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河北农业大学本科毕业论文题目：复方中药枳术汤对雏鸡生产性能及免疫器官的影响学院：动物医学院专业班级：动物医学1002班学号：2010084020208学生姓名：曹莹莹指导教师姓名：赵兴华指导教师职称：副教授2014年06月05日1复方中药枳术汤对雏鸡生产性能及免疫器官的影响学生：曹莹莹指导老师：赵兴华（河北农业大学动物医学院，河北，保定，071000）摘要：实验旨在研究复方中药枳术汤对雏鸡生产性能和免疫器官的影响。选择175只一日龄海蓝灰雏鸡随机分为5组：采用标准日粮进行饲喂。经母源抗体检测后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、四组于10日龄首免鸡新城疫C30-86冻干苗，每只鸡滴鼻点眼2羽份，在10日龄时按照日饲料量的1%(Ⅰ组)、2%（Ⅱ组）饲喂复方中药枳术汤（ZZT），28日龄二次免疫（剂量和方法同首次免疫）。Ⅴ组为空白对照组，不免疫不给药，正常饲养。于17、24、31、38、45日龄时，早晨8点喂料之前进行称重，然后每组分别随机抽取7只鸡，心脏采血，静置两小时后，3000转/分钟离心10分钟分离血清待用，采集免疫器官并计算免疫器官指数。通过测定试验雏鸡的日增重、料肉比、免疫器官指数、IL-2血清ND抗体水平、IFN-γ的影响。结果显示，枳术汤对雏鸡生产性能和免疫器官指数具有整体性优势。关键词：复方中药枳术汤；免疫器官指数；IL-2；雏鸡；生产性能；EffectofcompoundChineseherbalmedicineofZhizhuDecoctiononproductionperformanceandimmuneorgansinchickensStudent：yingyingcaoAdvisor：xinghuazhao(CollegeofAnimalScienceandTechnology,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding071001)Abstract：TheexperimentwasconductedtostudytheeffectsofcompoundChinesemedicineofZhizhuDecoctiononproductionperformanceandimmuneorgansinchickens.175dayoldbluegraychickenswererandomlydividedinto5groups:thestandarddietfed.Thedetectionofmaternalantibodies,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,fourgroupsat10daysofagethefirstimmunizationofNewcastlediseasevirusC30-86vaccine,intranasalinstillationof2perchickenfeather,attheageof10daysinaccordancewiththeamountoffeedof1%(groupI),2%(GroupII)fedwithcompoundChinesemedicineZhizhusoup(ZZT),28days(twotimesofimmunizationdoseandmethodwiththefirstimmune).Vgroupwastheblankcontrolgroup,isnotimmunetothemedicine,thenormalfeeding.In17,24,31,38,45days,8pointsbeforemorningfeedingwereweighed,andeachgroupwererandomlyselectedfrom7chickens,heartblood,standingfortwohours,centrifugedat3000rpmfor10minutestoseparateserumstand-by,collectandcalculatetheimmuneorganindexofimmuneorgans.Throughthetestofthedailyweightgain,feedandmeatchickensthan,immuneorganindex,serumNDantibodylevelsofIL-2,IFN-γ.Theresultsshowedthat,withtheoveralladvantagesofZhizhuDecoctiononproductionperformanceandimmuneorganindexofchicksKeywords:CompoundChinesemedicineofZhizhuDecoction;immuneorganindex;IL-2;chicken;productionperformance1.前言1.1研究目的及意义2随着社会发展与经济进步,畜产品的安全问题引起人们越来越广泛的关注,而要保证畜产品的卫生安全,必须从畜牧生产的源头抓起,在生产环节严格控制直至杜绝抗生素、化学促生长物等作为饲料添加剂的使用,这已成为国内外畜牧业界的共识和研究的热点。中国传统的中草药在寻找抗生素与化学促生长物的研究中占据了重要的位置,中草药作为动物保健剂和饲料添加剂在畜牧生产中得到越来越普遍的应用并受到养殖者们的欢迎。但是,以中草药作为饲料中基本成分持续使用的研究报道还不多见。中草药是我国特有的中医药理论与实践的产物，而作为饲料添加剂使用，具有不易产生耐药性、无残留、毒副作用小、功能全面等优点，引起了畜牧业工作者的极大关注。因此，中草药饲料添加剂的研制开发，对于发展绿色畜牧业、保证人类的身体健康、促进畜产品的出口创汇，具有重要的经济效益和社会效益。抗生素作为饲料添加剂在饲料工业中的应用已有几十年的历史，曾对畜牧业的发展起到了积极的推动作用[1]。枳实为芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果，枳实属理气中药，有破气消积；化痰除痞的功效。白术是菊科苍术属的一种植物，单叶、狭长，花紫色，头状花序，以根茎入药，能够补脾益气、燥湿利水。其含有白术多糖、挥发油、氨基酸等多种有效成分[3-7]。白术多糖在一定的浓度范围内能单独激活或协同ConA、PHA促进正常小鼠淋巴细胞转化，并明显提高IL-2分泌的水平。氢化可的松造成小鼠的免疫抑制，白术多糖对淋巴细胞的增殖功能有恢复的作用，并提高免疫抑制小鼠脾脏细胞体外培养的存活率，延长淋巴细胞寿命，纠正T细胞亚群分布紊乱状态，可使低下的IL-2水平显著提高。1.2研究内容采用标准日粮进行饲喂。经母源抗体检测后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、四组于10日龄首免鸡新城疫C30-86冻干苗，每只鸡滴鼻点眼2羽份，在10日龄时按照日饲料量的1%(Ⅰ组)、2%（Ⅱ组）饲喂复方中药枳术汤（ZZT），28日龄二次免疫（剂量和方法同首次免疫）。Ⅴ组为空白对照组，不免疫不给药，正常饲养。于17、24、31、38、45日龄时，早晨8点喂料之前进行称重，然后每组分别随机抽取7只鸡，心脏采血，静置两小时后，3000转/分钟离心10分钟分离血清待用，采集免疫器官并计算免疫器官指数。研究中草药复方对肉仔鸡生产性能和免疫器官的影响。这对雏鸡的绿色养殖具有重大意义。2材料与方法2.1试验材料2.1.1试验动物与试剂药品31日龄健康海兰灰雏公鸡，购自北京市峪口种鸡场；鸡新城疫C30-86疫苗（杭州荐量生物工程有限公司，批号：121005）；免疫因子(河南森隆兽药有限公司，批号：20120821)；鸡新城疫抗原（中国兽医药品监察所，批号：120313）；一次性血凝板APES（姜堰市新康医疗器械有限公司）；IFN-γ、IL-2试剂盒（均购自美国RD公司）；磷酸缓冲盐、枸橼酸钠、枸橼酸、乙醇、PBS磷酸缓冲盐等均为国产分析纯试剂；中草药枳实和白术购于河北省安国市中草药批发市场。