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专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养作业目标①了解有关培养基的基础知识；②掌握无菌技术操作的要求；③能区别消毒和灭菌，学会运用常用的消毒灭菌方法。作业设计限时：40分钟满分：100分一、选择题(每题4分，共60分)1．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯中C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板D．待平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以将牛肉膏与称量纸一同放入烧杯中，加入少量热水，加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至约50℃，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于液体状态时倒平板。平板冷却凝固约5～10min后倒置。答案A2．要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用()A．固体培养基B．液体培养基C．加入青霉素的培养基D．加入高浓度食盐的培养基解析固体培养基主要用于微生物分离、鉴定等，液体培养基主要用于工业生产。加入青霉素的选择培养基能抑制细菌、放线菌的生长，从而分离酵母菌和霉菌；加入高浓度食盐可抑制多种细菌生长，可分离金黄色葡萄球菌。本题没说明分离哪种细菌，故应用固体培养基，如在固体培养基上以划线方法接种，然后再分离出菌落。答案A3．不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素B．碳源物质也是该微生物的能源物质C．无机盐是该生物不可缺少的营养物质D．水是该微生物的营养要素之一解析CO2是无机碳源，不能作为该微生物的能源物质。答案B4．下面对菌落的表述，不正确的是()A．肉眼可见的菌落一般均是由许多种细菌大量繁殖形成的B．霉菌等在面包上形成的不同颜色的斑块即为菌落C．噬菌体能使固体培养基上的细菌裂解从而使菌落变得透明D．细菌、放线菌和真菌在培养基上形成的菌落形态不同解析由于细菌间存在着竞争关系，故不同种类的细菌不可能生长到一块，成为肉眼可见的菌落，故A错B对；不同种类的细菌所形成的菌落具有一定的特征，可以作为菌种鉴定的重要依据；噬菌体能在细菌体内增殖从而使细菌裂解死亡，故C、D正确。答案A5.下列叙述正确的是()A．培养基是为微生物的生长、繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌解析培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质；按物理性质培养基分为三类：液体培养基、固体培养基和半固体培养基。答案A6．关于配制培养基的叙述，正确的是()A．制作固体培养基必须加入琼脂B．加入青霉素可得到放线菌C．无机氮源也能提供能量D．发酵工程一般用半固体培养基解析配制固体培养基时，琼脂不是唯一的凝固剂；青霉素可抑制细菌和放线菌的生长；发酵工程一般用液体培养基；硝化细菌所利用的NH3是无机氮源，但也可提供能量。答案C7．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可分别用于杀死哪些部位的杂菌()A．接种针、手、培养基B．高压锅、手、接种针C．培养基、手、接种针D．接种针、培养基、手解析高压蒸汽灭菌适用于培养基、工作服、橡胶物品的灭菌；酒精应用于皮肤及器械消毒；火焰灼烧适于接种环、接种针和金属用具灭菌，如镊子等。答案C8．下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是()A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基和培养物B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种C．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者解析用平板划线法分离大肠杆菌的实验中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养基和培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束仍灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。答案C9．牛肉膏蛋白胨培养基中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于对琼脂的说法不正确的是()A．不被所培养的微生物分离利用，对所培养的微生物无毒害作用B．在微生物生长温度范围内保持固体状态C．琼脂凝固点温度低，利于微生物的生长D．凝固剂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强解析理想的凝固剂应具备以下条件：不被所培养的微生物分解利用；在微生物生长的温度范围内保持固体状态，凝固剂凝固点不能太低，否则不利于微生物的生长，如琼脂凝固点为40℃；对所培养的微生物无毒害作用，并且在灭菌时不会被破坏，透明度好，凝固力强，配制方便，价格低廉。常用的凝固剂有琼脂、明胶。答案C10．无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是()A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B．将用于微生物的培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌C．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行D．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触解析对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒，而不是灭菌。消毒和灭菌的程度不同。答案A11．含C、H、O、N的某大分子化合物可以作为()A．异养微生物的氮源、能源B．异养微生物的碳源、能源C．自养微生物的碳源、氮源、能源D．异养微生物的碳源、氮源、能源解析这道题首先要考虑含C、H、O、N的化合物可以提供的营养物质类型，然后再确定可以提供给何种类型的微生物。