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生物安全柜的选择、使用及维护李仁清博士北京市疾病预防控制中心依据GB19489—2007《实验室生物安全通用要求》《实验室生物安全手册》（第三版，2004）ISO15190—2003《医学实验室—安全要求》YY0569-2005生物安全柜（2005.7.18）JG170-2005生物安全柜（2005.3.25）实验室生物安全指南（第三版，2004）生物危害一级防护：生物安全柜的选择、安装和使用（第二版，2000.9）微生物和生物医学实验室生物安全手册（第四版，1999.4）目的掌握生物安全柜的选择、放置、使用和维护熟悉生物安全柜的检测方法需要解决的六个问题为什么选择生物安全柜？选择什么样的生物安全柜？怎样放置生物安全柜？怎样使用生物安全柜？怎样维护生物安全柜？怎样检测生物安全柜？选择生物安全柜的理由工作对象具有生物危害原代培养物、菌毒种以及诊断性标本等-------具有潜在感染性的实验材料属于《人间传染的病原微生物名录》中第一、二、三和四类微生物人间传染的病原微生物名录类与级对应表------GB19489-2004《实验室生物安全通用要求》第一类第二类第三类第四类选择生物安全柜的理由容易产生气溶胶的工作行为对液体或半流体进行摇动、倾注或搅拌操作时，将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时，在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶，采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板中，对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡，对感染性液体进行离心，进行动物操作时。选择生物安全柜的理由生物安全柜能够阻止工作中所产生的气溶胶对外环境或者操作者本身产生危害，还可以减少样本之间由于气溶胶产生的交叉污染。生物安全柜基本工作原理定向气流：风幕HEPA滤器：一种一次性使用，框架内有多重褶迭的干性过滤材料的过滤器，对0.3微米气溶胶的过滤效能达到99.97%。保证排出气体和内循环气体的无菌状态。生物安全柜的选择要素：样品的生物危害第一、二、三和四类病原微生物保护样品I级生物安全柜不保护样品其他是否涉及到挥发性、放射性核素或化学品生物安全柜的选择（一）生物安全柜进风面速率（m/s）气流百分数排风系统重新循环部分排出部分I级0.360100硬管Ⅱ级A1型0.38～0.517030排到房间或套管连接处外排风型Ⅱ级A2型0.517030套管连接处Ⅱ级B1型0.513070硬管Ⅱ级B2型0.510100硬管III级不适用0100硬管生物安全柜的选择（二）生物安全柜保护类型保护对象I级第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境Ⅱ级A1型第二、三和四类病原微生物操作者，环境和样品外排风型Ⅱ级A2型第二、三和四类病原微生物；痕量挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品Ⅱ级B1型第二、三和四类病原微生物；少量挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品Ⅱ级B2型第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品III级第一、二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素/化学品操作者，环境和样品II级A2型生物安全柜室内空气污染的空气HEPA滤过的空气正压污染空气生物安全柜的选择（三）生物安全柜的宽度：工作需要；空间费用：安全柜本身；运输费用；附件费用（支架，紫外灯，椅子等）；排风和送风系统：风机和管道（II级B2）认证：NSF49美国EN12469欧洲YY0569－2005中国生物安全柜放置五个远离点（气流）门风扇空调开着的窗户人员活动频繁的区域摆放要求稳固的平台或支架两侧、后面和上端留30cmAirRegister设备首选位置候选位置工作台设备视频反面教材生物安全柜的使用要求•个人防护要求•柜内物品的摆放•紫外灯•明火•工作前准备•工作中操作及溢出处理•工作结束后处理生物安全柜的使用个人防护要求：①在使用生物安全柜时必须穿个人防护服，戴手套（手套应套在隔离衣的外面）②最好带口罩和帽子，根据需要带防护眼罩或者面罩。视频生物安全柜的使用生物安全柜内物品摆放原则①按照从洁净区到污染区的方向摆放②所有物品尽可能放在工作台后部③将废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品放在柜内某一侧④前进气格栅不能被纸、仪器设备或者其他物品阻挡生物安全柜的使用洁净区半污染区污染区生物安全柜的使用对紫外灯的三点要求：①每周进行清洁，除去可能影响杀菌效果的灰尘和污垢②每次生物安全柜的认证，要检查紫外线强度，以确保有适当的光发射量③房间中有人时一定要关闭紫外灯，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害生物安全柜的使用避免使用明火，原因有三：①明火可造成生物安全柜的气流紊乱，干扰气流模式②可损坏HEPA过滤器③处理挥发性物品和易燃物品时易造成危险生物安全柜的使用工作前需要准备的内容：首先紫外灯照射30分钟关紫外灯，打开安全柜的日光灯和风机，用消毒剂对生物安全柜的内表面进行消毒擦拭将实验中需要用到的物品集中用消毒剂擦拭后放在台面相应位置上（切记勿阻挡风口！）