体外诊断试剂生产质量控制要点

体外诊断试剂生产和质量控制要点主讲人:顾燕黎上海科华生物工程股份有限公司体外诊断试剂产品介绍一酶联免疫诊断试剂产品乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）二快速诊断试剂产品人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）三PCR核酸诊断试剂产品乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）四临床化学诊断试剂产品葡萄糖试剂盒（液体单试剂）（氧化酶法）一.酶联免疫诊断试剂产品【产品名称】乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）【包装规格】96人份/盒【预期用途】本试剂盒采用酶联免疫法原理检测HBsAg，适用于血清或血浆类标本。酶联免疫法反应原理双抗体夹心法双抗原夹心法标本抗-HBs抗-HBs-HRPHBsAg乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）的原理采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。试剂盒组份1.微孔反应板2.酶结合物3.阳性对照4.阴性对照5.洗涤液6.显色剂A7.显色剂B8.终止液9.封片10.说明书主要生产设备微孔反应板包被机微孔反应板全自动封闭生产线灌封流水线超声波洗瓶机全自动进口分装机生物安全柜酶标仪横枕式包装机生产工艺流程图合并分装纯化包被结酶纯化配制配制配制抗-HBs血清酶标用抗-HBs抗-HBs-HRP酶结合物反应板包板用单抗-HBs单抗-HBs腹水正常人血清、阳性血阴、阳性对照显色剂、终止液、洗涤液TMB、硫酸、吐温20成品半成品滴配半成品检定成品检定外购原辅料控制原辅料必须从合格供应商目录所载厂家购入。采购的生产用原辅料，均应符合药品的标准、包装材料标准、生物制品规程或其它标准，不得对产品的质量产生不良影响。自制主要原料生产和质量控制要点工艺用水抗原抗体酶标记物基因工程HBsAg生产和质量控制要点生产工序质量控制要点细胞培养基因工程细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度，细胞的形态及传代速度。纯化收集的细胞培养上清液经抗-HBs亲和层析柱等纯化。层析柱填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、平衡、洗脱速度。基因工程HBsAg质量标准效价：ELISA纯度：采用SDS-PAGE功能性实验：阴性对照、阳性对照、阴性参考品符合率、最低检出量、精密性、稳定性蛋白浓度：用双缩脲法测定单抗-HBs生产和质量控制要点生产工序质量控制要点细胞复苏及传代培养单克隆抗体细胞株，经接种复苏后，进行细胞传代培养。无菌操作，培养基的配制，细胞培养温度。腹水制备福氏不完全佐剂免疫，7-10天后单克隆抗体细胞悬液注射于F1代小鼠，10天后采集小鼠腹水，离心，制得单抗-HBs腹水。对数生长期细胞接种。腹水纯化用制备的单抗-HBs腹水，经饱和硫酸铵二步沉淀，经离子交换层析柱纯化即为单抗-HBs。层析填料的使用次数，所用缓冲液的pH值，上样、平衡、洗脱速度。纯化的得率。单抗-HBs质量标准纯度：采用SDS-PAGE法蛋白含量：采用Lowry法效价：ELISA效价功能性检测：免疫活性、稳定性多抗-HBs生产和质量控制要点生产工序质量控制要点抗血清制备用福氏佐剂和纯化HBsAg抗原制成乳化胶乳剂注射实验动物，经多次免疫后，采集动物血清。动物的选择，乳剂配制的均一性。纯化抗血清，经亲和层析柱粗提后，正常人全血清等多种亲和层析柱等纯化制得。亲和柱的制备及使用次数，所用缓冲液的pH等的控制，纯化的收率。多抗-HBs的质量标准纯度：SDS-PAGE法检定蛋白含量：Lowry法效价：对流电泳法测定效价功能性检测：免疫活性、稳定性多抗-HBs-HRP生产和质量控制要点生产工序质量控制要点酶的活化HRP与NaIO4反应，再加入乙二醇制成活化的酶溶液。