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自考本科植物组织培养（园林植物快繁）复习资料一、基本概念2.植物组织培养的理论依据其理论依据是植物细胞具有全能性。3.细胞全能性是指植物体任何一个细胞都携带着一套发育成完整植株的全部遗传信息，在一定条件下可以产生出完整植株。4.植物胚胎培养的主要几个内容:胚培养、胚珠培养、胚乳培养、试管受精5.植物器官培养的主要内容:离体根培养、离体茎培养、离体叶培养6.培养基的主要成分及作用。1）水，（4方面作用）：使细胞质呈胶体状态，活化状态；是细胞中各种生理、生化反应的介质；维持细胞一定的渗透压与膨压；为植物机体提供氢、氧元素。2）无机营养物：是植物细胞中构成核酸、蛋白质、酶系统、叶绿体以及生物膜所必不可少的元素。3）碳源：构成细胞碳骨架；为细胞的呼吸代谢提供底物和能源。4）维生素类：与植物体内各种酶的形成有关。5）氨基酸及有机附加物：是培养基中重要的有机氮源。6）植物生长调节物质：对外植体愈伤组织的诱导和器官分化起着重要和明显的调节作用，其中以生长素类和细胞分裂素类最为常用。7）琼脂，使培养基在常温下凝固。8）活性炭：主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响。9）硝酸：AgNO3中的Ag+通过结合于细胞膜上的乙烯受体蛋白，从而可起到抑制乙烯活性的作用。10）抗生素：防止由外植体内生菌造成的污染。7.植物生长素种类及活性的强弱顺序。种类：2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、NAA(萘乙酸)、IAA(吲哚乙酸)、IBA(吲哚丁酸)。顺序：2，4-DNAAIBAIAA。8.植物分裂素种类及活性的强弱顺序。种类：激动素(KT)、6-苄基腺嘌吟(6-BA)、玉米素(ZT)、2-异戊烯腺嘌呤(2-iP)、吡效隆(4PU，CPPU)和噻重氮苯基脲(TDZ)。顺序：TDZ4PUZT2-iP6-BAKT10.植物脱毒的方法及原理。方法：1.茎尖培养脱毒法2.热处理脱毒法3.微体嫁接离体培养脱毒法4.珠心组织脱毒法。原理：1）茎尖培养脱除病毒的依据：病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点，病毒浓度越稀，因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。2）病毒是DNA大分子，病毒进入植物细胞后，随植物细胞的DNA一起复制。热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去侵染的能力。热处理是一种物理效应，与冷处理一样，它可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。3）热处理脱毒法：微体嫁接离体培养脱毒法：把极小(0.2mm)茎尖，作为接穗嫁接到实生苗砧木上(种子实生苗不带毒)。然后连同砧木一起在培养基上培养。故可用很小的茎尖来培养，消除病毒的几率大，获得无病毒苗的可能性大。4）珠心组织脱毒法：病毒是通过维管组织传播的，而珠心组织与维管组织没有直接联系，故可以通过珠心组织培养获得无病毒植株。11.原生质培养方法及流程。方法：(1)固体培养法(2)浅层液体培养法(3)双层培养法流程：1、原生质体分离2、原生质体纯化3、原生质体培养4、原生质体胞壁再生5、细胞团形成和器官发生12.体细胞杂交及在细胞融合中的应用。两种异源(种、属间)原生质体，在诱导剂诱发下相互接触，从而发生膜融合，胞质融合和核融合并形成杂种细胞，进一步发育成杂种植物体，称为细胞杂交，或细胞融合。如取材为体细胞则称体细胞杂交。13.培养基的PH值起哪些作用，过高或过低有什么后果？在灭菌之前培养基的pH值一般都是调节到5．0～6．0之间。一般来说，当pH值高于6时，培养基将会变硬，营养物质就难于扩散到培养的组织中去；低于5时，琼脂不能很好地凝固。14.脱分化：离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织过程。二、名词1、外植体：在植物组织培养过程中用于第一次接种的各种植物材料。2、热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。3、平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养皿底上的培养方法。4、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。6、脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。7、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。8、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。11,组培快速繁殖(微繁殖):用组织培养的方法,使植物的部分器官,组织迅速扩大培养,并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法.13,原生质体融合(体细胞杂交):就是使分离下来的不同亲本的原生质体，在离体条件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合,像性细胞受精作用那样互相融合成一体的现象.14,脱毒苗:是指不含该种植物的主要危害病毒,即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木.15,愈伤组织培养:是指将母体植株上的外植体,接种到无菌的培养基上,进行愈伤组织诱导,生长和发育的一门技术.16.培养基：指由大量元素、微量元素、糖、氨基酸、维生素、植物激素与水所配制成的基质，主要用来进行组织培养。19.愈伤组织（callus）：植物受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处不断增殖产生的一团不定形的薄壁组织。20.植物激素：是一类由植物体自身合成的有机化合物。它们能从生成处运输到其它部位，在极低的浓度下，即能产生显著的生理效应，可以对植物的生长、发育产生很大影响。21.植物生长调节剂：指由人工合成的、能够调控植物生长发育的化学物质。常见的植物生长调节剂有矮壮素、B9、萘乙酸、青鲜素、乙烯利等22.植物生长物质：指在较低浓度的情况下能对植物产生显著生理作用的化学物质，主要包括内源的植物激素和人造的植物生长调节剂。