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1本科生毕业论文（设计）题目:硼对去卵巢大鼠抗氧化能力的影响姓名:叶跃天学院:动物科学学院专业:动植物检疫班级:2012动植物检疫122班学号:1225120224指导教师:胡倩倩职称:副教授2016年6月2日安徽科技学院教务处制2硼对去卵巢大鼠抗氧化能力的影响2012级动植物检疫122班：叶跃天指导老师：胡倩倩（副教授）摘要：目的研究探讨饮水添加不同水平硼去卵巢大鼠血清中抗氧化成分是否有影响及其变化趋势。方法选择在饮水中三种不同水平硼。84只SPF雌性大鼠，随机分为7组：Sham组、Sham+B40组、OVX+Est组、OVX组和OVX+B20、B40、B80三组。Sham组不去卵巢，减去部分脂肪，饲喂基础饲料，饮水不添加硼，Sham+B40组饮水添加硼40mg/L，其他五组手术组中分别灌服雌激素、不添加雌激素和硼、饮水添加硼20mg/L、20mg/L、80mg/L。分别于第9w、22w每组分别随机选取大鼠6只，乙醚麻醉后心脏取血，4℃保存。结果：在第9w时，和试验Ⅱ组相比，试验Ⅲ、Ⅳ组的GSH活性升高，无显著差异(P0.05)，试验Ⅴ组GSH活性降低，无显著差异（P0.05）。试验Ⅲ、Ⅴ组的T-SOD活性升高，无显著差异(P0.05)，试验Ⅳ组T-SOD活性升高，有显著差异（P0.05）。试验Ⅲ、Ⅳ组的MDA含量降低，有极显著差异(P0.01)，试验Ⅴ组MDA含量降低，无显著差异（P0.05）。试验Ⅲ、Ⅳ组的CAT活性升高，但无显著差异(P0.05)，试验Ⅴ组CAT活性降低，无显著差异（P0.05）。第22w时，和试验Ⅱ组相比，试验Ⅲ组GSH活性升高了，但无显著差异（P0.05），试验Ⅳ组的GSH活性升高了，有显著差异（P0.05），试验Ⅴ组GSH活性降低，有显著差异（P0.05）。试验Ⅲ、Ⅳ组T-SOD活性升高，有显著差异（P0.05），试验Ⅴ组T-SOD活性升高了，无显著差异（P0.05）。试验Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组MDA含量降低，无显著差异（P0.05）。试验Ⅲ组CAT活性升高，无显著差异（P0.05），试验Ⅳ组CAT活性升高，有极显著差异(P0.01)，试验Ⅴ组CAT活性升高，无显著差异（P0.05）。结论：饮水添加硼40mg/L有利于提高去卵巢大鼠血清中GSH、T-SOD、CAT的活性，有利于降低MDA含量。关键词：去卵巢；大鼠；硼；抗氧化硼(Boron)是地壳中含量很低的一种非金属元素，兼有金属和非金属特性；自然界中，硼常以硼砂和硼酸等化合物形式存在，并广泛用于工业、农业、化工、食品和医疗卫生等领域。然而近些年来，随着硼矿开采及含硼化合物的广泛应用甚至滥用，硼对人和动物健康的影响也越来越大。硼是动物的必需微量元素,对动物的生长、健康有一定的作用和影响[1]。还有研究表明，硼有类雌激素样作用，生理量硼对人和动物有营养作用，高剂量硼则有不良影响甚至毒性作用，其中生殖和发育毒性是其最灵敏终点［2］。我国环境科学家魏复盛院士也将硼酸称为一种较弱的环境雌激素［3］。INCE等［4］研究显示，饲粮中添加硼可促进大鼠脂质过氧化反应，增强抗氧化酶活性，抑制氧化应激造成3的DNA损伤。由此可见，研究硼酸及其化合物对人和动物健康状况的影响已显得日趋重要。自由基是生物体正常的代谢产物，参与机体多种生理过程。正常情况下，机体内自由基的产生和清除处于动态平衡之中，而在病理情况下，自由基代谢的平衡遭到了破坏，发生紊乱，使得自由基过剩，活性氧增多，导致机体发生衰老或是疾病[5]。代谢平衡是通过机体的抗氧化酶来维持的，主要有T-SOD、GSH、CAT等，可以通过测定血清中这些酶的活性来反应机体抗氧化的能力。MDA是体内自由基攻击细胞膜上不饱和脂肪酸而引起的脂质过氧化作用的产物，对MDA含量的测定可间接反应细胞膜的受损情况[6-7]。