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普通生物学实验指导供医学八年制使用华中科技大学生命与技术学院实验教学中心1目录实验一显微镜的结构及使用方法...................2实验二动物细胞形态结构的观察...................5实验三细胞器的光镜切片观察.....................7实验四动物细胞培养.............................9实验五ABO血型鉴定与交叉配血...................16实验六血涂片的制作与读片......................19实验七细胞有丝分裂标本的制备与形态观察........23实验八蝗虫精巢减数分裂压片标本的制备与观察....27实验九人外周血染色体制备......................30实验十正常人非显带染色体的核型分析............322实验一显微镜的结构及使用方法一、实验目的1.学习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。3.了解几种特殊光学显微镜的工作原理及其使用光学显微镜的使用(一)显微镜的结构及使用方法光学显微镜，简称光镜(microscope)，是生物医学研究及临床工作中常用的仪器，每个学生都必须熟悉它的结构和性能，掌握其使用方法。1．光学显微镜的主要构造显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分(图1-1)。(1)机械部分①镜座：亦称镜脚，是显微镜的基座，用以支持整个显微镜。②镜柱：是镜座向上直立的短柱，用以支持其他部分。③镜臂：是镜柱向上弯曲的部分，适于手握。有些显微镜镜柱与镜臂之间有倾斜关节。④镜筒：连在镜臂前方的镜筒部分，一般长度为16cm。有直筒和斜筒两种，前者镜筒上下可调节，后者镜筒是固定的⑤调节器：是装在镜臂上的大小两种螺旋，转动时可使镜台升降或使镜筒上下移动以调节焦距。粗调节器(粗螺旋)转动时可使镜台或镜筒在垂直方向以较快速度和较大距离进行上下升降，调节物镜与标本的距离。通常在低倍镜下，先用粗调节器找到物像。细调节器(细螺旋)形状较小，通常在粗调节器的下方或外侧，转动时可使镜台或镜3筒缓慢地上下移动，以精细调节焦距，得到清晰的物像。⑥旋转器(镜头转换器)：装在镜筒的下端，呈盘状，下面有3～4个物镜孔供装置不同放⑦载物台(镜台)：用以放玻片样本，中间有一通光圆孔，称为镜台孔，由此孔可透入集光器传入的光线。⑧标本移动器：装于载物台上，用于前后左右移动玻片标本。移动器上有标尺，可以测定标本大小。(2)照明部分．①反光镜(mirror)：是一个一面平一面凹的双面镜，装在镜柱基部的前方，可向任意方向转动，其作用是改变光源射出的光线方向，送至聚光镜中心，再经镜台孔照明标本。反光镜的凹面聚光作用较强，通常在光线较弱时使用；在光线强而均匀时，宜用平面镜。有些显微镜采用电光源代替反光镜，使用时接上电源，在打开电源前，光照亮度旋至最小位置，然后打开电源，旋转亮度旋扭调节光照强度至适宜为止。关闭电源前，应先将光照亮度旋至最小位置。②聚光器(又名集光器，condenser)：位于载物台下方的聚光器架上，由聚光镜和虹彩光阑组成。聚光镜由一片或数片透镜组成，其作用相当于一凸透镜，起会聚光线的作用，一般可通过装在镜柱旁的聚光器调节螺旋的转动而上下移动，上升时视野中光亮度增加，下降时光亮度变弱、虹彩光阑(又名光圈，diaphragm)在聚光镜下方，由十几张活动的金属薄片组成。其外侧伸出一柄，推动此柄可随意调节开孔的大小，以调节光量。(3)光学部分①目镜(ocular)：位于镜筒上方，常用的有5×，6×，8×，10×，12×，15×，数字越大，放大倍率越高，可根据需要挑选使用。一般装在镜筒上的是10×目镜。②物镜(objective)：装在镜筒下端的旋转器上，一般有3～4个物镜。