thermo液质联用仪使用手册

1TSQQuantum液质联用仪使用手册赛默飞世尔科技（上海）有限公司2007.52目录第一章简介1.1ESI或APCI哪个更适合分析样品？1.2如何将样品引入质谱仪1.3使用何种缓冲溶液1.4不同液相色谱流速下如何调整质谱工作参数第二章ESI/MS/MS模式下调谐校准质谱仪2.1设置直接进样法引入样品2.2调谐校准设置2.3使用ESI源形成稳定的离子束2.4ESI/MS模式下的检验操作2.5ESI/MS/MS正离子模式下自动调谐校准2.6ESI/MS/MS负离子模式下自动调谐校准2.7调谐校准后冲洗系统第三章ESI/MS/MS模式下优化目标化合物的质谱条件3.1ESI模式下过定量环引入样品3.2ESI/MS/MS模式下优化目标化合物的质谱条件3.3ESI/MS/MS模式下自动优化目标化合物的质谱条件第四章使用TuneMaster采集ESI/MS/MS数据4.1ESI模式下通过手动定量环引入样品4.2SRM扫描模式下采集ESI/MS/MS数据第五章Xcalibur使用5.1InstrumentSetup仪器方法的设置5.2SequenceSetup进样序列的设置5.3ProcessingSetup数据处理方法的设置（定量和定性）5.4LibrayBrowser谱库检索浏览器35.5Xreport第六章仪器维护6.1SurveyorAs自动进样器6.2SurveyorLCPump液相泵6.3SurveyorPDA二极管阵列检测器6.4TSQQuantum6.5机械泵附录1溶液配制........................................................................................................................................A-1A.1调谐和校准溶液.......................................................................................................................A-2使用预混合瓶制备聚酪氨酸–1,3,6调谐校准溶液A-2使用化学干粉制备聚酪氨酸–1,3,6调谐校准溶液......................................................A-3A.2利血平溶液...............................................................................................................................A-4利血平储备溶液.............................................................................................................A-4利血平试样溶液.............................................................................................................A-4附录2仪器方法建立指南........................................................................................................................B-1附录3微流操作.........................................................................................................................................C-14第一章简介TSQQuantum是一种高性能三级四极杆质谱仪，包括一台注射泵、一个六通阀、一个大气压电离(API)源和Xcalibur®数据系统。在一个典型的分析实验中，可以采取下面任意一种进样方法：•使用注射泵，不经过六通阀或者LC系统（直接进样）。注射泵可以直接连接至离子源，为样品溶液或调谐校准溶液提供一个稳定的进样状态。•使用注射泵和LC系统（直接注射至LC流动相），不经过六通阀。注射泵可以用于直接向LC系统出来的流动相中注射样品。•使用六通阀（切换到Load端）及LC系统(流动注射分析)。可用注射泵填充回路(定量环进样)，或者也可以手动填充回路(手动定量环进样)。•使用六通阀（切换到Waste端）和安装有分析柱的LC系统。可以对数据系统进行配置，使流动相流向废液，以避免由于带有不希望有的样品物质对质谱仪造成的不必要的沾污。•使用不带六通阀的LC系统。为减少LC系统的空体积，LC系统可以直接连接至离子源。使用LC/MS进行分析时，样品注射至LC柱，然后分离成不同的组分。不同组分从LC柱流出，进入质谱仪进行分析。使用直接注射或者流动注射分析时，在样品进入质谱仪前，样品组分没有经过色谱分离。随后从质谱仪得到的数据被Xcalibur系统存储并处理。1.1ESI或APCI哪个更适合分析用户的样品•电喷雾电离(ESI)•大气压化学电离(APCI)通常，极性化合物，如胺、肽和蛋白质昀好使用ESI进行分析；非极性化合物如类固醇昀好使用APCI进行分析。样品离子可能携带一个或者多个电荷，样品所携带电荷的数量取决于目标分析物的结构、流动相和电离模式。ESI/MSESI模式通常产生由单电荷离子组成的质谱图，但是还要取决于被分析物的结构和溶剂类型。当产生多电荷离子时，质谱谱图结果可进行数学转换从而表示样品的分子量。ESI模式将溶液内的离子转换成气态。