辣根过氧化物酶RZ值≥3.0及活化时间的控制酶的偶联酶溶液液加入抗-HBs抗体pH,温度及时间的控制还原酶反应液加入NaBH4溶液还原。还原时间的控制纯化饱和硫酸铵纯化纯度控制辣根过氧化物酶质量标准溶解性：应符合要求PH值：应符合要求活性测定：应符合要求RZ值：应≥3.0多抗-HBs-HRP质量标准免疫活性稳定性试验生产工序生产要点质量控制点反应板制备1包被液的配制pH值的控制2*反应板的包被包被液量的准确性，反应板包被放置的温度、湿度及时间的控制3反应板的洗涤、加封闭液液量的准确性4*反应板的封闭房间温度的控制，封闭时间的控制5反应板的抽干抽干机的真空度、温度6*铝箔袋的热封房间的湿度控制，铝箔袋的密封性7*反应板的抽检应符合相关质量要求反应板制备生产和质量控制要点反应板制备包被液配制质量控制点：包被缓冲液pH测定方法：用pH计测定反应板制备反应板的包被质量控制点：包被液量的准确性要求：100μl/孔操作：将待包被的微孔反应板放置传送带上，开始包被，每块包被板应用目测法检查其96孔加液是否完整。前10块包被板检查加液量是否准确，检后的包被板放入报废专用盘内，作报废处理。连续100块包被板检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100块包被板应抽1块作过程检查。反应板制备反应板的包被质量控制点：反应板包被放置的温度及时间的控制要求：2-8℃冷库包被过夜。操作：包被板应堆放整齐，并用一次性塑料布覆盖。注明产品名称、批号和时间，放入2-8℃冷库包被过夜。反应板制备反应板的洗涤、加封闭液质量控制点：液量的准确性要求:洗板液量：200μl/孔封闭液量：250μl/孔反应板制备反应板的封闭质量控制点：封闭温度：37±0.5℃封闭时间：2小时操作：将加好封闭液的包被板整齐堆放在托盘内，注明批号、封闭开始时间和结束时间，放入恒温房。到达规定时间后，迅速取出包被板，转入下一道工序的生产。反应板制备反应板的抽干质量控制点：抽干机的真空度、温度要求：真空度：低于100Pa，维持4小时以上温度：20±2℃反应板制备铝箔袋的热封质量控制点：房间的湿度：＜40%铝箔袋的密封性：端面刀封温度210±5℃中封刀封温度210±5℃操作：房间湿度控制：生产操作前提前2小时，打开去湿机进行工作场地去湿，使车间湿度达到40%以下。铝箔袋的密封性：在线袋袋检。反应板制备反应板的抽检质量标准：阴性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阳性。阳性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阴性。最低检出量：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，HBsAgadr、adw及ay亚型的最低检出量应符合要求。精密性：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，CV（%）应不高于15%（n=10）。生产工序生产要点质量控制点阴、阳性对照的配制1阴性血清的灭活灭活的时间，温度2*阴性对照的配制检测阴性OD值3阳性血清的灭活灭活的时间，温度4*阳性对照的配制检测阳性OD值阴、阳性对照制备的生产和质量控制要点阴、阳性血清的灭活要求：灭活时间：1小时温度：60℃操作：将血清置水浴箱内。随时注意测量血清温度，当血清温度到达60℃时，开始计时至规定时间止。阴、阳性对照的配制控制阴性对照的配制质控点：阴性对照OD值要求：OD值≤0.050阳性对照的配制质控点：阳性对照OD值要求：OD值≥1.000通用试剂制备的生产和质量控制要点生产工序生产关键点质量控制点显色剂、终止液、洗涤液等通用试剂的制备1显色剂B的配制避光配制、分装溶液配制的pH、电导的控制配制后12小时内进行分装2显色剂A的配制72小时内进行分装溶液配制的pH、电导的控制3终止液的配制比重控制4洗涤液的配制pH、电导的控制显色剂B的配制质量控制点：1溶液配制的准确性用pH计测定溶液pH值应符合要求用电导率仪测定溶液电导率应符合要求2配制、分装环境：避光3配制后溶液分装的即时性：12小时内进行分装显色剂A的配制质量控制点：1溶液配制的准确性用pH