药物的含量测定方法与验证

药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证•药物的含量–含量测定–效价测定•药物含量测定方法–容量分析法–光谱分析法–色谱分析法药物的含量测定方法与验证•方法选择中的供试品因素–化学原料药的含量测定首选容量分析法–药物制剂的含量测定首选色谱分析法–药物制剂的定量检查首选光谱分析法•含量测定方法须准确、稳定、耐用第一节定量分析方法的分类与特点一、容量分析法（滴定法）•基本术语–滴定：将滴定剂通过滴管滴入待测溶液中的过程–滴定剂：浓度准确已知的试样溶液–指示剂：滴定分析中能发生颜色改变而指示终点的试剂–滴定终点：滴定分析中指示剂发生颜色改变的那一点（实际）–化学计量点：滴定剂与待测溶液按化学计量关系反应完全的那一点（理论）–滴定误差：滴定终点与化学计量点不一致产生的误差一、容量分析法（滴定法）•特点–方法简便易行–方法耐用性高–测定结果准确–方法专属性差•适用范围：较多用于化学原料药物的含量测定一、容量分析法（滴定法）•有关计算–滴定度：每1ml某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量。中国药典用mg表示。–滴定度的计算MabmmlmgT)/(一、容量分析法（滴定法）•有关计算–含量的计算直接滴定法所配制滴定液浓度与规定浓度不一致时：%100%WTV含量FTT规定摩尔浓度实际摩尔浓度F%100%100%WFTVWTV含量一、容量分析法（滴定法）•有关计算–含量的计算间接滴定法：生成物滴定法简接滴定法：剩余量滴定法%100)V%AWTFVFABBA（含量%100)VV%SB0BWTFAB（含量二、光谱分析法•紫外-可见分光光度法（200～400～760nm）–朗伯-比耳定律A为吸收度，l为液层厚度，c为溶液浓度，E为吸收系数。–E：单位液层厚度时的吸收度。有两种表示法摩尔吸收系数：在一定波长下，溶液浓度为1mol/L，厚度为1cm时的吸收度。用ε表示。百分吸收系数：在一定波长下，溶液浓度为1%（W/V），厚度为1cm时的吸收度。用表示。EclA%11cmE二、光谱分析法•紫外-可见分光光度法–特点与适用范围简便易行灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml。准确度较高，相对误差为2%～5%。专属性较差较少应用于原料药含量测定，多用于制剂的定量检查。二、光谱分析法•紫外-可见分光光度法–仪器校正与检定波长：常用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线校正，或用钬玻璃的尖锐吸收峰。吸光度的准确度：与规定的吸收系数比较。杂散光的检查对溶剂的要求：截止波长测定法：波长扫描与吸光度读数二、光谱分析法•紫外-可见分光光度法–含量测定方法对照品比较法吸收系数法计算分光光度法比色法rrxxCAAC100%WDCx含量D为稀释倍数。%100)()E%%11%11rcmxcmE（含量二、光谱分析法•荧光分析法–特点与适用范围灵敏度高，可达10-10g/ml～10-12g/ml.浓度太大会有“自熄灭”作用，故适用于低浓度的溶液。干扰因素多，须做空白试验。取样少，方法快速。衍生化试剂提高了适用范围二、光谱分析法•荧光分析法–干扰的排除溶剂：进一步纯化溶剂，空白试验溶液：适当的浓度，减少杂质，降低溶氧，调节pH玻璃量器：高洁净度温度：稳定的温度二、光谱分析法•荧光分析法–含量测定相对定量方法测定线性范围较窄rrbribiiCRRRRC式中：Ci为供试品溶液的浓度，Cr为对照品溶液的浓度，Ri为供试品溶液的读数，Rib为供试品溶液试剂空白的读数，Rr为对照品溶液的读数，Rrb为对照品溶液试剂空白的读数。三、色谱分析法•特点与适用范围–高灵敏度–高专属性–高效能与高速度–适用于药物制剂，尤其复方制剂的含量测定。