其中最短的刻有“4×”或“10×”符号的为低倍镜，较长的刻有“40×”符号的为高倍镜；最长的刻有“100×”符号的为油镜。在物镜上，还有镜口率(NA)的标志。镜口率反映该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨力越高。物镜的工作距离是指显微镜处于工作状态(物像调节清楚)时，物镜的下表面与盖玻片(盖玻片的厚度一般为0.17mm)上表面之问的距离。物镜的放大倍数愈大，它的工作距离愈小。显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如：物镜为10×，目镜为10×，其放大倍数就为l00。2．光学显微镜的使用方法(1)低倍镜的使用方法①检查：用右手握镜臂，从镜箱中将显微镜取出，左手托镜座，平稳地放到实验桌上。使用前应先检查一下显微镜各部分结构是否完整，如发现有缺损或性能不良，要立即报告教师，请求处理。②准备：将显微镜放于自己座位面前实验桌上稍偏左侧，镜台向前镜筒向后，旋转粗调节器使镜台远离物镜，旋转物镜转换器，使低倍镜对准镜台孔，这时可听到转换器边上固定扣碰上而发出的声音，或手上感到一种阻力，说明物镜的光轴已正对镜筒的中心。③对光：打开光圈，将聚光器上升。双眼同时张开，以左眼向目镜内观察(如为双筒显微镜，用双眼观察．，下同)，调节反光镜的方向，使光线射入镜筒中，直到求得明亮而均匀的视野为止；或打开电源，调节光照亮度旋钮，直到光亮度最适宜为止。④置片和调整焦距：将玻片标本置于镜台上，注意使有盖玻片的一面朝上，利用标本移动器4将玻片夹住，然后将玻片稍加调节，使标本对准镜台孔。从侧面注视低倍镜，转动粗调节器，使镜台慢慢上升，至物镜距标本半厘米处为止，再以左眼自目镜中观察，左手转动粗调节器使镜台徐徐下降，直到视野中出现标本的物像为止；再转动细调节器，使镜台微微上下，调节距离，使物像清晰。(2)高倍镜的使用方法①依上法先用低倍镜找到物像后，将欲观察的标本部分移到视野中央。②眼睛从侧面注视物镜，用手转动物镜转换器，使高倍物镜对准标本(如果操作正确，此时物镜与标本之间距离正好，不会碰到)。③眼睛向目镜内看，同时只需轻轻转动细调节器使镜台微微升降，即得到清晰的物像。(3)油镜的使用方法①同高倍镜的使用方法②在玻片标本上需要观察的部分加上少许香柏油，然后转动物镜转换器，使油镜对准标本。调节油镜至油镜的前端浸在香柏油内，从目镜观察，同时转动细调节器，至视野出现清楚物像为止。油镜的放大倍数大，观察时要用较强的光线。③观察以后，用粗调节器使镜台下降(镜筒上升)，用擦镜纸将镜头、玻片标本上的香柏油擦去，可用少许二甲苯，但不能用力擦，以免损坏镜头和标本。水分较多的临时制片，使用油镜观察时，应事先吸尽水分。3．使用光学显微镜的注意事项(1)取显微镜时必须右手握镜臂，左手托镜座，平贴胸前。切勿一手斜提，前后摇摆，以防碰撞和零件跌落。(2)擦拭显微镜的光学玻璃部分，必须用擦镜纸，切忌用其他硬质纸张或布等擦拭，以免造成镜面划痕。(3)切忌用水、酒精或其他药品浸润镜台或镜头。一旦沾染应立即进行处理，以免污染或腐蚀镜头。(4)放置玻片标本时，应将有盖玻片的一面向上，否则会压坏标本和物镜。(5)观察时应两眼同时张开，用左眼观察，用右眼注视绘图。左手调节粗、细调节器，右手调节标本移动器和绘图。实验完毕后，将显微镜擦拭干净。物镜不要与镜台相对，关闭光圈，适当下降聚光器，将反光镜直立，送回原处。5实验二动物细胞形态结构的观察一、实验目的观察几种细胞的形态结构二、实验用品显微镜三、实验内容细胞的基本形态观察（一）原理细胞的形态结构与功能相关事很多细胞的共同点，在分化程度较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成点。例如：具有收缩机能的肌细胞伸展为细长型；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一点树枝状突起；游离点血细胞为圆形/椭圆形或圆饼形。不论细胞的形态如何,细胞的结构一般分为三大部分:细胞膜、细胞质和细胞核。