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II实验动物的一般操作技术（兔、豚鼠）08级硕士李志芳●●●●●●●●●●●●●●●●●●●2实验目的一实验内容二实验记录三实验报告书写和实验讨论四●●●●●●●●●●●●●●●●●●●3一、实验目的1了解动物实验在毒理学和预防医学中作用和地位。2．了解实验动物正确操作一般原则的意义。3.掌握兔、豚鼠实验动物的基本操作技术。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●4二、实验内容（一）动物的选择选择健康的实验动物，检疫1~2周后，进行实验。1.外观：体形丰满，被毛浓密有光泽，紧贴体表、眼睛明亮，反应行动灵活。2.体重、年龄：动物的年龄常按体重大小来估计。豚鼠兔急性：450~700g2.0~2.5Kg慢性（亚慢性）150~200g1.5~1.8Kg●●●●●●●●●●●●●●●●●●●5内容（二）动物的抓取正确地抓取和固定动物是为了在不损害动物健康，不影响观察指标，防止被动物咬伤、抓伤的前提下，确保动物实验顺利进行。1.豚鼠：豚鼠胆小易惊，抓取时要稳、准、迅速，先用手掌迅速扣住豚鼠，抓住其肩胛上方，将手张开，用手指环握住颈部，另一只手托住臀部即可。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●62.兔：从笼内提兔时，轻轻打开笼门，将手伸入笼内，从头前阻拦它跑动，将兔耳放入右掌心内，右手抓兔颈部的皮毛提起，左手托住臀部或腹部，让体重的大部分集中在左手上。注意：在实验工作中常用兔耳采血、静脉注射，所以家兔的两耳尽量保持不受损伤，不要抓耳。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●7（三）性别鉴定1.豚鼠：用一只手抓颈部，另一只手扒开靠生殖器孔的皮肤，♂在圆孔中露出性器官突起，♀则出现三角形圆隙，成年鼠有两个乳头。2.兔：成年♂：圆孔中露出圆椎形向下弯曲的阴茎，并且两侧有裸露的睾丸。♀：为一条朝向尾巴的长缝呈椭圆形间隙，有乳头8~12个。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●8（四）实验动物的标记方法:实验动物常需要编号标记以示区别。编号的方法很多，根据动物的种类、数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法。兔：挂牌法刺纹法剪毛法染色法豚鼠：挂牌法刺纹法染色法剪耳法●●●●●●●●●●●●●●●●●●●9挂牌法：该法适用于狗等大型动物。打号法：该法适用于耳朵比较大的兔、狗等动物。用刺数钳(又称耳号钳)将号码打在动物耳朵上。刺纹法：该法适用于大小鼠、豚鼠等。用7号或者8号针头蘸碳素墨水在动物耳朵、前后肢、尾巴等部位刺入皮下，留下黑色标记，在实验动物数量少的情况下，也可用于兔、狗等动物。剪毛法：该法适用于大、中型动物，如狗、兔等。此法编号清楚可靠，但只适于短期观察。剪耳法：此种方法常在饲养大量动物时作为终身号采用。化学药品涂染动物被毛法（染色法）：常用的染料：苦味酸酒精饱合溶液（黄色）；5%中性红或品红溶液（红色）；小鼠和大鼠用得多。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●10（五）实验动物随机分组方法:各组非处理因素齐同，防止非处理因素干扰处理因素的效应。1.将动物按性别，用感应量为0.1g的天平称重，编号，按体重从大到小排序。2.按实验设计要求进行分组。常见的实验设计方案是配伍设计、完全随机分组设计和随机区组设计。随机方法有：随机数字表和随机分组表。常用“Z”字型分组法。3.各组之间尽量齐同，同组、同性别动物体重变异系数小于10%。不同组间同性别动物体重变异系数小于5%。4.如对性别无特殊要求，宜选用雌雄动物各半，单独分组后雌雄合并。（常采用每组20只，雌雄各10只）●●●●●●●●●●●●●●●●●●●11（六）实验动物染毒途径和方法:根据实验目的、实验动物种类，最关键是要参照人接触受试物途径。