大肠杆菌生长曲线的测定

大肠杆菌生长曲线的测定蔡小鹏（南京工业大学生物与制药工程学院制药1104班）【摘要】通过比浊法对大肠杆菌生长曲线进行测定。因为细菌悬液的浓度与光密度成正比，所以可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌悬液的浓度。将培养12h的大肠杆菌进行发酵罐培养，在不同时间段取样，用分光光度计对大肠杆菌的生长曲线进行测定，测定结果显示：大肠杆菌生长曲线基本符合迟缓期、对数生长期、稳定生长期和衰亡期4个时期。【关键字】比浊法；发酵罐培养；生长曲线大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。除某些菌型能引起腹泻外，一般不致病，能合成维生素B和K，对人体有益。大肠杆菌是肠杆菌科的一员，经常作为细菌的模式生物广泛用于科学研究。1实验材料与方法1.1实验材料1.1.1菌种大肠杆菌1.1.2培养基1.1.2.1种子培养基蛋白胨1%，酵母粉0.5%，Nacl0.8%，硫酸卡那霉素800µL/L（灭菌后同冻存管一起加入摇瓶）在烧杯中加入1.5g/150mL蛋白胨、0.75g/150mL酵母粉、1.2g/mLNacl,再加入适量（少于150ml）的蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至150ml，保持自然PH。平均分装3瓶后，121℃灭菌20min[1]1.1.2.2发酵培养基在烧杯中加入6g/L蛋白胨、3g/L酵母粉、1.5g/L无水硫酸镁、0.013g/L无水氯化钙、5g/L硫酸铵、1.5g/L柠檬酸三钠、3g/L磷酸二氢钾、0.075g/L七水合硫酸亚铁，再加入适量的（少于1L）蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至1L。121℃灭菌20min。1.2器材超净工作台，高压灭菌锅，分光光度计，发酵罐及相应装置，摇床，移液枪，枪头，酒精灯，接种环，三角瓶，玻璃棒，烧杯1.3接种1.3.1种子培养基接种选取单菌落生长明显的平板，用接种环挑取适量的菌落转移到灭过菌的种子培养基三角瓶中。将接种好的种子培养基放到摇床中，200rpm/min转速，37℃，培养12-14h。1.3.2发酵罐接种将灭过菌的发酵液装入发酵罐中，安装好发酵罐。将三瓶种子液混合均匀，向发酵罐中加入60mL种子液，再加入1mL硫酸卡那霉素和30g糖（已灭菌）。1.4生长曲线的测定1.4.1原理在液体培养基中，微生物随着培养时间的增加而不断增加，逐渐使培养基混浊，这一变化，可以用分光光度计测定，并可根据不同的时间里测定的数值而做出该种微生物的生长曲线。1.4.2方法及步骤以未接菌的培养液作为空白，在分光光度计上调零点。用分光光度计，从0时开始，每隔2h测定三角瓶培养液的光密度值（OD），每次测定时以未接菌的培养液为空白对照调仪器零点、测定波长600nm。以时间为横坐标，以OD值为纵坐标，制作曲线，即为细菌在该培养条件下的生长曲线。2实验结果与分析2.1大肠杆菌生长曲线的测定按照1.4.2的方法测得大肠杆菌的生长曲线的结果见表1。以时间为横坐标，以OD值为纵坐标绘制的生长曲线图如图1所示。表1大肠杆菌的生长曲线的测定结果时间/h02468OD0.250.350.7752.4255.025时间/h1012141618OD5.1255.0053.3752.7852.122图1大肠杆菌生长曲线图2.2糖浓度变化表2糖浓度变化测定结果时间/h02468糖浓度g/L3027.526.8522.314.7时间/h1012141618糖浓度12.2910.6109.739.023结论从大肠杆菌的生长曲线可以看出培养4h后各菌株基本进入对数期，8h左右菌液浓度达到峰值，12h左右菌液浓度开始下降。各菌株都经历了迟缓期、对数生长期、稳定生长期和衰亡期4个时期，因而OD值可以反应细菌的生长曲线。【参考文献】[1]梁海曼.高压灭菌对培养基成分的影响.植物生理学通讯,1995(5):389-392.本人贡献率