植物RNA提取步骤

植物RNA提取步骤（附图）实验步骤1.在eppendorf管中加入700ul提取液（配方见后面）和10ul巯基乙醇（在有褐化现象的时候再加就行，否则推荐不加），65度预热（可选）。2.研钵液氮预冷，取适量材料加入过量液氮，迅速研磨成均匀的粉末（有滑腻感），加入到预热的eppendorf管中水浴6min（可选）.取出后加入氯仿、酚各350ul，振荡20min。3.4℃13000rpm离心15min，同时在另外的eppendorf管加入氯仿、酚各350ul。4.吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10min。5.4℃13000rpm离心8min。同时在另外的eppendorf管加入氯仿700ul。6.吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10min。7.4℃13000rpm离心8min。同时在另外的eppendorf管加入350ul的75％乙醇、350ul的8MLiCl。8.吸取上清，加入到上述离心管中，－20℃沉淀30min，13000rpm离心20min。9.弃上清，75％乙醇清洗两次。溶于30ul的水（DEPC水），直接进行测定浓度和电泳，CTAB结果如下(左侧四个）：0.155ug/ul260/280=2.11260/230=2.20SDS结果如下（右侧四个）0.102ug/ul260/280=1.78260/230=2.05电泳结果如下：加入DNase和buffer（promega）,37度消化30min,氯仿抽提两次,用1/10体积NaAc和二倍体积无水乙醇沉淀15min,13000rpm离心10min.75%酒精洗两次,溶于30ul的水（DEPC水）中.提取液配方：CTAB提取液：CTAB2%m/v，四硼酸钠-硼酸缓冲体系0.0025mol/l（PH=8.0）NaCl1.4mol/lSDS提取液：SDS2%m/v，四硼酸钠-硼酸缓冲体系0.0025mol/l（PH=8.0）NaCl1.4mol/lCTAB和SDS都不必说了，这里用四硼酸钠-硼酸缓冲体系的原因是Tris和DEPC起反应。NaCl的作用是提高盐浓度防止RNA降解。如降解严重可选加EDTA二钠或减少水浴时间。如提取杂质过多可选加PVP。例如松树。适用范围：各种常见树类如杨树等，草本类皆可。以上的图片左侧四个泳道都为CTAB，右侧四个泳道为SDS。提取杂志残留量：CTAB水浴CTAB未水浴SDS水浴SDS未水浴而易降解程度正好相反，所以请酌情使用。