例：经口药品、保健品、食品采用经口染毒静脉药品采用静脉、腹腔染毒农药、化妆品经皮染毒易挥发物质经呼吸道染毒●●●●●●●●●●●●●●●●●●●121.经口染毒：喂饲:将受试物掺入动物饲料或饮水中供实验动物自行摄入。优点：符合人类接触受试物的实际情况；但缺点多：适口性差的受试物，实验动物拒食；易挥发和水解的受试物不适用。而且，实验动物应该单笼喂饲，以食物消耗量计算其实际染毒剂量。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●13灌胃适用于小鼠、大鼠、兔、犬等动物。优点：剂量准确。缺点：工作量大，并有伤及食管或误入气管的可能。吞咽胶囊适用于大动物。如犬等。将一定剂量的受试物装入胶囊中，放至犬的舌后部，迫使动物咽下，此法剂量准确，适用于易挥发、易水解和有异味的受试物。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●14例如：兔子灌胃：将兔子固定后，一手按住头部，另一手将开口器（中间有一小孔）开口，将舌头压在下面，将胃管经小孔穿入，沿咽后壁插入食管，遇到阻力即可停止，一般可插入25cm，然后将导管放入有水烧杯内，若无气泡产生，则可进行灌胃，否则重新插胃管。最大灌胃容量5.0ml/Kg。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●152.经皮肤染毒：经皮染毒的目的有两种。一种是经皮染毒毒性实验；另一种是皮肤刺激和致敏实验。剪毛法拔毛法脱毛法脱毛法（1）先用剪刀将动物脊柱两侧的长毛剪短，左右各一块，一块做测试，另一块做对照。再用电剪逆着毛的方向剪，不要损伤皮肤。（2）取脱毛剂在剪毛区均匀地涂一薄层，用塑料刮板逆被毛的方向梳理，让脱毛剂与被毛充分接触，隔几分钟，有被毛开始脱落后用纱布沾水轻轻擦洗，并且要清洗干净，因脱毛剂有刺激性。（3）放置24小时后，观察动物皮肤是否有损伤。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●163.经呼吸道染毒：静式吸入染毒，动式吸入染毒，气管内注入染毒。4.注射染毒静脉注射：兔：耳缘静脉注射兔耳中央为动脉，耳缘为静脉。两人配合操作，一人按住耳根阻止静脉回流使耳缘静脉充盈。另一人进行静脉注射，绷紧皮肤，消毒后，持头皮针从静脉远端进针，回抽有血，固定针头，缓慢推入药液，拔针，压迫数分钟止血。豚鼠：股静脉注射（两人配合操作）一人固定豚鼠，另一人剪除后退的被毛，消毒，绷紧皮肤，持头皮针从静脉远端进针，回血后，固定针头，缓慢推注药物，拔针，压迫止血。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●17皮下注射：左手拇指和食指提起皮肤，将连有针头的注射器刺入皮下。注射部位一般在大腿内、外侧，背部、耳根部、腹部。皮内注射：肌内注射：腹腔注射：（以大、小鼠为例）●●●●●●●●●●●●●●●●●●●18（七）生物标本采集根据实验观察指标采集生物标本，如血液，尿，粪便和胆汁等，血液是常用的生物标本。血液采集：1.兔耳缘静脉采血法：（用头皮针，真空采血管）方法同静脉注射（仅限取少量血）2.兔心脏采血法3.兔耳中央动脉取血●●●●●●●●●●●●●●●●●●●19（八）实验动物的处死方法1.麻醉致死法：豚鼠采用化学物质如：氯仿、乙醚、CO22.麻醉后急性放血法：麻醉后，剪断股动脉，血液大量流出，动物迅速死亡。3.空气栓塞法：兔等大动物。4.化学药物致死法：兔、狗、猴等大动物常用10%KCl或10%甲醛溶液进行静脉注射。5.脊椎脱臼法：例：兔子：空气栓塞法：用注射器经耳静脉注入10ml空气，几分钟之内兔子死亡。豚鼠：脊椎脱臼法：一手按住头颈部，另一手用力猛拉尾部。●●●●●●●●●●●●●●●●●●●20三、实验记录四、实验报告书写和实验讨论：注意事项：1.防止被动物咬伤、抓伤，受伤后清水冲洗碘伏消毒。2.防止注射器等锐器刺伤。3.人道地对待动物，将处死后的动物放在指定位置，搞好实验室卫生。