搜索
专题2微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数作业目标①知道土壤中分离与纯化微生物的研究思路和方法；②掌握微生物数量的测定方法；③了解选择培养基的配制方法。作业设计限时：40分钟满分：100分一、选择题(每题4分，共60分)1．不用显微镜也可以鉴定细菌的种类，主要依据是细菌菌落的特征。下列哪项不是菌落的特征()A．大小和形状B．光泽度和透明度C．颜色和硬度D．气味和pH解析不同种类的细菌所形成的菌落大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征，所以，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。答案D2．对表层土壤中自生固氮菌的分离主要采取的原理(方法)是()A．依据自生固氮菌的生长繁殖不需要培养基中添加氮源B．依据不同微生物生长繁殖所需pH不同C．依据不同微生物生长繁殖所需温度条件不同D．依据不同微生物代谢类型不同解析本题考查培养基的选择性、微生物的生长发育特点、影响微生物正常生长的因素。影响微生物生长的因素有多种，除培养基的营养外还有温度、pH、氧等。在无氮培养基中只有固氮菌能正常生长繁殖。答案A3．下列叙述错误的是()A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C．只有得到了3个或3个以上菌落数目在30～300的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析土壤中的各类微生物数量不同，含量最多的是细菌，大约70%～90%是细菌，其次是放线菌，最少的是真菌，所以为获得不同类型的微生物要按不同稀释倍数进行分离；在同一稀释度下只要得到2个或2个以上的菌落数目在30～300的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数；验证选择培养基是否具选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基作对照，若后者上的菌落数明显大于前者，则说明前者具筛选作用。答案C4．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水解析分解尿素的细菌为异养型细菌。答案A5．应用选择培养基的主要原理是()A．使所需要的微生物大量增殖B．显现某微生物特征，以区别其他微生物C．抑制不需要的微生物的生长D．适宜野生型微生物的生长解析选择培养基是在培养基中加入某一化学物质或改变某一理化性质，使某一微生物正常生长，而其他微生物则被杀灭或抑制，从而选出所需要的微生物。答案C6．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和256，取平均值233解析在设计实验时，一定要涂布至少三个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B项不正确；C项虽涂布了三个平板，但是，其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此不能简单用三个平板的计数来求平均值。答案D7．现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，你认为它们适于分离()A.甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙培养基适于分离异养型自生固氮菌B．甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分离自养型自生固氮菌C．甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌D．甲培养基适于分离自养型共生细菌；乙培养基适于分离异养型共生固氮菌解析固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌，甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物，由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌；乙培养基中不含有机碳源，所以可用来分离培养自养型的自生固氮菌。答案B8．关于土壤取样的叙述，错误的是()A．应选取肥沃，湿润的土壤B．先铲去表层土3cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤解析微生物实验操作的整个过程中，都应采用无菌操作。答案C9．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是()A．未接种的选择培养基B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D．接种了的选择培养基解析将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此以牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。答案C10．选择土壤中分解尿素的微生物所需氮源为()A．硝酸B．氨C．尿素D．蛋白胨解析只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素为氮源；缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源不能生长、发育、繁殖而受到抑制，所以，能够选择出分解尿素的微生物。答案C11．产生标准菌落的细胞的最初数目和培养基分别是()A．一个细菌，液体培养基B．许多细菌，液体培养基C．一个细菌，固体培养基D．许多细菌，固体培养基解析菌落是一个或几个细菌的子细胞群体，在固体培养基上肉眼可见，是作为菌种鉴定的重要依据，若是多种细菌形成的菌落则不是标准菌落。答案C12．需要在火焰旁操作的有()①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④解析火焰提供了一个小范围的无菌空间，为了防止杂菌污染，称取土样、稀释土壤溶液和涂布平板都应在火焰旁进行，土壤取样不用在火焰旁进行，但所用器具必须先灭菌；微生物的培养在恒温箱中进行，无需灭菌。答案D13．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧D．①④⑥⑦解析土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中只加尿素，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物要用固体培养基；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物，需要加葡萄糖作为碳源。答案C14．有三位同学，利用稀释涂布平板法来测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释106倍的培养基中，得到如下表的结果。你认为下列数据中最接近真实值的是()同学统计菌落数平均值甲230230乙21212256163丙222260241A.230B．163C．241D．236解析用稀释涂布平板法统计活菌落，每个稀释浓度下，至少涂布三个平板，所以甲和丙的结果不可靠；乙虽然涂布了三个平板，有一个平板的菌落数(21)和另外两个相差甚远，且不在30～300之间，21这个数据不能用。要得到较准确的结果，应把甲、乙、丙三位同学所做的符合要求的数据一起统计，即(230＋212＋256＋222＋260)/5＝236。答案D15．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学选择出大约50个菌落。A同学结果的产生原因可能有()①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④解析A同学比其他同学的实验结果数据大许多，可能是由于选取的土样不同、培养基灭菌不彻底或操作过程中杂菌污染，也可能是操作失误，如配制的培养基中混入其他含氮物质，稀释度不够准确等。答案A二、简答题(共40分)16．(8分)请回答下面两个实验中的问题：(1)实验室保存的大肠杆菌不慎混入了酵母菌，如图所示为将混合菌液稀释后，利用固体培养基培养所显示的两种菌落。下面是筛选分离大肠杆菌的一般操作步骤，请回答：第一步：向一个培养皿内加入某种物质，其中的大肠杆菌不能生存，而酵母菌生存不受影响。加入的某种物质最可能是________________________________________________________________________。第二步：通过对________________________，则可以鉴别并筛选出大肠杆菌。(2)你认为怎样才能得到被32P标记的T2噬菌体？请简述你的实验方案。第一步：________________________________________________________________________________________________________________________________________________；第二步：_______________________________________________________________________________________________。解析本题主要考查微生物选择培养的有关知识。选择培养基的作用是将某一种微生物从混杂的微生物群体中分离出来。答案(1)青霉素(或抗生素)另一培养皿内两种菌落的比较(2)将宿主细菌培养在含32P的培养基中，获得含有32P细菌用T2噬菌体去感染被32P标记的细菌，待细菌裂解后，释放出的噬菌体便被32P标记上了17．(16分)从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从________________环境采集。(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择____________________的培养基，并在________条件下培养。(3)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。获得图A效果的接种方法是________________，获得图B效果的接种方法是________________。(4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行________，接种前要进行________________，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在________条件下进行。解析噬盐菌的菌样应从高盐环境采集。微生物产生淀粉酶说明其碳源是淀粉，应选择以淀粉为唯一碳源的培养基，并在高温条件下培养。图A菌落分布较均匀，接种方法是稀释涂布平板法，图B菌落集中呈线状，接种方法是平板划线法。配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整pH，接种前要进行高压蒸汽灭菌，在实验中要注意在无菌条件下进行。答案(1)海滩等高盐(2)以淀粉为唯一碳源高温(3)稀释涂布平板法平板划线法(4)pH调整高压蒸汽灭菌无菌18．(16分)某同学在做微生物实验时，不小心将圆褐固氮菌和酵母菌混在一起。该同学设计下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。(1)实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖，而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。(2)材料用具：(略)(3)主要步骤：①制备两种培养基，一种是无氮培养基，另一种是含有青霉素的培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标上A、a和B、b。②分别向A、B培养基接种混合菌，适宜条件培养3～4天。③分别从A、B培养基的菌种中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，适宜条件下培养3～4天。(4)请回答：①本实验中，根据上述原理配制的培养基属于________培养基。②根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外，还应注意____________________________________________。③实验步骤中第③步的目的是____