实验室质量控制及规范化管理

艾滋病检测实验室规范化管理及质量控制艾滋病确证中心实验室叶黎管理的精髓：减少或预防失误的发生概率失误带来的成本增加用于管理的成本艾滋病检测实验室管理依据《全国艾滋病检测工作管理办法》《全国艾滋病检测技术规范》……艾滋病检测实验室管理一、人员管理“工欲善其事，必先利其器”一、人员管理1、检验人员必须接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。2、检测人员应分为检测人、复核人、签发人。复核人、签发人都应具备对检测过程进行分析和解决问题的能力。2、参加职能考核和能力验证。3、复训和提高……二、实验环境1、应划分清洁区、半污染区和污染区，并有明显标记，有充足的操作空间。符合2级生物安全要求有生物安全标识。门要有可视窗，并达到适当的防火等级。墙、天花板、地板光滑易清洁并耐腐蚀，地板防滑。实验台面应防水、耐腐蚀、适当耐热。每个房间应有洗手池（感应式或脚踏式，安装在出口处）、洗眼器。窗户应有防蚊蝇、防裂齿类动物设施，窗帘要能便于消毒。尽量减少使用玻璃器皿。要有消毒设备或设施。……二、实验环境二、实验环境2、保持实验室严格的清洁度二、实验环境二、实验环境办公室二、实验环境3、控制实验温度实验室应装置恒温设备，室温保持在18-23℃。三、仪器设备管理1、仪器设备的选用。2、安装、使用。3、唯一性标识。4、撰写作业指导书。4、仪器设备的使用、保养、维护记录。5、计量仪器的校准。三、仪器设备管理必须经国家法定部门定期（每年至少一次）校准的仪器包括：酶标仪、加样器、温度计、高压灭菌器。其它仪器也必须定期校准（每年一次），可请厂家校准，如:生物安全柜、离心机等。三、仪器设备管理生物安全柜年检合格，实验完毕后不要把消毒剂放在生物安全柜内。移液器必须使用校准过的移液器，移液器每年至少校准一次。酶标仪每年必须检定一次，平常注意防尘，检查、清洗滤光片。洗板机每次用后一定要冲洗，在洗涤时观察下高低是否合适，灌注液体是否适当，是否有管道堵塞，是否有漏液。冰箱孵箱温度记录移液器的校准在室温22℃无风的工作室中，在万分之一级别天平上放置一个小三角烧瓶，用待校准的移液器吸取存放过夜的蒸馏水加入烧瓶底部，称重并计算整馏水重量，连续称重10次。加蒸馏水的量根据待校准移液器的规格而不同，10次校准称量均在要求的重量范围内为合格。称重法校准移液器方案移液器规格蒸馏水量要求重量范围0.5～5ul2ul1.75～2.25mg1～10ul10ul9.8～10.2mg40～200ul70ul69.4～70.6mg200～1000ul300ul298.0～302.0mg1～5ml2000ul1990.0～2010.0mg2～10ml3500ul3485.0～3515.0mg四、文件管理四、文件管理文件包括：程序文件、作业指导、标准操作程序（SOP）、记录和报告、各种制度等等……。艾滋病实验室要建立覆盖主要工作内容的SOP文件艾滋病筛查实验室SOP文件至少应包括：1）、样品接收、登记、处理、保存和运输；2）、检测方法和步骤；3）、试剂使用和保存；4）、仪器的使用维护和校准5）、实验室数据、相关文件记录与保存；6）、结果解释与报告等；记录和报告仪器使用记录的放置和使用。送样时，名字、地址书写问题。改报告现在很困难SOP通常包括以下类型检测细则：ELISA、快速检测等仪器操作维护规程：酶标仪、洗扳机、移液器、天平、温度计等检测流程实验原始记录实验报告根据自己实验室需求添加其他种类，如试剂评估规程、实验室样本流转单等SOP编写通常包括以下内容1）、标题和编号；2）、编写和修订日期；3）、编写和修订人员姓名；4）、方法、目的和应用范围；5）、检测设备；6）、试剂及有效期；7）、安全防护相关步骤；8）、附录，包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。SOP的编写及修订：由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，每年修订一次。注：实验过程中应严格执行标准操作程序(SOP),不得擅自修改！建立实验原始记录系统样本接收登记表（数据库）实验原始记录血清存放记录配液记录仪器设备使用记录仪器设备维修记录冰箱、孵箱、环境温度记录等填写检测结果表字迹清楚，逐项填写，不应有空缺尽量核实身份证号码实事求是阳性复检单应盖上公章文件存档专人管理严格遵守保密制度五、试剂、样本管理试剂要有进出登记，并妥善保存。操作人员本底样本要每年保存，阳性待送检样本的保存……（一定要有登记）。阴性样本目前没有规定保存多久。六、污染物的处理应按照《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2004）和消毒技术规范（2002版）处置实验室废弃物。艾滋病实验室所产生的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其他物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，经高压消毒后再进行处理废弃。艾滋病检测实验室常用的消毒方法1、物理消毒：高压蒸汽消毒，121℃，保持15～20min;2、化学消毒：1）、含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000～5000mg/L；2）、75%乙醇3）、2%戊二醛3、实验室物品常用的消毒方法：1）、废弃物缸：5000mg/L次氯酸钠；2）、生物安全柜台面和仪器表面：75%乙醇；3）、溢出物：5000mg/L次氯酸钠4）、污染的台面和器具：2000mg/L次氯酸钠，也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。样本管理六、质量管理质量管理的必要性和重要性？