模拟粪便中伤寒沙门菌的分离与鉴定

模拟粪便中伤寒沙门菌的分离与鉴定肠杆菌科（Enterobacteriaceae）细菌是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，常寄居于人及动物的肠道内，亦存在于土壤、水和腐物中[1]。多数是非致病菌或条件致病菌，少数为致病菌。其生物学性状相似，但生化反应，抗原构造有差异，故可据此将它们进行分类、鉴定。粪便中肠道菌的分离与鉴定对于临床病原学诊断具有重要意义。1.材料与方法1.1材料1.1.1模拟粪便、普通琼脂平板培养基、SS平板培养基、葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、尿素酶微量管、醋酸铅培养基微量管、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、半固体培养基、伤寒诊断血清、37℃恒温培养箱等。1.2方法1.2.1细菌分离培养取模拟粪便标本分区划种于SS平板培养基，置37℃培养箱培养18~24h后，观察结果，并对分离所获的菌落的细菌进一步鉴定。1.2.2细菌的生化反应挑取可疑菌落（无色菌落）的细菌，分别接种于葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、尿素酶微量发酵管、醋酸铅培养基微量管、蛋白胨水培养基、半固体培养基，置37℃培养箱培养18~24h后观察结果。1.2.3血清学鉴定取伤寒诊断血清和生理盐水滴于玻片上，再取可疑菌分别与伤寒诊断血清和生理盐水混匀，观察有无凝集现象。2.结果2.1细菌分离培养SS平板上分离出两种不同性状菌落，一种为圆形、凸起、湿润、边缘整齐、表面光滑的无色透明菌落，直径约1~2mm，另一种为圆形凸起、湿润、边缘整齐、表面光滑的红色菌落，直径约2~3mm。2.2细菌生化反应和血清学鉴定所分到的两种不同性状菌落的生化反应、动力学试验、血清学鉴定结果见表1表1可疑菌的生化反应、动力试验和血清学检查结果双糖铁葡萄糖乳糖尿素H2S靛基质动力血清学可疑菌—/+H2S++——+—++3.结果分析和讨论在肠杆菌科中，志贺菌、沙门菌等致病菌不发酵乳糖，其他大部分非致病肠道杆菌可分解乳糖，故在SS平板上无色半透明小菌落为可疑致病菌落[2]。取可疑菌落接种于克氏双糖铁培养基进行初步判断，实验结果符合表2伤寒沙门菌的培养结果[3]，故初步判定该可以菌落为伤寒沙门菌。取可疑菌落进行五种生化反应和动力学试验，进一步验证。可疑菌的五种生化反应及动力学试验均符合表3中伤寒沙门菌的培养结果[4]，故可初步鉴定为伤寒沙门菌，为确诊需结合血清学诊断结果。实验中采用直接玻片凝集试验，用实验室提供的伤寒沙门菌诊断血清检测伤寒沙门菌抗原，实验结果为阳性，故可以确诊为伤寒沙门菌。但在临床应用过程中，根据临床确诊标准，不能确诊患者患有伤寒，必须根据血清学试验（肥达试验），同时结合临床表现、病程、病史以及地区流行病学情况作出诊断。肥达氏反应伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价≥1∶80，“H”抗体凝集效价≥1∶160，恢复期效价增高4倍以上者，才能诊断为伤寒[5]。表2不同肠道细菌在克氏双糖铁培养基中培养结果上层（乳糖、H2S）下层（葡萄糖）动力大肠埃希菌⊕—⊕+伤寒沙门菌—+/-++痢疾志贺菌——+—表3可疑菌落接种于双糖和尿素培养基培养结果的初步鉴定项目大肠埃希菌伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌肖氏沙门菌痢疾志贺菌变形杆菌乳糖利用⊕-----葡萄糖利用⊕+⊕⊕+⊕动力++++-+H2S产生-+/-+/-++++-++尿素利用-----+伤寒沙门菌为人兽共患病的病原菌，可引起人类食物中毒或败血症。动物感染大多无症状或为自限性胃肠炎。其中，食物中毒最常见由沙门菌感染引起，尤其摄入大量被鼠伤寒沙门菌污染食物。主要临床症状为发热、恶寒、呕吐、腹痛、水样腹泻，偶有粘液或脓性腹泻。严重者可伴有迅速脱水，导致休克、肾衰竭而死亡[6]。伤寒沙门菌感染后，必须用抗感染药物进行对症治疗，对症治疗包括减慢肠道活动（服用洛哌丁胺）和纠正水电解质紊乱，口服补液盐（WHO标准：3.5克盐，2.5克碳酸氢钠，氯化钾1.5克，20克葡萄糖每升水）[7]。沙门杆菌主要存在于被污染或消毒不当的奶和奶制品、肉和肉类制品、冷藏蛋类和蛋粉。由于喂饲动物所用含有抗生素饲料的增多，且选药多选用光谱类抗菌药，造成了多重耐药，使耐药的沙门菌菌株增加，对人造成了更大的潜在性危害。所以要加强临床耐药菌株的监测,通过药敏试验选择敏感的抗菌药应用于临床,不断指导临床用药,是一个非常重要措施[8]。主要参考文献：[1]李凡，徐志凯.医学微生物学[M]第8版.北京：人民卫生出版社，2013，108[2]李凡，徐志凯.医学微生物学[M]第8版.北京：人民卫生出版社，2013，108-117[3]郭俊涛.微生物的鉴别与图谱[M].北京：人民卫生出版社，2007,725[4]杭州师范大学医学微生物学实验教程[M]杭州：医学院免疫学与病原生物学教研室，2011，57[5]汪复、翁心华.[GB16001—1995]伤寒、副伤寒诊断标准及处理原则[S].北京：中华人民共和国卫生部，1995[6]李凡，徐志凯.医学微生物学[M]第8版.北京：人民卫生出版社，2013，117-119[7]FritzH.Kayser,etcColorAtlasofMedicalMicrobiology.[M]NewYork:ThiemeStuttgart，2005，285[8]宋丽，宁宜宝，张广川，等.我国华东地区大肠杆菌、沙门氏菌分离和血清学鉴定[J].中国预防兽医学报，2004,26（2）:142-145