23.细胞分裂素：亦称细胞激动素，缩写为CTK，为一类植物激素，是腺嘌呤的衍生物。细胞分裂素通常在植物的根尖合成，其主要的生理作用为促进细胞分裂、抑制器官衰老、诱导芽的分化、延缓叶片衰老等。常见的细胞分裂素有玉米素。六苄基嘌呤（6-BA）是一种常用的人工合成的细胞分裂素。24.试管苗（test-tubeplantlet）：指在无菌条件下在人工配置的培养基上进行培养所获得的再生植株。25.炼苗：通过人为改善植物的抗性，使其提高对不利环境的适应性的过程。初代培养：指在组织培养过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段。初代培养一般比较困难。26.继代培养：在组织培养过程中，当外植体被接种一段时间后，将已经形成愈伤组织或已经分化根、茎、叶、花等的培养物重新切割，转接到其它培养基上以进一步扩大培养的过程称为继代培养。27.胚状体：是指在组织培养中起源于一个非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成的具有双极性的胚状结构。28.茎尖分生组织：指茎的最幼龄叶原基上方的一部分，最大直径约100μm，最大长度为250μm。30.再分化：指在植物组织培养中，对处于脱分化状态的愈伤组织进行培养，诱导其形成新的植物体的过程。31.生长素：是一类促进植物细胞纵向伸长的植物激素，在茎内运输靠筛管极性运输，在胚芽鞘尖端因是薄壁细胞可进行横向运输，并且易受重力影响。三、常识题1、植物组织培养的理论基础是植物细胞全能性。2、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、天平显微镜、蒸馏水发生器等。3、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源，而且还能维持培养基渗透压4、培养基灭菌一般在108kPa的压力下，锅内温度达121℃，维持20-30min。5、在离体叶培养中，6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈伤组织的形成6、在离体叶组织脱分化和再分化培养中，茎和芽的分化主要有4个途径：直接产生不定芽、由愈伤组织产生不定芽、胚状体形成、形成小球状圆球茎。7、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。8、花药培养前的预处理:低温冷藏是最常用的方法。9、植物组织培养的发展分为三个阶段：探索阶段、奠基阶段、快速发展和应用阶段。10、培养基最常用的碳源是蔗糖，使用浓度在1%-5%常用3%。11.、培养基的种类按其态相不同分为固体培养基与液体培养基，其灭菌方法一般采用湿热灭菌方法。13、一般情况下，生长素/细胞分裂素的比值高，有利于根的形成和愈伤组织的形成；比值低，有利于芽的形成。14、选择外植体时应选择①优良的种质、②健壮的植株、③最适的发育时期和④适宜的大小。15、花药和发粉培养的共同特点是利用花粉(小孢子)染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。16、原生质体的分离方法有机械分离法和酶法分离法。18、培养基的主要成分包括①无机营养成分（大量元素、微量元素和铁盐）、②有机营养成分（包括维生素、氨基酸等）、③植物生长调节物质、④碳水化合物、⑤其它物质。3、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物，一般用量为6-10g／L之间。21、愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式。22、无病毒苗的保方法：隔离保存和长期保存两种方法。四、问答题1.实践中，根据所培养的植物材料不同，组织培养可分为哪几种类型？2.在组织培养中，生长素被用于诱导细胞分裂和（）3.生长素与细胞分裂素的比值是根和芽形成的控制条件，决定着发育的方向，比值（）利于根的形成，比值（）利于愈伤组织的形成，比值（）则利于芽的形成。4.植物激素中属于生长素类的有哪些？5.植物激素中属于细胞分裂素类的有哪些？6.在固体培养时（）是最好的固化剂。7.区别脱分化和再分化8.植物细胞及组织培养的过程，就是细胞的脱分化和再分化的过程，其理论基础是（）。10.在植物组织培养中，器官发生的方式有哪些？13.体细胞胚胎发生的方式有哪些？18.悬浮培养的类型有（）和（）。21.检测培养细胞活力时，用FDA和伊凡蓝对细胞进行处理，在紫外光照射下，发出绿色荧光的为（）；同一视野在白光照射下，呈蓝色的为（）。22.花药培养的过程包括（）、（）、（）、接种、培养、植株再生、壮苗、驯化移栽及单倍体植株的染色体加倍等。23.在花药培养过程中，适宜的花粉发育时期为（）。24.可以生产单倍体植株的方法有哪些？26.（）可以生产三倍体植株。27.离体授粉与体外受精的区别28.原生质体分离的方法有（）和（）。29.酶解法得到原生质体常用的酶有（）、（）、（）。30.原生质体纯化的方法有（）、（）和（）。31.什么叫体细胞杂交？32.原生质体融合的方法有哪些？各种方法的原理是什么？原生质体培养方法有（）、（）、（）。33.简述热处理脱毒的原理。34.热处理脱毒可通过两种方法进行，其中（）对休眠芽效果好，（）对活跃生长的茎尖效果好。35.在茎尖培养中影响脱毒效果的因素有哪些？36.脱毒效果检测有哪些方法？38.离体无性繁殖的类型有（）、（）、（）、体细胞胚型和原球茎型。39.影响茎芽增殖的因素有哪些？40.（）、（）及（）是离体培养中的三大技术难题。41.离体保存包括（）、（）、（）三种方法。42.植物组织培养按培养对象分为（）、（）、（）、（）、（）等几种类型。43.一个已停止分裂的成熟细胞转变为（）状态，并形成（）的现象称为脱分化。44.植物组织培养按培养过程中是否需要光，可分为（）培养和（）培养。45.植物组织培养按培养的方式分为（）培养和（）培养。46.目前植物组织培养应用最广泛的方面是（）和（）。47.由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做（），另一种叫做（）。48.不同组织培养类型之间的相同点是（）。49.进行植物组织培养时，外植体可以是（）、（）、（）、（）。50.组织培养植株的再生途径有两条：一是（）发生，另一是（）发生。52.植物组织培养的理论基础是（）。53.细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的（）和（）的能力。54.植物组织培养的特点是：（）、