六、质量管理要点1、思路要清晰一个样本从来到实验室到报告的发放都要有据可寻——“溯源”。2、保证生物安全后就该考虑结果的准确性。3、多学习《全国艾滋病检测技术规范》4、参加职能考核和能力验证（PT）质量管理体系（质控）包括质量保证（QA）质量控制（QC）室间质量评价（EQA）实验室质量保证实验室的全部效能和声誉依赖于其工作质量：工作人员的技术能力；试剂盒和仪器的质量；标本条件；操作中的对照；数据的解释；结果的描述。质量控制定义质量控制是指为确保实验工作正常进行而在每一次实验过程中必须采取的各种措施。质量控制的目的可以了解本次实验是否有效。所有试验条件是否正常最终结果是否可靠。实验室质量控制的基本要求样品的质量规范化操作试剂做好实验的内、外部对照质量控制内部对照质控血清（试剂盒的对照）外部质控血清的来源和选择通过实验室制备获得（比较经济的方法）通过向有关机构购买获得外部对照质控血清的保存外部对照质控血清的作用以及质量要求1、每一次实验必须使用外部对照质控血清，其作用是监控实验的重复性和稳定性，同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质孔图2、质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期变异（cv20％），并且质控物的成份应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA反应的防腐剂。质控品的制备——选择稀释浓度用本室常用的一种或两种试剂对制备好的梯度样本进行检测，得出S/CO值选择S/CO值结果为3-5的稀释浓度做为该种试剂外部质控品的配备浓度。质控品的制备——制备和分装按照选择的浓度大量配制后，最好再次进行检测，调整质控品浓度，直至合适。按照每次检测用量进行分装:50-100ul/管保存温度=20摄氏度，切忌反复冻融质控图的制备质控图的定义——把检验性能的数据与计算出的“控制线”进行比较的图。建立质控图，以便监控试验操作的一致性和结果的准确性，同时可以了解试剂盒的批间差异。质控图的制作质控框架图的制作每次实验带1－5孔外部对照样本，直至做满20孔；或者一次性做20孔外部对照(不推荐)。取外部对照的S/CO值制作框架图。用S/CO值计算出：标准差（S）：是描述样本与均数之间离散程度的一个指标，是与对照值的均值有关的预期范围。一组S/CO值标准差以S代表均值(x)：一组数据的算术平均值3.算得标准差后，均值加减一个标准差便会出现一个以均值为中心的范围，约有68％的S/CO值应该落在这个范围内；同样，约有95％和99％的S/CO值应该落在均值加减2个和3给标准差范围内。这样表示实验在控制范围内。4、描点框架图制备好以后，每次实验均带外部对照一孔，并用外部对照孔S/CO值在框架图上描点。外部对照及质控图的作用外部对照做为弱阳性样本，可直接检验本次实验的准确性；在质控图中可以反映3种失控状态：1.质控对照值超出正负两个标准差2.位移：3-5个点（S/CO值）落在均值的一边3.趋势：5-7个（S/CO值）一个方向分布。失控及处理记录00.511.522.53123456789101112131415161718192021“即刻法”质控概念：在对同一批外部质控血清联系测定3次后，即可对第3次检验结果进行质控。1、将质控血清的测定值从小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1为最小值，xn为最大值)2、计算X平均值和s3、计算SI上限值和SI下限值SI上限=(X最大值-X平均值)/sSI下限=(X平均值-X最小值)/s4、将SI上限、SI下限与SI值表（表4）中的数字比较nn3sn2snn3sn2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56（1）当SI上限和SI下限n2s时表示处于控制范围内，可以继续测定。继续重复以上各项计算；（2）当SI上限和SI下限有一值处于n2s～n3s值之间时说明该值在2s-3s范围，处于“告警”状态；（3）当SI上限和SI下限有一值n3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”。数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的这次数值，其他测定值仍可继续使用。管理制度SOP外部对照酶标仪洗板机移液器生物安全柜差错登记SOP的修改失控记录及分析健康监护医疗废弃物存在问题单位数216210611839501318607272007年质控考核中存在问题建议长期和稳定地使用一种质量较好地试剂盒，更换不同厂家地试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也因重新制作质控图。使用新批号或不同厂家地试剂盒必须在质控图上注明使用日期。室间质量评价定义质量评价是一种用于判定实验室测定结果质量的手段。通常使用有关权威机构提供的一套质控品（质量控制参比血清）从外部来评价实验室的工作，即对数个实验室的检测结果进行统计分析和评价。这种评价方式常称为室间质量评价（EQA）。室间质量评价的作用检查实验室整体检验能力检查实验室工作人员个人检验能力确定检验方法的效果确定样本某一特定的准确度的特性一个好的QC/QA程序在某些情况下可以替代质量评估，然而质量评估不可能替代好的QC/QA当我们实验前所有准备工作做好了，坐下来开始实验前，我们应该做什么？问题！七、安全管理安全管理与职业暴露是紧密相关的！七、安全管理1、防火、防盗2、防生物安全事故七、安全管理建立应急反应机制和意外事故预案。建立工作人员健康档案。人员培训。足够的一次性手套、口罩、隔离服和防护眼镜。有害物的消毒、净化和灭菌并做好记录。事故调查处理记录。职业暴露处理。七、安全管理七、安全管理