GX-281中高压制备色谱上机培训

GilsonGX-281中压制备色谱用户手册本手册以GilsonGX-281系统与322泵系统配合为例306泵系统除泵设置不同，其余均可参考本手册一、硬件部分GX-281HPLC主要由GX-281主机,322泵系统，156检测器组成。GX-281主机平台上配备GX溶剂泵系统，Z臂及Z臂阀进样系统，三通收集阀，清洗井和6个20x管架•GX溶剂泵系统的主要作用是吸液与排液，实现包括进样及多种溶剂清洗进样针等功能。其中阀体为六位1/8”孔径，能够在五种不同溶剂中进行切换（一号位置默认为废液口）。体积范围：5µl至100mL；流速范围：5µL/min至25mL/min；耐压：50psi•Z臂及Z臂进样阀系统主要作用是在机械臂移动状态下进行取样及进样。Z臂安装高度为175mmZ臂进样阀是直接将样品吸入定量环，消除了传统进样阀由于样品残留而产生的交叉污染的可能性最大匹配5ml1/16”OD定量环。•三通收集阀主要作用收集馏分进样与馏分收集通道分开，保证收集的组分不会与进样流路产生交叉污染。200mL/min低位馏分收集阀死体积小，切换速度快（150ms）•清洗井主要作用是清洗进样针，分为内壁井与外壁井，洗针液来自GX溶剂泵孔大的是洗针内壁，孔小的洗针外壁。方法中选择GXTALL类型的•20x管架标准配置为：一个样品管架200号可放置96个13mm×100mm的样品试管高度最高可达150mm五个收集管架207号可放置375个15mm×150mm的收集试管322泵系统：H2泵最大流速30mL/min，H1泵最大流速15mL/min（不建议满负荷运作）。承受最大压力300bar流速在5ml/min以下时混合器腔体调节为0.4ml，大于5ml/min调节为2.2ml一般制备均调节在2.2ml。调节方式：泵体未启动状态下旋转混合器上方的手动调节钮，将刻度设定在2.2ml。注意：322泵开机不光要将机身后侧电源开启，同时要将图示开关按钮打开，泵才能正常工作泵系统主要故障及处理：1、流速不准：将单向阀取出放入有机溶剂中超声，如超声后仍无法解决则需要更换。2、泵头下方漏液：泵头密封圈磨损，需要更换3、泵工作时有噪音：一般为金属管路共振导致，手动调整后可解决。UV/VIS-156紫外双波长检测器波长范围：190-700nm注意：电源打开后手动按下氘灯开关按钮将氘灯打开。检测器开机亮红灯的可能故障及排除方法：1、检测池污染：使用2-5ml/min小流速100%有机溶剂冲管路4个小时以上。2、CCD镜面污染：将CCD模块取下，使用无尘纸轻轻擦拭镜面3、氘灯寿命超时：氘灯寿命2000小时，如超时会导致亮红灯，需要更换4、光栅偏移：必须送厂家维修二、软件部分桌面上双击TrilutionLC图标点击Logon按钮，通常为无密码。登陆后出现以下界面，在LiquidChromatography子目录下点ProjectLibrary进入Projectlibrary界面，选择AdminProject中的AdminApp按右键，选中CreateMethod创建方法或在上一个界面中悬着LiquidChromatographyMethod创建方法进入方法编辑界面后依次出现Configuration、Badlayout、Control和Analysis四个属性页。（一）首先进行Configuration选择硬件设备，点Scan按钮后软件会检测到GX-281PrepLiquidHander、322pump和156检测器，并依次选中并拖动至空白的工作区域中。GX-281PrepLiquidHander属性如下FracitonCollectionDelayVolume延迟体积默认设定为1.6ml322泵属性如下：A泵为水泵，B泵为有机泵，均选择H2泵头。混合腔体积为2200ulSetupPumpA中OrganicPump复选框不选中，Solvent选择WaterSetupPumpB中OrganicPump复选框为选中，Solvent选择甲醇或乙腈Detector检测器为双波长，DateChannel1和DataChannel2后的复选框均点上。（二）Bedlayout定义管架及试管布局设置进入BedLayout界面后出现GX-281管架俯视图。双击图示六个管架中第一个管架，选择样品管架。出现SelectRack(选择支架)，如Code200，点Ok。试管布局设置，在ZoneManagement中选中SampleZone。在左下方选择所需要的试管的编号方式，注意鼠标一定要点中红色的数字1（不然会切换编号模式，无法选中）然后按住鼠标左键拖选code200的所有试管区域，释放鼠标左键后，即出现样品管架排列的序号。同样方式，选择收集试管，收集管架选择code207。选择5个code207管架后，在ZoneManagement中选中FractionZone。同样在左下方选择所需要的试管的编号方式，注意收集试管编号顺序必须选择上图第二排第一个。然后按住鼠标左键拖选所有code207试管区域后，释放鼠标左键后，即出现收集管架排列的序号。设置InsideRinse（清洗进样针内壁清洗井）根据针内壁清洗井所安放的实际位置，双击图示位置，通常在左边第一个圈注意必须选择Drain/RinseStationGXTall，点ok确定。设置OutsideRinse（清洗进样针外壁清洗井）根据针外壁清洗井所安放的实际位置，双击图示位置，通常在左边第二个圈注意必须选择RinseStationGXTall，点ok确定。在ZoneManagement中分别选中InsideZone，OutSideZone。按住鼠标左键，选择洗针内壁和洗针外壁区域，定义InsideZone，OutSideZone。最终出现下图，BedLayout设置完成。（三）Control编写制备方法如图所示，进入Control界面图上，横坐标表示时间，纵坐标表示梯度。通常一个标准的制备方法分为11个步骤。