理化检测中的质量控制

理化检验实验室质量控制浙江省疾病预防控制中心黄百芬电话：[phone]Email:[e-mail]意义依据途径理化检测实验室质量控制质量控制的意义•1、准确可靠的分析结果是保障消费者健康和国际贸易顺利进行的前提。•2、质量控制是提供准确结果的必要条件。孔雀石绿、硝基呋喃碱性橙碱性玫瑰精09年“砒霜门”事件“砷超标”饮料复检“全部合格”质量控制的依据•ISO/IEC17025标准•《良好实验室规范》GLP•GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》•欧盟指令《欧盟委员会决议EN2002/657/EC》质量控制的依据•《执行关于分析方法运行和结果解释的欧盟指令96/23/EC》•GB/T5009.1-2003《食品卫生检验方法理化部分总则》•GB/T5750.3-2006《生活饮用水标准检验方法水质分析质量控制》质量控制的途径人机料法环测分析人员基本资源分析过程质量控制的途径环料机人法测分析人员严谨的工作态度专业资格丰富的工作经验系统培训设施耗材环境基础资源设备对实验室环境的要求•实验室的设计及试验设施的摆放：必须满足分析任务的要求，以保障最大的安全性和分析样品免受污染。•实验室内的建筑材料、实验用具、材料：必须能耐受所使用化学试剂的腐蚀。•有满足残留测定要求的区域：最好将样品接收与储存、样品制备、样品提取净化、使用仪器测定样品这些步骤在不同的房间进行。•进行适当的环境温湿度监控。对实验室设施的要求•实验室设计应满足有机溶剂的使用要求：所用的设备如试剂室的灯、存放试剂的冰箱必须做到防火防爆。•通风设施：样品提取、净化、浓缩均应在通风场所进行，最好是在通风橱中进行。•供水、供电、供气设施要求：必须保证实验室水电的充足和可靠的供应。对实验室设施的要求•个人防护设施：实验室应配备充足的防护镜、手套及其它防护衣服，有紧急冲洗设施和溶剂喷溅处理用具，有充足的防火器材。工作人员必须对被分析物的急、慢性毒性有全面的认识和了解。在使用有机物标准时必须加以小心，对废弃的标准溶液或阳性样品须进行相应的处理,符合三废处理要求。对设备的控制•计量用仪器设备必须按计划进行检定或校准，做好定期维护和日常维护工作，并保存相应的记录。•必须定期监测和检查冰箱、冰柜的运行温度，并保存记录。对标准物质的控制•标准物质：纯物质的标准物质RM含有合适基体的有证标准物质CRM用适当溶剂稀释标准溶液•储存在适当条件下。标准物质的管理及期间核查•标准物质管理：分析质量控制中准确度和精密度提高是以标准物质稳定性和准确性为前提的。•（1）购买标准物质应向供应方索取相应的证书，证书上有明示的浓度、有效期、不确定度、溶剂（标准液）等。•（2）新购的标准物质应经验收、建立试验数据；在使用期间，也应定期进行期限检查，以了解其变化动态，确定有效期。•（3）标准物质存放：有机标准物配制后最好熔封在玻璃安瓿内，低温避光保存。•（4）应建立标准物领用登记本，专人保管、请购。标准溶液期间核查（1）安瓿分装标准溶液：从安瓿中取一定量配制浓度系列，再封存，每隔一段时间，再用原溶液配制同样浓度系列。严格控制实验条件来比较两次标准曲线的斜率，斜率下降表明有损失。标准溶液期间核查（2）几支相同浓度同时配制的标准：先打开的标准的测定值与间隔一段时间后打开的另一支标准的测定值进行比较，以此类推，其变异程度为标准在此期间稳定性变化程度。（3）几个实验室用同一标准物分别配制相同浓度标准液，各自进行标准曲线测定，再按规定交换该标准液进行测定，比较测定结果差异，以观察同一标准的时间和空间变异。标准溶液期间核查（4）同种标准物来源不同时，应采用分别配制交叉测定的办法来检查标准的纯度及配制是否准确。标准溶液期间核查对试剂等耗材的控制•试剂要进行空白试验，以确保对测定无干扰。•过滤头须保证对被测成分无截留。国产滤头未过滤Milipor滤头Waters滤头分析过程中的质量控制•1.