2.1.2主要仪器设备MDF-382E直立式超低温冰箱（SANYOElectricBiomedical）；BCD-189型冰箱（青岛海尔股份有限公司）；移液器（百得实验仪器有限公司）；XSP-C型生物显微镜（重庆广电仪器有限公司）；酶标仪9602（北京普朗有限公司）；AS200-5型电子天平（OHAUS）；LDZ4-0.8型低速离心机（北京医用离心机厂）；HPX-9162MBE数显电热培养箱（上海博讯实业有限公司）；DHW-600恒温水浴锅（北京国华仪器厂）；KQ-400DB型KQ-400DB（昆山超声仪器有限公司）；MILLI-QRG纯水处理器；YX-280D高压灭菌锅（江阴滨江医疗设备厂2.2试验方法2.2.1试验动物饲养与分组处理试验前1周，将饲养工具与周围环境用高锰酸钾与甲醛进行熏蒸5d，然后开窗通风。在雏鸡到之前将室内温度提高到36℃，饲养连续三天后，将室内温度逐渐下降至室温；前3天光照24h，以后每天降一小时逐渐到日常光照；前十天室内湿度为70%左右，饲喂十天后逐渐降至60%；保证充足洁净饮水，采用标准日粮进行饲喂。将175只1日龄海蓝灰雏鸡随机分为5组，每组35只，7个重复，采用标准日粮进行饲喂。经母源抗体检测后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、四组于10日龄首免鸡新城疫C30-86冻干苗，每只鸡滴鼻点眼2羽份，在10日龄时按照日饲料量的1%(Ⅰ组)、2%（Ⅱ组）饲喂复方中药枳术汤（ZZT），28日龄二次免疫（剂量和方法同首次免疫）。Ⅴ组为空白对照组，不免疫不给药，正常饲养。于17、24、31、38、45日龄时，早晨8点喂料之前进行称重，然后每组分别随机抽取7只鸡，心脏采血，静置两小时后，3000转/分钟离心10分钟分离血清待用，采集免疫器官并计算免疫器官指数。具体分组及用药见表1。4表1试验分组与用药Table1Animaltreatmentindifferentgroups组别n给药浓度给药方式给药时间免疫情况Ⅰ（ZZT）低剂量组351%拌料Day10-45C30-86冻干苗Ⅱ（ZZT）高剂量组352%拌料Day10-45C30-86冻干苗Ⅲ免疫对照组35———C30-86冻干苗Ⅳ“免疫因子”组35按说明投药拌料Day10-45C30-86冻干苗Ⅴ空白对照组35————2.2.2生长性能在每个试验时间点早晨8点喂料之前进行称重，记录每天耗料量。计算平均日增重和料肉比。平均日增重＝（末重－初重）/天数；料肉比＝日耗料量/日增重；2.2.3免疫器官指数的测定将各组雏鸡早晨8点开始空腹称重；采集对应的脾脏、法氏囊和胸腺，用滤纸吸去表面水分，然后用分析天平称重、记录。根据所称重量计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重mg/体重g2.2.4血清ND抗体水平检测⑴4单位抗原的配制在一次性96孔微量血凝板上标号，第一排1-11孔依次向每孔加入PBS液25μL，第12孔加50μL，二三排重复上述操作。再向每排的第1孔加入25μL按标签稀释后的鸡新城疫抗原，吹吸混合均匀，吸25μL至第2孔，吹吸混合均匀，依次同上向后倍比稀释至第11孔，弃去25μL。然后每排的第1-11孔加入PBS液25μL，最后每孔加入1%的鸡红细胞悬液25μL，第1-11孔为试验组，第12孔为红细胞对照孔。将96孔板置于微量振荡器上震动混匀，室温静置40分钟，观察结果。结果判定，96孔板倾斜45°，和对照孔进行比较。倾斜后底部红细胞完全不流动为被新城疫抗原完全凝集，底部红血球呈线性流淌表明红细胞未被或不完全凝集。以100%凝集的抗原最大稀释倍数为该抗原血凝价，即一个凝集单位，从该孔的抗原稀释倍数除以4的稀释倍数，则作为该抗原的4单位抗原。检测血清抗体时对抗原进行二标用以检测抗原配比比例正确。⑵样品的检测在一次性96孔微量血凝板上，每排1-11孔依次向每孔加入PBS液25μL，第12孔加50μL，再向每排的第1孔加入25μL待测血清，吹吸混合均匀，依次同上向后倍比稀释至第10孔，然后向第1-11孔每孔加入25μL4单位抗原，在微量振荡器上振荡混匀，室5温静置30分钟，向每孔加入1%的鸡红细胞悬液25μL，振荡混匀，室温静置40分钟，观察。11孔为抗原对照孔，12孔为红细胞对照孔，结果以出现