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猪瘟疫苗质量与免疫效果评价时凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪瘟和猪瘟病毒•猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种烈性传染病•猪瘟病毒属于黄病毒科瘟病毒属，与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)存在血清学交叉反应NproCErnsE1E2p7NS2NS3NS4ANS4BNS5ANS5BCOOHNH2结构蛋白非结构蛋白猪瘟疫苗的种类•原代细胞苗•传代细胞苗•E2亚单位苗•活载体疫苗（腺病毒载体、BVDV载体、嵌合病毒载体）生产疫苗的原材料•种毒（猪瘟兔化弱毒株=C株）•细胞（原代牛睾丸细胞、ST细胞、SK6等）•牛血清•培养基•冻干保护剂袁庆志研究员(1921－1988)周泰冲研究员(1916－1987)影响猪瘟疫苗质量的因素•疫苗含量（病毒滴度）：兔体发热法检测，≥750RID；定量RT-PCR法，≥7.5105拷贝•牛血清（潜在的过敏原、外源病毒的主要来源）•污染物：外源病毒（如BVDV/PCV）、支原体、细菌等•运输保存（冷链运输、低温保存）BVDV或BVDV抗体?FBS影响猪瘟疫苗免疫效果的因素•猪瘟母源抗体干扰（首免日龄）•疫病感染影响（如蓝耳病、BVDV感染）•其他疫苗干扰（如蓝耳病活疫苗）•免疫抑制剂（霉菌毒素、抗生素、皮质激素等）•营养（蛋白质、特定氨基酸、酶等）•应激（寒冷、高温、高湿、脱水、废气、噪音、拥挤、断奶、断尾等）猪瘟母源抗体消长规律猪瘟疫苗免疫效果评估•免疫攻毒（实验室评价）•抗体水平：母猪/公猪抗体水平、哺乳仔猪母源抗体水平、断奶仔猪免疫抗体水平•细胞免疫应答：需要用特殊方法检测•猪群中有无临床病例和特征病变•种猪野毒带毒情况（1%）•群体健康状况和生产成绩抗体检测方法•血清中和试验（保护性中和抗体滴度，≥1:50）•间接ELISA（工程中心有售）•IDEXX阻断ELISA（阳性：阻断率≥40%）免疫失败的原因分析•动物本身（发病、营养不良、日龄……）•疫苗本身（滴度不够、失真空、有效期、稀释液……）•免疫程序（母源抗体干扰、其他疫苗干扰、剂量……）•防疫人员（知识、责任心、注苗要领……）成功的免疫=正确的人+正确的疫苗+正确的时间+正确的动物对疫苗的正确认识•疫苗不是万能的，它只是疫病防控的最后一道防线（第一道防线：生物安全、环境控制、饲料营养、饲养管理等）•疫苗不是保健品，不是治疗药，也不是安慰剂•疫苗不是绝对安全的（妊娠母猪、新生仔猪、公猪、老弱病残猪），最低有效剂量使用剂量最大安全剂量•学点免疫学常识，科学安排疫苗的免疫时机、剂量、次数和间隔疫病防控的正确理念•传染病流行过程：传染源传播途径易感动物•预防为主，防重于治。圣人不治已病而治未病，不治已乱而治未乱。扁鹊三兄弟的故事：上工治未病，中工治欲病，下工治已病•猪瘟防控的关键：种猪净化，清除带毒母猪现地防疫的误区•主次不分，胡子眉毛一把抓---重大疫病与次要疾病的关系（防疫重点和层次）•过度免疫，疫苗免疫越多越好吗？抗体水平越高越好吗？动物的免疫资源和潜能是无限的吗？---防疫和生产的关系•舍本逐末，捡了芝麻丢了西瓜---非特异性免疫和特异性免疫的关系（固本培元，不要滥用抗生素）•华而不实，片面追求“漂亮”数据---群体免疫与个体免疫的关系（≥70-80%免疫保护）猪瘟疫苗的作用和局限性•猪瘟疫苗能、并且只能预防猪瘟（“一苗防一病”），一般情况下非常安全，对不同基因型都同样有效•现有的猪瘟疫苗很难区分疫苗接种和野毒感染（病毒可以区分，但抗体不好区分）•易受母源抗体的干扰，BVDV的干扰，其它疫苗的干扰•偶尔会有过敏反应新型嵌合载体猪瘟疫苗1.嵌合载体疫苗可以诱导消除性免疫和完全保护，免疫效果接近于C株2.嵌合载体疫苗对猪只、家兔、小鼠安全3.嵌合载体疫苗以较低的免疫剂量或一次免疫可以诱导完全保护4.嵌合载体疫苗一次免疫后3周可以诱导完全保护5.嵌合载体疫苗的效力不受猪瘟母源抗体干扰6.嵌合载体疫苗不影响伪狂犬病疫苗和蓝耳病疫苗免疫效力7.嵌合载体疫苗几乎不产生干扰性抗载体免疫8.嵌合载体疫苗的体外培养不受BVDV抗体影响9.嵌合载体疫苗可以允许鉴别诊断SunYetal.,Vaccine(2011;2013)关于伪狂犬病变异株•Bartha-K61株疫苗不能对PRVTJ株提供完全保护；•与SC株相比，TJ株对小鼠和猪致病性明显增强；•全基因组序列分析显示，TJ株多个病毒蛋白出现了大量的特征性变异；•我们构建的双基因缺失病毒rPRVTJ-delgE，对仔猪安全，且能对PRV变异株TJ株的攻击提供快速、完全的保护。LuoYetal.,VetMicrobiol(2014)WangCHetal.,Vaccine(2014)疫苗免疫以外的“功课”1.实行“全进全出”的饲养管理制度，彻底空栏清洗消毒2.不同来源的猪不要混养，不同月龄的猪不要混养3.妊娠母猪和仔猪断奶的精细管理4.科学合理的营养5.适当的饲养密度6.减少或避免应激因素，如惊扰、高温、高湿、寒冷、有害气体等7.做好猪场内外的生物安全措施，执行严格的防疫消毒制度（断尾、剪牙和打针）8.及时移走病猪，焚烧或深埋病死猪谢谢大家！