计测定溶液pH值用电导率仪测定溶液电导率2配制后溶液存放：72小时内进行分装终止液的配制质量控制点：溶液配制的准确性：用婆美计测定溶液的比重应符合要求洗涤液的配制质量控制点：溶液配制的准确性用pH计测定溶液pH值用电导率仪测定溶液电导率酶结合物制备生产和质量控制要点生产工序生产关键点质量控制点酶结合物的制备、滴配1酶稀释液的配制pH的控制2*酶结合物的滴配通过比较阳性参考品、阴性参考品、精密性以及最低检出率情况，用方阵滴定法进行EIA法测定确定酶结合物的浓度半成品检定质量标准物理检查试剂空白阴性对照阳性对照阴性参考品符合率阳性参考品符合率最低检出量精密性稳定性实验:试剂的分装、贴签生产和质量控制要点除菌过滤质量控制点：过滤膜的起泡点实验要求：滤器灭菌121℃30分钟；0.22μm滤芯泡点≥3.5bar分装质量控制点：液量的准确性、试剂瓶的密封性要求：分装液量应大于等于标示量；分装好的试剂瓶应无漏液现象。贴签质量控制点：批号打印的准确性要求：批号等打印正确、清晰操作：贴瓶开始后，前30瓶应仔细检查瓶贴质量，包括瓶贴位置，批号等打印是否正确、清晰，粘贴是否牢固、平整等。合格后，每50瓶抽1瓶进行检查。合并包装生产和质量控制要点生产工序生产要点质量控制点合并包装1包装盒的压印生产日期、批号打印的准确性、清晰度2合并合并组分的齐全性印刷类包装品的物料平衡成品检定质量标准物理检查试剂空白阴性对照阳性对照阴性参考品符合率阳性参考品符合率最低检出量精密性稳定性实验成品入库入库控制点：产品放行报告；入库数要求：凭由质量管理部经理签署的成品出厂合格报告，成品检定书办理入库手续，入库数应与成品出厂合格报告中所报数量一致。P2生物安全实验室管理人员卫生进入P2实验室必须加穿洁净防护服，带一次性乳胶手套和一次性口罩。只允许工作人员进入，禁止非工作人员进入实验室。生物安全柜实验室的操作严格按操作规程进行操作，对存在感染性或潜在感染性的操作须在生物安全柜内进行。做好相应的消毒、使用记录。消毒及灭菌所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具，均需进行消毒处理，能高压的选择121℃高压灭菌30分钟处理，不能高压的选择1%次氯酸钠消毒。实验中产生的具有感染性或潜在感染性的穿透性利器废物置入黄色塑料利器盒中，其他非利器废物置入黄色医疗废物塑料袋中。实验室应指定专人负责感染性或存在潜在感染性材料的保藏，做好标识，建立台帐。二.金标产品【产品名称】人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体诊断试剂盒(胶体金法)【包装规格】50人份/盒【预期用途】本试剂盒适用于对人血清/血浆或全血中的(HIV1/2)抗体的快速检测。金标产品检验原理本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金标记HIVgp160和gp36抗原等，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41、gp36混合抗原和抗体等，当检测进行时，样品中HIV抗体可与金标记HIV抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前移动。若样品中含有可被检测的HIV抗体，则与检测线预包被的HIV抗原结合形成“金标记HIV抗原—HIV抗体—HIV包被抗原”复合物而凝聚显色；若样品中没有HIV抗体或HIV抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。示意图阴性加样区加样区阳性无效检测线质控线主要组成成份HIV(1/2)抗体胶体金试纸条/板50Tests样品稀释液（磷酸盐缓冲液）1瓶×4.0ml/瓶说明书1份金标产品主要生产设备点样仪切割机核酸蛋白仪电子防潮箱全自动喷点系统划膜机多功能薄膜封口机干燥箱金标产品生产工艺流程图氯化金胶体金标记抗原HIVgp36HIVgp160金标记抗原金反应垫烧金标金喷金干燥包被抗原HIVgp36A抗原检测线包被液抗HIVgp160单抗质控线包被液配制配制反应膜划膜干燥试纸大板组装试纸条切割试纸板封装氯化钠等配制样