1、设置流动相梯度GradientTaskWithVariables在Tasks-MobilePhase目录中点GradientTaskWithVariables图标设置梯度。流速、梯度比例均可以设为变量（前面加#），这样根据梯度要求设置多个流速。第一个梯度时间为0min2、设置收集条件Fractioncollectionsettings在Tasks-GX-281PerpliquidHandler目录中点Fractioncollectionsettings图标设置收集条件。Time：0.02min。收集条件有4种，一般选择按LEVEL收集Slope：按峰的前后斜率收集Level：按峰高收集Time：按时间收集，表示每管收多少时间Volume：按体积收集，表示每管收多少体积按图设置收集区域Slope：按前后斜率收集Level：按峰高收集Time：按时间收集Volume：按体积收集3、检测器设置Detector155/156Settings在Tasks-156Detector目录中点Detector155/156Settings设置检测器参数Time：0.04minSingleMode单波长模式DualMode双波长模式ScanMode全波长扫描模式；Peakwidth：峰宽值：4，其到滤波作用，如果峰小于4s就不显示；Sensitivity1检测通道1灵敏度：值0.01范围0.01-2；值越小越灵敏Sensitivity2检测通道2灵敏度：值0.01范围0.01-2；Wavelength1：检测通道1波长值：#Wave1；此处可设置成变量Wavelength2：检测通道2波长值#Wave2此处可设置成变量4、DetectorAutozerochannel检测器归零通道在Tasks-156Detector目录中点DetectorAutozerochannel检测器基线归零Time：0.06min5、设置进样GX-281ZInjectPrepInjectionwithCollection在Tasks-GX-281PerpliquidHandler目录中点GX-281ZInjectPrepInjectionwithCollection设置进样Time：4.00min，根据实际进样时间设置LiquidHander、Pump、Injector都选择GX-281PrepLiquidhandlerSolventValvePosition溶剂阀位置：2SampleZone样品区域：选择SampleZoneSampleWell样品试管：选择#SampleWellAirGapVolume空气段：0.02mL，防止样品与溶剂互溶PullVolume：针尖到进样阀的距离0.4mL，InjectionVolume进样体积：#InjectionVolume，AspirateFlowRate吸样流速：2mL/minAirGapFlowRate吸空气流速：1mL/minInjectionEquiltrationTime进样平衡时间：0.05SampleZOption样品Z方法参数：TubeBottomSampleZOffset底部偏移距离：0mm，依实际高度而定。6、设置任务同步SynTaskProperties在Tasks-Auxiliary目录中点SynTask设置同步Time：4.1min任务Task：GX-281ZInjectPrepInjectionwithCollection，选择syncwithSynchronize点中PauseRunTime同步代表等待，方法执行到同步指令时，就停止执行后续的命令第一个同步是等待进样命令发出一个同步信号后，可以继续执行后续命令。之后第二个同步是等待进样命令结束后再继续执行后续命令。1mL洗针内2mL洗针外7、设置开始数据收集StartDataCollection在Tasks-156Detector目录中点StartDataCollection开始采集数据Time：4.20min8、设置任务同步SynTaskProperties在Tasks-Auxiliary目录中点SynTask设置同步Time：4.3min任务Task：GX-281ZInjectPrepInjectionwithCollection，选择synctotheendoftask9、设置StartFractionCollection在Tasks-GX-281PerpliquidHandler目录中点StartFractionCollection设置开始馏分收集的时间Time:设置自己所要开始收集的时间，如4.8min。也可设置变量#FCStart10、设置StopFractionCollection在Tasks-GX-281PerpliquidHandler目录中点StopFractionCollection设置结束馏分收集的时间Time：可设置变量#FCStop11、设置停止数据收集StopDataCollection在Tasks-156Detector目录中点StopDataCollection开始采集数据Time：可以设置变量#StopTime完成以上11步骤，标准方法设置完毕，以后无非就是修改梯度时间或增加梯度节点，修改后记得另存为新方法。方法中的变量：点红圈内的可以查看变量清单，点击变量名称可以设置变量默认值。设置ErrorHandling，按图添加高压保护。主要看柱子的耐压参数，如柱子最大耐压为300psi，那我们设置200psi，并选择错误方法。当柱压达到200psi以上后系统会自动执行错误方法。设置Analysis中的Report参数点DataChannelSettings设置数据基线参数Offset参数设置5，表示两根基线之间偏移5%Style中可以设置基线的粗细和颜色点击GraphSettings按钮PeakInformation设置峰的信息，但建议都不要选择，不然峰上会有很多名称信息。GraphSettings设