避免污染避免操作污染避免环境污染避免操作污染采样、样品运输、储存和样品分析都有可能引入污染，所有的玻璃器皿、试剂、有机溶剂和水在使用前都要检查是否有可能存在的污染，另外在实验中要做试剂空白。避免环境污染1.对试剂和吸附剂进行纯化处理。2.对玻璃仪器、注射器、色谱柱，在使用前进行适当的处理。3.控制洗涤剂、润滑剂、塑料、天然或合成的橡胶制品、防护手套、滤纸、棉毛织品等的使用。2.样品控制•取样要有代表性：有详细的接收信息：认真填写接样单，有详细的性状、包装等描述。使用唯一性标识：注意检测传递过程中的标识转移。取样量、均匀性等。3.分析方法的控制方法种类方法性能参数方法适用性检验与评价测定方法种类•中国国家标准或行业标准•公定的标准方法，如国际标准化组织（ISO)发布的方法•经权威的管理部门或机构认可的标准操作指南（sop)•已经被实验室验证的方法，必须符合技术要求并按实验室方法管理的相关程序审批。宏观•筛选方法：用于筛选目的方法，即测定一个或一组分析物在最低目标或高于最低目标浓度时是否存在的方法。•确证方法：用于确证目的方法，通过确证，可以避免假阳性结果。包括定性和定量确证。测定方法种类微观方法性能参数•校准曲线•空白值•检出限（LOD）•定量限（LOQ）•准确度•精密度校正曲线标准曲线工作曲线校准曲线•至少6个点(包括原点)•浓度范围尽可能覆盖一个数量级。可从0.25，0.5,1.0,1.5,2.0,4.0倍MRL/MRPL范围内选点。•线性回归方程y=bx+a相关系数r:一般不低于0.99，水质分析中要求不低于0.999.各种形式的校准曲线意味着什么?校准溶液的配制方法标准溶液直接用溶剂稀释—标准曲线。标准溶液用空白基质溶液稀释。绘制校准曲线的标准溶液的分析步骤与样品分析步骤完全相同—工作曲线。空白值•空白试验：在不加入试样的情况下，按测定试样相同的条件进行试验，所得到的测定值为空白值。包括试剂不纯、水不纯及容器中引入的杂质，可在试样测定结果中扣除此空白值。当空白值很大时，应通过提纯试剂和选用适当器皿来解决。空白试验纯水空白样品空白试剂空白溶剂空白不含样品的全套分析。不含被测分析物的样品材料。单纯溶剂分析。单纯实验用水分析。空白值的测定方法•每批做平行双样测定，分别在一段时间内（隔天）重复测定一批，共测定5-6批。空白值平行测定标准偏差计算•分析物能够被检测到的最小含量（定性）•通常被定义为某特定分析方法在给定的置信度（通常为95%）内可从样品中检出（定性检出）待测物质的最小浓度。检出限（LOD）检出限（LOD）估算•检出限受仪器的灵敏度和稳定性、全程序空白试验值及其波动性的影响。•LOD=(k*sb)/bk-置信系数（当置信水平为90%时，k一般取值3）sb-空白多次测量的标准偏差b-方法灵敏度（标准曲线斜率）检出限（LOD）估算•空白测定次数n最好≥20，k=4.6•当空白值测定结果接近于0.000时，可配制接近零浓度的标准溶液来代替纯水进行全程序空白值测定。定量限（LOQ）•分析物能够被定量的最小浓度。通常被定义为在特定的检测条件下，达到一定的准确度和精密度时，检测样品中分析物的最低浓度。•仪器分析S/N=10准确度一系列测定结果的平均值与公认的参考值之间的接近程度。准确度测定方法利用标准物质测定：重复分析标准物质，测定的含量（经回收率校正后）平均值与真值的偏差。通过加标回收测定：(1)在空白基质样品中加入不同水平（高、中、低三水平）已知量分析物，同时测定空白基质样品和加标样品，计算加标回收率。(2)在某一稳定样品中加入不同水平（样品含量的0.5～2倍）已知量分析物，同时测定样品和加标样品，计算加标回收率。食品残留分析中加标浓度具体要求对于禁用物质，在测定低限、两倍测定低限和十倍测定低限进行三水平试验；对于有最高残留限量（MRL）的，在测定低限、MRL、选一合适点进行三水平试验；对于未制定MRL的，在测定低限、常见限量指标、选一合适点进行三水平试验加标回收率计算加标回收分析要求•加标回收分析在一定程度上能反应测试结果的准确度，在实际应用时应注意加标物质的形态、加标量和样品基体等，每批相同基体样品应随机抽取10%-20%的样品进行加标回收分析。