含C、H、O、N的化合物，能够提供碳源、氮源，这样的物质，可以是有机物的蛋白质等，也可以是无机物的NH4HCO3。题干中指出该物质是大分子化合物，就不可能是无机物的NH4HCO3，只能是蛋白胨等。这种化合物是可以培养异养型微生物的，是异养微生物的碳源、氮源、能源。答案D12．有关平板划线操作正确的是()A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养解析每一次接种前，接种环都要在酒精灯火焰上灼烧灭菌，试管口通过火焰后再塞上棉塞，划线时注意不要划破培养基，在第一区域划线完毕后，还要在第二、三、四、五区域内划线。答案D13．下列操作与消毒灭菌无关的是()A．接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双手B．接种前用火焰灼烧接种环(针)C．培养基在50℃左右时搁置斜面D．接种时在酒精灯的火焰旁完成解析在微生物培养时，一定要建立无菌概念，因此在各步接种操作时都必须注意灭菌，这是获得微生物培养的关键。常用的方法有化学消毒和物理灭菌两大类，题中肥皂洗手、酒精擦拭属消毒，火焰灼烧属灭菌；而培养基在50℃左右时搁置斜面，是因为培养基在50℃时呈液态，温度降低时，培养基凝固，可形成固体斜面培养基。答案C14．发酵工程的第一个重要工作是选择优良的单一纯种。消灭杂菌，获得纯种的方法不包括()A．根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基B．根据微生物需要的生长因子的种类，在培养基中增减不同种类的生长因子C．根据微生物遗传组成的差异，在培养基中加入不同比例的核酸D．根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同种类的抗生素解析由于不同的微生物对碳源、氮源、无机盐、生长因子的需求不同，可以根据微生物的生长需求来配制特殊的培养基，以获得单一的纯种，也可以根据其对抗生素的敏感性不同，加入不同的抗生素来获得单一的纯种。答案C15．下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是()A．培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至100mLB．用1mol/L的NaOH调节pH，使pH为5.0～6.0C．加压至100kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气D．将接种环放在酒精灯上灼烧，灭菌后立即伸入盛菌液的试管内挑取少量菌种解析此题是对实验操作步骤的考查。要求同学们对实验不能死记硬背，要在理解的基础上记忆，否则很难记住书本中的每一个实验的操作步骤。A选项应该先加水，后加热熔化，否则培养基会被烧焦；B项用1mol/L的NaOH调节pH是正确的，但金黄色葡萄球菌是细菌，本实验就应把pH调节到6.5～7.5。答案C二、简答题(共40分)16．(11分)下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此完成问题：成分牛肉膏蛋白胨NaClH2O含量0.5g1g0.5g100mL(1)蛋白胨在培养基中的作用是______________________________________________________。(2)要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是________________。(3)表中各成分含量确定的原则是_____________________________________________________。(4)培养基配制好后，分装前应进行的工作是_____________________________________________________。(5)从配制培养基到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法是__________________________________________________。(6)在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是______________________________________________________。答案(1)提供碳源、氮源、生长因子(2)琼脂(或凝固剂)(3)所培养微生物对各营养成分的需要量(4)调pH(5)高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精棉球擦手、棉塞塞试管口、在火焰旁接种(6)扩大接种面积17．(9分)为了获得纯度高的大肠杆菌，需要对大肠杆菌进行培养和纯化。培养大肠杆菌一般用牛肉膏—蛋白胨—琼脂培养基。(1)配制固体培养基的基本步骤是：计算―→称量―→________―→________―→倒平板。(2)称量时，由于牛肉膏比较黏稠，可以用________挑取，放在________上称量。由于牛肉膏和蛋白胨________，称量时动作要迅速，称量完毕后要及时盖上瓶盖。(3)在牛肉膏—蛋白胨—琼脂培养基上的大肠杆菌能生长，说明培养基含有________________________等大肠杆菌生长所需的营养要素。(4)微生物纯化培养可以通过多种接种方法，如________和________等，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个________，从而获得纯种菌株。解析考查微生物纯化培养的基础知识。答案(1)溶化灭菌(2)玻璃棒称量纸容易吸潮(3)碳源、氮源、无机盐、水(4)平板划线法稀释涂布平板法菌落18．(20分)某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答问题：(1)接种前需要对培养基及培养皿等进行灭菌，常用的灭菌方法是________________。培养基中加入化合物A的目的是筛选________。(2)实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是________。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量________。(4)转为固体培养时，为获得单菌落进行继续筛选，常采用划线分离法或________法，接种完菌种后，应将培养皿________(填“正放”或“倒置”)。(5)下列有关划线分离法的操作，错误的是()A．在操作的第一步以及每次划线之前都要将接种环放在火焰上灼烧B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连(