AKTApurifier操作入门

20-3-16Page1of5AKTApurifier层析系统操作入门为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。一系统组件及系统功能介绍1系统组件(1)泵Pump系统泵：(systempump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。(2)阀Valve三通阀：(SV-903)两个。分别位于两个系统泵前，用于缓冲液输送管道(A1/A2,B1/B2)切换。七通阀：(INV-907)两个。1.上样阀(samplevalve)，用于上样环切换(load/inject)和系统泵清洗时废液管(waste)切换；2.流向切换阀(flowdirectionvalve)，用于层析柱流向切换(downflow/upflow)。八通阀：1.出口阀(outletvalve)，选择收集出口。(3)收集器Fraction分段收集。(4)其它组件梯度混合器(mixer)、柱前过滤器(onlinefilter)、紫外检测仪(UV-900)、pH电导仪(pH/C-900内含温度计)等。2系统功能系统功能由上述各组件相互配合，协同工作。(1)缓冲液pH及梯度配制(a)梯度制备(Gradient)A、B泵分别放置A、B液，由A、B泵的流速变化产生梯度。(b)自动缓冲液pH及梯度制备(BufferPrep)根据所用缓冲液配方，分别将A1、A2、B1、B2放入相应的溶液，由A泵及其三通阀调配缓冲pH，由B泵及其三通阀调配梯度。(2)上样上样阀上样：将样品经进样阀3号口注入储存在样品环(Sampleloop)内，再由阀门切换将样品带入层析柱；系统泵上样：由三通阀选择进样管道，由系统泵将样品泵入层析柱。20-3-16Page2of5(4)收集收集器收集：设置收集体积(Fracsize)，可自动按条件收集。出口阀收集：按需要选择不同出口管收集。二开机程序1开启电脑；2打开AKTApurifier电源；3启动UNICORN软件，输入用户名(Username)和密码(Password)，默认用户(default)密码为default，待AKTA自检结束后，在systemcontrol窗口中显示系统准备就绪（Instrumentsareready)。三UUNICORN软件简介Unicorn软件启动后共有四个窗口，其主要功能分别如下：Main:1.系统关闭(QuitProgram)和退出、登陆(Logon/off)；2.系统管理的设定，如用户名、密码、文件和使用权限等设定，系统日志等；3.文件管理，如文件拷贝、移动、删除及压缩拷贝到磁盘等；4.方法组编辑(MethodQueues)，将几个方法组合在一起，依次运行。MethodEditor:1.方法编辑；2.缓冲液配方设置（如配方修改或新增配方等）SystemControl:1.系统控制，可以手动控制(Manual)或运行方法(RunMethod)；2.系统设置，包括Alarms/Special/Monitors/Curves；3.运行监测，有四个窗口：Rundata/Curves/Flowscheme/Logbook。Evaluation:结果处理，如积分(intergrate)、移动(shift)、计算(Subtract/Add/Multiply/Divide)、平滑(Smooth)、截取(CutCurve)、绘制(CreatCurve)、打印(Print)等在每个窗口中均有专家建议(Adviser)和帮助信息(Help)。四系统控制(SystemContral)1手动操作(Manual)1.1手动操作命令简介(1)Pump泵Flow:设定系统泵流速Gradient:梯度设定BufferPrep_pH:使用缓冲液配制功能时，设定pH值SampleFlow:设定样品泵流速PumpWashpurfier:系统泵清洗(2)Flowpath流路20-3-16Page3of5PumpAInlet:A泵入口三通阀切换PumpBInlet:B泵入口三通阀切换InjectionValve:上样阀切换OutletValve:收集出口阀切换InjectionMark:插入记号(3)Alarm&Mon报警、检测WaveLength:选择监测波长（1-3个）AutoZeroUV:紫外吸收校零AveragingTime:计算紫外吸收平均值的间隔时间SetCondScale0%:输入0%B时的电导SetCondScale100%:输入100%B时的电导Alarm:设置压力、紫外、电导、pH等报警限Watch:监测参数设置，配合方法编辑中的watch功能(4)Frac收集：Peak_Frac_Parameters:计峰收集参数设定FracCollect_900:分布收集每管体积Frac_Stop_900:停止分别收集FeedTube:换管收集Peak_Fraction:计峰收集每管体积Peak_FracStop:停止计峰收集OutletFraction:出口阀每风分段收集每段体积等设置ResetFracNumber:将当前分布收集的管号计为第一管(5)Others其它Block:调用程序块（只在方法运行时可用）Next_breakpoint:跳到下一程序块（只在方法运行时可用）BufferPrepRecipe:选择缓冲液配方Set_Mark:插入提示语End_Timer:设定结束运行时间Recordon/off:手动运行时开始或结束数据记录1.2手动操作示例(1)梯度洗脱设定流速、梯度、柱位、收集方法后即可运行。各命令无先后次序要求。(2)自动配制缓冲pH及梯度必须最先设定缓冲液配方，然后设定其它参数如流速、pH、梯度等。(3)记录图谱运行“Recordon”命令，开始记录图谱，停止记录则运行“Recordoff”命令。