•分类–依据分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、分子排阻色潽等–依据分离方式：纸色谱法，薄层色谱法，柱色谱法，气相色谱法，高效液相色谱法等三、色谱分析法•高效液相色谱法–药品标准对HPLC方法改变的要求–对仪器的一般要求•色谱柱：填料，孔径与粒径，柱直径，温度，pH等•检测器：通用型检测器与选择性检测器，对流动相的要求•流动相：反相系统与正相系统三、色谱分析法•高效液相色谱法–系统适用性试验•色谱柱的理论塔板数•色谱峰的分离度•色谱系统的重复性：RSD≤2.0%•色谱峰的拖尾因子22/1)/(54.5WtnR2121)(2WWttRRR105.02dWThd1为极大峰至峰前沿之间的距离。T应在0.95～1.05之间。三、色谱分析法•高效液相色谱法–测定法•外标法：一点法；两点法；工作曲线法•内标法三、色谱分析法•气相色谱法–检测器、固定液及特殊指定的色谱柱材料不能更换–对仪器的一般要求•载气•色谱柱填料，柱管材质，固定液•检测器种类，使用温度•进样方式–系统适用性试验–测定法：多采用内标法第二节样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法•在分析含金属或卤素、氮、硫、磷等元素的有机药物前，需进行适当的药品前处理。•分类–不经有机破坏的前处理方法–经有机破坏的前处理方法样品分析的前处理方法•不经有机破坏的前处理方法–直接测定法——含金属或C-M不牢固的有机金属药物•配位滴定法•氧化还原滴定法–经水解后测定法——卤素联脂肪碳链（溶于适当溶剂再水解）•碱水解后测定法•酸水解后测定法–经氧化还原后测定法——卤素联芳环牢固（一般用于测碘）样品分析的前处理方法•经有机破坏的前处理方法–湿法破坏•硫酸-硫酸盐法——凯氏定氮法•硝酸-高氯酸法•硝酸-硫酸法•其它湿法–干法破坏•高温炽灼法•氧瓶燃烧分解后测定法经有机破坏的前处理方法•硫酸-硫酸盐法——凯氏定氮法–将含氮药物与硫酸在凯氏定氮烧瓶中共热，药物分子中有机结构被氧化分解（亦称“消解”或“消化”）成二氧化碳和水，有机结合的氮则转变为无机氮，并与过量的硫酸结合为硫酸氢铵及硫酸铵，经氢氧化钠碱化后释放出氮气，并随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。•高温炽灼法–将含待测元素的有机药物经高温灼烧灰化，使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性无机盐，以供分析。根据分析对象与目的不同，常加无水碳酸钙、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。•氧瓶燃烧法第三节药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证•方法验证的目的•需验证的分析项目：鉴别试验；杂质定量或限度检查；含量测定等•验证内容：准确度；精密度；专属性；检测限/定量限；线性及范围；耐用性等一、准确度•含量测定方法的准确度–原料药的含量测定–制剂的含量测定•杂质定量测定方法的准确度–使用杂质对照品–缺少杂质对照品•数据要求二、精密度•标准偏差（SD）与相对标准偏差（RSD）•验证内容–重复性–中间精密度–重现性•数据要求三、专属性•鉴别反应•含量测定和杂质测定–阴性对照–阳性对照–纯度测试四、检测限/定量限•检测限常用方法–目视法：非仪器法–信噪比法：色谱法–标准偏差法：光谱法•定量限：信噪比要求不同•数据要求五、线性及范围•线性–回归方程–相关系数•范围–原料药和制剂含量测定–制剂含量均匀度检查–溶出度或释放度中的溶出量测定–特殊元素含量测定–杂质测定六、耐用性•耐用性•典型的变动因素–被测溶液–环境因素–液相色谱法中典型因素–气相色谱法中典型因素七、验证内容的选择•非定量分析方法•定量分析方法•微量定量分析方法七、验证内容的选择项目内容鉴别元素或杂质检查含量测定及溶出量测定定量限度准确度＋＋精密度＋＋重复性＋＋中间精密度＋①＋①专属性②＋＋＋＋检测限＋－③＋－定量限＋－线性＋＋范围＋＋耐用性＋＋＋＋①已有重现性验证，不需验证中间精密度②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充③视具体情况予以验证八、药品质量标准中分析方法验证示例•阿司匹林及其片剂的药品质量标准–鉴别•化学鉴别法•红外光谱法–检查•溶液的澄清度•游离水杨酸•溶出度–含量测定•酸碱滴定法•高效液相色谱法