KCL染色切胶回收

KCL染色切胶回收1．蛋白粗提掖进行SDS-PAGE；2．预冷（预先放在4℃冰箱中）0.25MKCl染色，检测蛋白条带（这种染色方法灵敏度比考马斯亮蓝染色低很多）；3．用一干净刀片切下蛋白所在凝胶条带，将凝胶条在蒸馏水中浸泡，使KCl离开胶条，直至无色透明（5-10min，条带变为无色）；4．将无色透明的胶条从蒸馏水中取出，装入已准备好的1.5ml离心管中，用镊子夹碎（或用刀片切碎），然后在管里加入所需溶解蛋白的溶液，比如蒸馏水、生理盐水或PBS；5．将离心管放入4℃冰箱中过夜，第二天吸出管中的液体（吸之前振荡一下），至少50%的蛋白可以从凝胶中析出，再加入蒸馏水抽提两次，就可以将胶条中绝大部分蛋白提出；6．抽提蛋白冻干浓缩后，可用考马斯亮蓝染色法测蛋白浓度，可以用SDS-PAGE验证纯度，看是否有杂带；提取蛋白样品≥5mg，可供免疫一只兔子用。