加标回收分析结果的评价•参考标准方法中相应的验证数据。•参考以下指导范围：精密度(变异系数)室内精密度室间精密度测量值在平均值附近的分散程度。室内精密度（重复性）重复性：在重复性条件下对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致性。定量表达用重复性标准差sr表示。重复性条件：在同一实验室，由同一人操作，使用相同的设备，用同样方法获得独立测量结果的条件。室间精密度（重现性）重现性：在改变了的测量条件下,同一被测量的测量结果之间的一致性。重现性条件：在不同实验室，由不同的人员操作，使用不同的设备，用同样方法获得测量结果的条件。精密度表示方式•相对偏差：•标准偏差：精密度表示方式•相对标准偏差精密度表示方式精密度检验方法•水质分析通常以空白溶液（实验用水）、标准溶液、生活饮用水、生活饮用水加标样等几种分析样品，求得批内、批间标准偏差和总标准偏差。食品残留分析中精密度检验方法•对于食品中的禁用物质，精密度实验应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限三水平进行；•对于有最高残留限量（MRL）的，精密度实验应在方法测定低限、MRL、选一合适点进行三水平试验；•对于未制定MRL的，精密度实验应在方法测定低限、常见限量指标、选一合适点三水平进行。•重复测定次数至少为6次。精密度测定结果评价•参考标准方法中相应的验证数据，各类偏差值应等于或小于分析方法规定的值。•参考以下指导范围：精密度测定结果应用•由空白平行试验批内标准偏差，估计分析方法的检出限。•比较各溶液的批内变异和批间变异，检验变异差异的显著性。•比较样品与标准溶液测定结果的标准差，判断样品中是否存在影响测定精度的干扰因素。•比较加标样品的回收率，判断样品中是否存在改变准确度，但可能不影响精密度的组份。样品检测过程中常用质控方法与要求•质量控制图法•平行双样法•加标回收分析•标准参考物（或质控样）对比分析•不同分析方法对比分析•不同检测项目的测定结果相关性分析质量控制图是根据分析结果的变化应服从正态分布规律而绘制。优点：•控制分析质量的一种简单有效的统计技术•可直观的反映分析结果的准确度或精密度的变化•及时发现异常现象•通过查找原因,采取相应的措施,使分析质量得到保证质量控制图质量控制图的制作将均匀、稳定的“控制标准样”（已知值的标准物质）与样品一起进行分析测试，将获得的数据绘图以检验测量系统是否在统计控制之下。绘制质量控制图的要求1.质控样品的选用要求：（1）质控样品组成尽量与检测样品相似；（2）质控样品浓度尽量与检测样品相近。2、质控样品的分析要求•（1）分析方法与检测样品的方法相同；•（2）同时进行分析；•（3）每次至少平行2份。•（4）积累至少20个数据，并在短期内陆续进行，不能一次完成。•（5）如各次分析间隔较长，可能因气温波动影响结果，必要时对测定值进行温度校正。d均数+2S-2S+3S-3S正常分布质量控制图的制作漂移趋势变化精度变化XXXXXX均数－标准差质控图-3S+3S+2S-2Sd均数质量控制图的制作操作者在测定质控样品时，如发现质控数据违背了质控规则，应填写失控报告单，对失控结果要进行回顾、检查、重复测定，或另取质控品分析，或检查仪器、试剂和操作等，以纠正失控。质量控制图失控后处理平行双样法•水质分析：1测定率要求:每批随机抽取10%-20%的样品进行平行双样测定，若样品量少，应增加平行双样测定比例。2允许差:参考下表数值。加标回收分析•每批相同基体样品应随机抽取10%-20%的样品进行加标回收分析。观察：加标回收率是否与标准方法中相应的数据相符。加标回收率是否符合以下指导范围：标准参考物（或质控样）对比分析•采用标准参考物（或质控样）与样品同步进行测试，将测试结果与标准样品参考值相比较，以评价其准确度和检查实验室内是否存在系统误差。不同分析方法对比分析