1.3运行监测（Monitoringarun)在系统运行过程中，系统控制窗口同步显示系统检测的数据及各部件当前状态，共有四个窗口，显示不同内容，可同时打开：Rundata:运行参数20-3-16Page4of5Curves:数据曲线Flowscheme:系统流路图Logbook:运行记录2方法运行(RunMethod)启动方式方法一：从主菜单(main)窗口方法(method)栏中，双击所选方法。方法二：从系统(systemcontrol)窗口中，依次点击File、Run，选择运行方法。方法三：从系统(systemcontrol)窗口中，点击运行(Run)键，选择运行方法。五方法编辑1按照模板编辑新方法(1)点击方法编辑窗口中FileNew,或点击工具栏中”NewMethod”按钮，打开新方法编辑窗口；(2)(2)在“Forsystem”栏中选择运行方法的系统，选择“NoTemplate”则可自行编辑方法；(3)在“Technique”栏中选择层析技术，可选内容有：AnionExchange:阴离子交换CationExchange:阳离子交换RPC:反相层析HIC:疏水层析SizeExclusion:分子排阻（凝胶层析）Affinity:亲和层析Any:通用模板(4)在“Template”栏中选择模板类别，以离子交换及凝胶过滤为例，有如下选择IEXTemplates（离子交换模板）:CIP（在位清洗）ManualInjectionFPBufferPrepManualInjectionFPSegmentedManualInjectionVBufferPrepManualInjectionVSegmentedGFTemplates（凝胶过滤模板）:ManualInjectionFPIsocraticManualInjectionVIsocratic模板解释：ManualInjection:样品由手工（用注射器等）储存在样品环中，再由进样阀将样品注入层析柱F:用收集器（Fraction-900）分布收集P:使用计峰收集(PeakFraction)功能V:用出口阀(OutletValve)分段收集BufferPrep:使用自动缓冲液配置Segmented:不用自动缓冲液配置，可使用梯度Isocratic:单一流动相20-3-16Page5of5(5)在“Forcolumn”栏中，选择所用层析柱型号，若在列单中没有，则选择“Any”(6)点击“OK”键(7)若各参数符合要求，则选择“FileSave”，即可完成新方法编辑。2方法编辑若按模板编辑的方法不能满足要求，或对已使用过的方法进行调整，可在“MethodEdit”窗口中对方法进行编辑。编辑可分两类：1运行参数编辑；2程序编辑。(1)运行参数编辑（Runsetup）在菜单中选择“ViewRunsetup”，则进入运行参数编辑窗口，各编辑窗口的内容为：Variables:控制程序可变参数编辑Scouting:筛选条件设定Question:开始运行的提问内容设定Notes:输入实验记录或提示Gradient:显示梯度曲线BufferPrep:开启或关闭自动缓冲液配置功能及选择缓冲液配方Column:显示层析柱参数ReferenceCurves:输入对照曲线EvaluationProcedures:数据处理步骤Methodinformation:方法信息，含运行体积、时间等Resultname:结果保存文件名格式、路径设定Startprotocol:开始运行方案选择(2)程序编辑（Textinstruction）在菜单中选择“ViewTextinstruction”则进入程序编辑窗口。方法控制程序由数个程序块(Block)组成，程序块则由操作命令(instruction)及可变参数(Var.)组成。所以，根据需要，可分别增加或删除可变参数、操作命令、程序块等。六数据处理(Evaluation)1数据浏览Evaluation窗口中可查看层析结果(Chromatogram_Layout)和程序档案(Documentation)等。2数据加工最常用有曲线的积分、移动、计算（加减乘除）等：2.1积分(integrate)(1)选择IntegratePeakintegrate或点击Peakintegrate按钮，打开积分窗口；(2)在积分窗口中选择曲线、基线和积分表后，点OK键即可；(3)如果想优化积分结果，则可在积分窗口中选择基线设定、积分范围和参数。2.2移动(Shift)多条曲线重叠比较时，可用移动功能，使每条曲线错开适当距离，便于分析。20-3-16Page6of5移动可以左右移动，也可上下移动。2.3相除计算(Divide)将两条UV曲线相除，可判定吸收峰的纯度：如果一个峰的组分是单一的，则整个峰的相除结果应是恒定值。根据峰的相除值，还可判定峰的成分，因为不同物质的两个波长相除值应是不同的。(1)选择OperationDivide，打开Divide(相除)窗口；(2)选择两条相除的曲线，点OK键，即可；(3)若需优化计算结果，可设定极限范围(Threshold)，也可在计算前用相减(Subtract)功能，消除基线漂移的影响，还可用平滑(Smooth)功能，减小计算结果的波动。2.4输出报告(ReportandPrint)(1)打印当前窗口显示的内容，选择FilePrint,出现打印窗口，选择打印格式(Printformat)，点OK键，即可。(2)按报告形式打印，选择FileReport，再选择报告格式(Format)，点OK键，即可。七系统管理(1)用户设置在主窗口中，可设置用户、密码、路径及使用权限等。(2)系统设置在系统控制窗口中，可设置系统报警、检测、曲线记录等参数。(3)缓冲体系设定在方法编辑窗口中，可更改缓冲液配方参数或增加新的缓冲液配方。(4)报告格式在数据处理窗口中，可编辑数据浏览格式、打印报告格式等。