李明[8]等人的实验结果显示,骨质疏松模型组动物血清MDA水平升高,SOD水平下降,GSH-Px减少，说明骨质疏松形成时,血清活性氧成分减少,抗氧化成分降低。康龙丽[9]等人的研究表明“硼复方”有治疗过量弗所引起的过氧化损伤。李升和[10]等人的研究表明饮水添加适量硼元素有利于提高GSH、SOD、CAT的活性，过量则会降低GSH、SOD、CAT的活性，提高MDA的含量，对机体有一定毒性作用。在肥育猪上的研究发现，在日粮中补充硒可使血清和组织中硒含量上升，MDA含量下降［11］。本试验研究硼对去卵巢大鼠的血清抗氧化能力的的影响，为硼元素在动物生产中提供科学和理论依据。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物SPF级雌性SD大鼠84只（用于去卵巢模型的建立），体重（200±20）g；由安徽医科大学实验动物中心提供，饲养于安徽科技学院动物房。1.1.2饲料配方饲料配方是根据NRC（1994）推荐的大鼠营养需要配制的基础日粮，其组成及营养水平如下：水分≤10%，粗蛋白≥18.15%，粗脂肪≥4.03%，粗纤维≥5.12%，粗灰分≥7.94%，钙1.43%，磷0.87%，硼1.96mg/kg。1.1.3主要药品、器械及耗材速眠新Ⅱ（盐酸赛拉嗪液）、苏醒灵（妥拉苏林和新斯的明复合液）、乙醚、碘伏、475%酒精、青霉素、新洁尔灭、报纸、棉球、纱布、医用羊肠线4/0、非吸收性外科缝线4/0；手术刀、眼科剪、眼科镊、持针钳、缝合针、电动剃毛器。所有器械耗材使用前经高压消毒或0.1%的新洁尔灭浸泡消毒。超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒均购于南京建成生物工程研究所；1.1.4主要仪器与设备MultiskanGo酶标仪（Thermo公司）、XW-80A型微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）、低速离心机（Eppendorf）、恒温水浴箱、大鼠饲养笼具由安徽科技学院细胞分子生物学中心提供；大鼠饲养笼具由安徽科技学院动物医学实验室提供。1.2方法1.2.1去卵巢大鼠模型的建立术前大鼠禁食禁水12h，经乙醚呼吸麻醉，腿部肌肉注射麻醉药速眠新Ⅱ，仰卧保定，术部剃毛，碘酊棉球擦拭后用酒精棉球擦拭脱碘。沿腹正中线切开皮肤、腹部肌肉和腹膜，在腹腔内找到卵巢并进行摘除（假手术组不摘除卵巢，仅摘除卵巢周围等量脂肪），将腹部肌肉连同腹膜做连续缝合，关闭腹腔皮肤做结节缝合，整理术部皮肤使创口切面对齐。术后清除腹部皮肤以及周围毛发上的血迹，碘酊擦拭缝合处；腿部肌注青霉素、苏醒灵（注射剂量与速眠新Ⅱ相同）。术后须清除大鼠身上残留血迹，密切观察大鼠活动。1.2.2动物分组与处理术后1周进行分组实验，未摘除卵巢的假手术（Sham组）大鼠随机分为2组，Sham组饮水为蒸馏水，Sham+B40组其饮水中添加40mg/L硼；手术摘除卵巢大鼠（OVX组）随机分为5组：OVX组饮水为蒸馏水，OVX+Est组饮水中添加雌激素，OVX+B20、B40、B80三组饮水分别添加20、40、80mg/L硼。假手术组大鼠行手术，不摘除卵巢，只摘除卵巢周围部分脂肪；对去卵巢组大鼠两侧卵巢进行摘除，造骨质疏松模型。手术后1周内，安排人员值班，对大鼠进行全天候轮班护理。每日上午7点，晚上9点对大鼠饲料及饮水进行补充，并记录日、夜采食量和饮水5量，每晚9点对实验大鼠灌服雌激素，每粒雌激素研碎，用1ml蒸馏水混匀，每只用注射器灌服0.2ml，每周日晚上9点对大鼠进行称重并记录。环境温度维持在24-28℃，相对湿度维持在40-70%，每天早、中、傍晚、晚上定时观察大鼠状态，每次时间不少于30min，注意大鼠有无异常表现，如精神沉郁、亢奋，咬伤等。1.2.3抗氧化指标测定于实验第9、22W，每组随机选取大鼠6只，乙醚麻醉、打开腹腔心脏采血，4℃过夜，3000r/min离心10min，分离血清于-20℃保存待用。CAT活性采用可见光法检测，GSH-PX的活性采用比色法检测，T-SOD采用羟胺法检测，MDA活性采用TBA法检测。