但也有例外，如哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。（二）观察方法与结果1.制备猪脊髓压片观察脊髓前角运动神经细胞。在显微镜下观察，染色较深的小细胞是神经胶质细胞。染色为蓝紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁。2.鸡血涂片点制备与观察取一滴鸡血液，靠近一端滴在载玻片上，将另一载玻片点一端呈45°角紧贴在血滴点前缘，均匀用力向前推，使血液在载玻片上形成均匀的薄层，晾干，加瑞氏染液2~3滴，使覆盖整个血膜，固定0.5~1min，滴加等量或稍多点新鲜蒸馏水，与染料混匀染色5~10min，用清水冲去染液，待自然干燥后或用吸水纸吸干，即可进行镜检。6显微镜下可见鸡血细胞为椭圆形，有核。白细胞数量少，为圆形。3.观察平滑肌分离装片低倍镜下观察平滑肌分离装片，可见染成紫红色呈纺锤形点肌细胞，细胞核为椭圆形，位于细胞的中央，着色很深，在细胞质中有淡红色的肌原纤维。低倍镜观察油镜下作业1.思考题为什么使用高倍镜或油镜必须从低倍镜到高倍镜或从低倍镜到油镜的顺序进行?如果高倍镜下找不到物象，应从哪些方面找原因，如何解决?2.绘图截取40×或者油镜100×下鸡红细胞、神经细胞、平滑肌细胞的图。7实验三细胞器的光镜切片观察一、实验目的观察细胞器中光学显微镜下的基本形态结构二、实验内容两种细胞器的光镜切片高尔基复合体的观察脊神经节以硝酸钴固定，再经硝酸银染液浸染制成永久制片。高尔基复合体能与硝酸银作用，并具有还原能力，使硝酸银呈现棕黑色沉淀颜色反应，因而显示高尔基复合体的形态和位置。方法：低倍镜观察：寻找圆形或椭圆形的被染成黄色或淡黄色的细胞；转换高倍镜：中央透亮区为核所在位置，核周围棕褐色扭曲呈线状、颗粒状结构即为高尔基复合体。线粒体的观察原理肝、肾组织细胞富含线粒体，以重铬酸钾固定，再经铁苏木精染色，制成永久制片。线粒体有双层膜结构，蛋白、磷脂含量很高，有大量羧基和磷酸基等阴离子基团，含阳离子的铁苏木精易与其结合，使线粒体显示兰色反应。方法低倍镜观察：可见许多被染成深兰色的细胞，选择颜色清晰，密集程度较低的区域；转换高倍镜：细胞核为1-2圆形的不着色的区域（有深兰色的核仁），核周围分布有许多深兰色颗粒或杆状小体，即线粒体。8附：生物学实验绘图方法与要求绘图时生物学实验报告点一种重要形式，其基本要求如下：1.准备好3H铅笔、橡皮、刀、尺子及绘图纸，将绘图纸放在观察物的右边，纸下不要垫书或纸张。2.绘图时，特别注意观察物的形状、各部分点位置、比例和毗邻关系。3.图点位置、大小要适宜，图占报告纸左上方2/3点面积，并考虑注字点位置。4.观察清楚后，选择典型的细胞或者组织，左眼看显微镜，右眼配合左眼，先用铅笔在纸上轻轻描出轮廓，使形态正确，然后再用清晰的线条绘出，线条粗细要均匀不要重复。5.用圆点表示明暗和立体感，点的点大小要均匀，不能涂阴影。6.图绘好后，要在图点右侧注明各部分结构名称，引线要直而平行，长短适度，各引线不能交叉，各线右端上下对齐，注字要用正楷，不能潦草，要自左向右写。7.每一个图下面要注明图的点名称、放大倍数。8.绘图纸上所有注字（包括姓名、实验日期、题目等）均用铅笔书写，不能用其他笔写。作业.绘图截取40×或者油镜100×下高尔基体和线粒体9实验四动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养。使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离了生物机体后的—些变化。细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的1.了解细胞原代培养、传代培养的基本操作方法；2.掌握细胞培养过程中的无菌操作技术；3.学习倒置显微镜的使用及培养细胞的观察。二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大