食品中亚硝酸盐的含量测定

食品中亚硝酸盐含量的测定一、实验目的1.掌握样品制备、提取的基本操作技能。2.进一步熟练掌握分光光度计的结构和使用方法。3.掌握比色法测定食品中亚硝酸盐的原理和方法。二、实验原理样品经沉淀分离蛋白质，除去脂肪后，在弱酸的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮化反应，生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色的的染料，其颜色的深浅与亚硝酸盐的含量成正比，可与标准比较定量。通过分光光度计比色测定，计算出样品中亚硝酸盐的含量。反应如下：2HCl+NaNO2+H2N--SO3H重氮化H3SO--Cl----+NaCl2H+2O2HCl.H2NH2CH2CHN-+---N-ClN--SO3H偶合-CHN2CH2NH2H.2HCl-N--H3SO--N+HCl盐酸萘乙二胺紫红色三、仪器与试剂1.仪器①小型绞肉机②分光光度计2.试剂①亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水，并定容至1000ml。②醋酸锌溶液：称取220g醋酸锌，加30ml冰醋酸，溶于水并定容至1000ml。③硼砂饱和溶液：称取5g硼砂溶于100ml热水中，冷却后备用。④0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100ml20%的盐酸中，避光保存。⑤0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100ml水中，避光保存。⑥亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24小时亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每ml相当于200ug亚硝酸钠。⑦亚硝酸钠标准使用溶液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00ml,置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每ml相当于10ug亚硝酸钠。四、实验步骤1.样品处理称取经搅拌混合均匀的样品1g于50mL烧杯中，加入硼砂饱和溶液2.5mL，以玻璃棒搅和，继以70℃左右的重蒸水约60mL，将其冲入100mL容量瓶，置沸水浴中加热15min，取出，加入1mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入1mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。冷却到室温，用重蒸水定容到刻度，摇匀，放置片刻，撇去上层脂肪，清液用滤纸过滤，滤液必须清澈，留做亚硝酸盐和硝酸盐的测定。2.测定吸取上述滤液40ml于50ml容量瓶中，同时吸取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0ug的亚硝酸钠）分别置于50ml容量瓶中，各加水至25ml处。在样品管及标准管中分别加入0.4%对氨基苯磺酸溶液4ml，混匀后静置3～5分钟，然后又在各管及标准管中分别加入0.2%盐酸萘乙二胺溶液2ml，加水至刻度，摇匀，静置15分钟后，用1cm的比色皿，以零管调节零点，于波长538nm处，测吸光度，绘制标准曲线并查出待测液的亚硝酸盐含量。五、结果计算X=式中：X—样品中亚硝酸盐的含量，g/kg；A—样品溶液中亚硝酸盐的含量，ug；m—样品的质量，g。—测定时吸取样品液的体积与样品定容体积之比。10001000250401000mA25040六、注意事项1.盐酸萘乙二胺有致癌的作用，使用时注意安全。2.显色后稳定性与室温有关，一般显色温度为15～30℃时，在20～30分钟内比色为好。