等待5min，净化工作区的空气污染物视频生物安全柜的使用工作时操作规范：①双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。②所有操作应在离前窗10cm以外的工作区进行。③废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中视频生物安全柜的使用操作时注意事项：③避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出。④尽量避免污染的物品进入洁净区。⑤在生物安全柜内进行操作时，不能进行文字工作。⑥尽量减少操作者身后的人员活动。视频生物安全柜的使用溢出处理：GB19489—2007《实验室生物安全通用要求》中生物安全柜内溢出时的处理方法滴状溢出或体积不足1mL的，可简单地用消毒剂擦洗。生物安全柜的使用大量溢出，则要做特殊的处理：1、使生物安全柜保持开启状态。2、在溢出物上覆盖浸有消毒剂的吸水材料，作用大约10分钟以发挥消毒作用。3、在安全柜内对污染的手套消毒后，脱下手套。如果衣服已经污染，也要先脱下消毒。穿戴干净的手套和衣服作如下进一步的清洁工作。生物安全柜的使用4、用消毒剂喷洒或擦拭安全柜内壁、工作表面以及前视窗的内侧。作用20min后，擦干消毒剂并将擦拭物置于生物危害袋中。5、如果溢出情况需要浸泡接液槽，则不得现场清理接液槽。应报告实验室主管后采用适当的气体消毒方式。生物安全柜的使用6、将所有清理用物品以及防护服进行高压消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮肤。7、立即通知实验室主管。如果溢出物流入安全柜内，可能需要对安全柜进行更为广泛的消毒处理。视频生物安全柜的使用工作结束后的要求：①将安全柜继续运行至少3min来完成“净化”过程。②将柜内物品移出前，应使用有效的消毒剂擦拭③每天实验结束后，对生物安全柜的内壁和台面进行擦拭。④等待5分钟后，关闭前窗，关灯，关风机，紫外灯照射30分钟。视频生物安全柜的维护保持生物安全柜表面清洁和无污染状态①用70%酒精或者合适的消毒剂擦拭内壁和工作台面；②如果使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后，需要用无菌水再次进行擦拭除去残余的消毒剂；③定期抬起工作台面对其下面的区域进行清洁；④消毒后，用玻璃清洁器对前窗玻璃和紫外灯进行清洁。生物安全柜的维护定期保养：①用湿布擦拭内壁和工作台面；②每年按需要更换紫外灯和日光灯；③每年至少认证一次——《医学实验室—安全要求》——YY0569-2005生物安全柜——《实验室生物安全手册》（第三版，2004）视频生物安全柜的维护生物安全柜的污染清除甲醛、过氧化氢熏蒸等方法应由有资质的专业人员来进行在以下情况下需要进行熏蒸：①在检查和维修之前②在更换HEPA滤器之前③在移动安全柜之前④安全柜被严重地污染⑤变换使用目的⑥长时间未用⑦需要熏蒸的其它时间生物安全柜的维护•甲醛熏蒸步骤之一----准备电炉两个；福尔马林；氨水；100mL烧杯4个；胶带；透明塑料薄膜、75%酒精等。使用75%酒精对生物安全柜内、外表面进行消毒清洁；将生物安全柜和放置在同一房间内的冰箱、CO2培养箱等仪器用胶带纸进行密封处理。视频生物安全柜的使用•甲醛熏蒸步骤之二----熏蒸将电炉放在生物安全柜中，连接电源用两个烧杯分取福尔马林20mL、水50mL，置电炉上关闭视窗，用胶带封严窗门开启电源，水和福尔马林同时被加热，待福尔马林挥发完毕时，关闭电源,保持密闭状态，过夜视频生物安全柜的使用•甲醛熏蒸步骤之三----中和取氨水36mL、水50mL，分放于2个烧杯中，置电炉上再次将生物安全柜门密封开启电源，待氨水挥发完后，关闭电源密闭过夜视频生物安全柜的熏蒸生物安全柜的熏蒸生物安全柜的检测•什么情况下需要检测？•应该由什么人来进行检测？•需要进行哪些内容的检测？生物安全柜的检测生物安全柜的检测的情况发生在：①最初的购买安装完毕②年检③移动④修理生物安全柜的检测生物安全柜的检测应由有资质的单位检测①在美国必须有美国NSF授权的单位；没有NSF授权，也得有以下经历的：有过检测经验；参加过技术课程或者厂商培训会；参加过象CETA水平的商业会议；检测设备拥有的校准证书②在我国有检测资质的单位：国家食品药品监督管理局医疗器械质量监督检验中心和军事医学科学院生物安全柜的检测安全柜防护效果的评估涉及到以下内容：①安全柜的完整性②人员、产品及交叉污染保护③HEPA过滤器的泄漏④向下气流的速度⑤正面气流的速度⑥负压／换气次数⑦气流的烟雾模式⑧警报和互锁系统⑨电气安全⑩光照度还包括紫外线强度、噪声水平、震动性、集液槽泄漏、柜体稳定性（包括柜体抗翻倒、柜体抗变形、工作台面抗变形、柜体抗向前倾倒）、温升、电机与风机等性能的测试。生物安全柜的检测①人员、产品和交叉污染保护测试②下降气流流速测试③流入气流流速测试④工作舒适度有关标准：噪音、照度和震动测试⑤高效过滤器完整性测试⑥柜体泄漏的测试⑦气流烟雾模式测试⑧排溢槽泄露⑨柜体稳定性⑩其他各类测试：电机和风机性能测试、工作区温升测试、压差测试。生物安全柜的检测出厂检验型式检验安装检验：安全柜安装完成、位置移动后常规维护检验：至少每年一次更换过滤器和内部部件维修后生物安全柜的检测安装检验和常规维护检验至少以下内容：①外观②高效过滤器完整性③下降气流流速④流入气流流速⑤气流模式⑥负压烟雾试验风速检测Thanks！