO是两种常用的细胞保护剂.他们在细胞保存液中起到防止细胞内冰晶形成的目的.血清浓度经常可以增加到20%.细胞复苏:冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液.40℃快速融化.关于冻存记录:需要建立细胞生长史,名称,传代次数,冻存日期,复苏次数,生长培养液和在冻存器中的位置都是应记录的项目.