CAT、GSH-PX、T-SOD、MDA的活性检测步骤参照试剂盒说明书。1.2.4数据处理使用SPSS17.0数据处理软件对实验数据进行统计分析，并采用单因素ANOVA数据分析方法比较，结果以“平均数±标准差”（x±SD）表示。2结果与分析2.1硼元素对去卵巢大鼠血清中GSH-Px活性的影响表一硼元素对去卵巢大鼠血清中GSH-Px活性的影响组别只数血清GSH-Px含量（nU/ml）9w22wSham组6695.73±35.85aA738.14±44.30abSham+B40组6699.64±18.82aA774.59±47.21aOVX+Est组6666.73±61.07aAB743.59±39.60abOVX组6549.14±98.69bcC678.18±37.73bOVX+B20组6579.14±64.65bcBC706.64±81.36abOVX+B40组6627.96±70.29abABC737.77±70.54abOVX+B80组6519.96±35.30cC634.68±64.54ab注：不同小写字母差异显著P0.05；不同大写字母差异极显著P0.01；未标注字母差异不显著。下表同。在第9w时，和OVX组相比，OVX+B20组、OVX+B40组的GSH活性分别升高（P=0.438、P=0.048），但无显著差异，OVX+B80组GSH活性降低（P=0.451），无显著差异（P0.05）。第22w时，和OVX组相比，OVX+B20组、OVX+B40组GSH活性升高（P=0.446、P=0.117），无显著差异，OVX+B80组GSH活性降低（P=0.117），也无显著差异。62.2硼元素对去卵巢大鼠血清中T-SOD活性的影响表二硼元素对去卵巢大鼠血清中T-SOD活性的影响组别只数血清T-SOD含量（U/ml）9w22wSham组643.97±1.99a44.22±1.38bcSham+B40组644.84±0.94a47.31±1.51aOVX+Est组642.55±1.67a43.83±1.26bcOVX组637.63±5.44b42.24±1.45cOVX+B20组640.97±3.11ab44.84±0.66bOVX+B40组643.14±0.84a44.68±2.27bOVX+B80组640.42±5.05ab43.30±1.82bc在第9w时，和OVX组相比，OVX+B20组、OVX+B80组的T-SOD活性分别升高了（P=0.114、P=0.184），无显著差异，OVX+B40组T-SOD活性升高（P=0.012），有显著差异。第22w时，和OVX组相比，OVX+B20组、OVX+B40组T-SOD活性升高（P=0.013、P=0.019），有显著差异，OVX+B80组T-SOD活性升高（P=0.285），无显著差异。2.3大鼠血清MDA浓度表三硼元素对去卵巢大鼠血清MDA浓度的影响组别只数血清MDA含量（nmol/ml）9w22wSham组68.58±1.65cD4.04±1.19bSham+B40组67.11±2.33cD3.70±0.63bOVX+Est组68.92±3.91cCD4.05±0.45bOVX组620.29±2.51aA5.87±2.30aOVX+B20组613.77±2.26bBC4.76±0.77abOVX+B40组610.02±3.51cCD4.43±1.38abOVX+B80组617.11±1.73abAB4.78±1.01ab在第9w时，和OVX组相比，试验OVX+B20组、OVX+B40组的MDA含量分别降低（P=0.001P=0.000），有极显著差异，OVX+B80组MDA含量降低（P=0.071），无显著差异。第22w时，和OVX组相比，试验OVX+B20组、OVX+B40、OVX+B80组MDA含量分别降低（P=0.168、P=0.078、P=0.178），均无显著差异。72.4硼元素对去卵巢大鼠血清中CAT活性的影响表四硼元素对去卵巢大鼠血清中CAT活性的影响组