许多此前并不适合质谱分析的样品(例如，热稳定性差的化合物或者高分子量的化合物)可以通过ESI模式进行分析。ESI可用于分析任意在溶液中已经预成离子的极性化合物，预形成离子可以包括加合离子。例如聚乙二醇可以在有醋酸铵存在的溶液中分析出来，因为，NH4+和聚合物中的氧原子可以形成加合离子的形式。由于多次放电，使用ESI，TSQQuantumDiscoveryMAX质谱仪可以分析分子量超过100,000u的化合物。ESI特别适用极性化合物的质谱分析，包括生物聚合物(例如，蛋白质，肽，糖蛋白类和核苷)、药物及其代谢物和工业聚合物。用户可以在正负两种离子扫描模式下使用ESI源。离子的扫描模式取决于溶液中预形成离子的极性：酸性分子在高pH值溶液中形成负离子，碱性分子在低pH值溶液中形成正离子。正电压的ESI探针用来产生正离子，负电压的ESI探针用来产生负离子。LC流动相流入质谱仪的流速可以从1µL/min(使用纳升喷雾离子源)到1000µL/min(使用标准ESI源)。请参考表1-1。(在ESI中，缓冲溶液类型和缓冲溶液强度对灵敏度都有非常显著的影响。因此，正确地选择缓冲溶液非常重要)。5在分析大分子量的蛋白质或肽时，由于多电荷被测离子的存在，所以所得到的质谱图通常由一系列峰组成。ESI过程受雾滴尺寸、表面电荷、液体表面张力、溶剂挥发性和离子溶解强度的影响。具有较大表面张力、低挥发能力、较强的离子溶解强度、低表面电荷数和高电导率的大雾滴会阻碍产生良好的电喷雾。混合有机-水溶剂体系，包括有机溶剂，如甲醇、乙腈和异丙醇比单独的水溶液更适合ESI源。挥发性酸碱可用于ESI，但是不推荐使用超过10mM的盐溶液。强无机酸碱会严重损害仪器。要获得稳定的电喷雾可参考如下建议：•溶剂体系避免使用不挥发性盐和缓冲剂。例如，避免使用含有钠盐和钾盐，避免使用磷酸盐。若确实需要可以铵盐代替。•使用有机-水溶剂体系。•使用挥发性酸碱。•如有可能，优化目标被测物溶剂体系的pH值。例如，被测物含有一价或二价铵离子，那么流动相应该为酸性(pH2到5)。pH为酸性有助于溶液中正离子的存在。APCI/MS就像ESI，APCI也是一种软电离技术，与电子电离相反。APCI可以给出稍具挥发性的、低极性化合物的分子量信息。APCI通常用于分析分子量不超过1000u的小分子。APCI是一种气相电离技术。因此，被分析物和溶剂蒸气的酸碱度在APCI分析过程中起着至关重要的作用。在APCI模式下，LC系统流入质谱仪的流动相的流速范围为0.2到2mL/min。请参考的表1-2。用户可以在正负两种模式下使用APCI源。在正离子模式下，带有碱基的分子会产生强的离子流。带有酸性基团的分子，如羧酸和酸式醇，在负离子模式下可产生强的离子流。虽然通常产生的负离子数量比正离子的数量要少一些，但是，负离子模式是更特殊的。这是因为负离子模式下产生的化学噪音通常低于正离子模式。因此，在负离子模式下的信噪比要好于正离子模式下的。1.2如何将样品引入质谱仪注射泵经常用于在ESI模式下自动调谐和调谐校准时引入调谐校准溶液。用户也可以在ESI模式下使用该方法以稳定的流速向系统中引入纯的被测物溶液。用户可以使用T形连接管将样品从注射泵中引入LC流动相﹝无论是否安装有色谱柱﹞，然后样品随流动相进入质谱仪。这种方法用于需要进样流速稳定和流动相流速很高的情况下。特别适用于在ESI或APCI模式下校准目标分析物。用户可以在稳定的流速下将纯被测物溶液引入ESI或APCI源。用户可以使用注射器将样品引入质谱六通转化阀上的定量环中。然后使用转换阀将样品引入流动相中，一起流入质谱仪。这种技术在ESI和APCI模式下将纯分析物集中快速引入质谱仪中。以注射器将样品引入转化阀上的定量环中，这种进样方法在纯品数量非常少量的情况下是非常有用的。用户也可使用自动进样器向LC流动相中引入样品。该方法也用于在ESI或APCI模式下将纯的被测物溶液快速集中地引入质谱仪中。昀后，用户可以使用液相自动进样器将混合样品引入到液相色谱柱中。在ESI或者APCI模式下，这种技术可以将被分析混合物在进入质谱仪前得以分离，被分离化合物按顺序进入质谱仪。1.3使用何种缓冲溶液推荐使用挥发性缓冲溶液，这样可能会得到昀好分析结果。许多挥发性缓冲溶液都可代替6不挥发性缓冲溶液。挥发性缓冲溶液包括以下几种：•醋酸•醋酸铵•甲酸铵•氢氧化铵•三乙胺(TEA)•三氟乙酸(TFA)有些LC应用中使用不挥发性缓冲溶液，如磷酸盐或硼酸盐缓冲溶液。然而，使用不挥发性缓冲溶液可能造成离子源结盐，进而导致灵敏度降低。对LC应用而言，使用不挥发性缓冲溶液时，要想得到昀佳结果，请遵从如下原则：•安装离子吹扫锥可选配件。z将缓冲溶液的浓度降至昀低。1.4不同液相色谱条流速下如何设置质谱工作参数ESI探头可以在流动相流速为1µL/min到1.0mL/min的情况下产生离子。这样的流速范围可以采用不同的分离技术：毛细管柱LC、微分离柱LC和分析柱LC。我们还提供一种可选配件——纳升喷雾离子源，适用于ESI模式下的次微分析。APCI探头可以在流动相流速低至50µL/min的情况下产生离子，但是通常流速范围为0.2到2.0mL/min。在这样的流速范围内可以采用如下分离技术：微分离柱LC、分析LC和半制备LC。当用户改变了进入质谱仪的流动相流速时，需要调节如下质谱仪参数：•对于ESI，需要调节离子传输管温度和鞘气、辅助气流速。•对于APCI，需要调节离子传输管和雾化器温度，还要调节鞘气和辅助气流速。通常，流入质谱仪的液体的速度越高，离子传输管(雾化器)的温度就越高，并且气体流速也就越高。表1-1给出了在ESI模式下，不同LC流动相流速情况下的离子传输管温度和气体流速设定的指导原则。表1-2给出了在APCI模式下，设定离子传输导管和雾化器的温度及气体流速的指导原则。表1-1LC/ESI/MS设置操作参数指导原则(喷雾电压3到4.5kV)LC流动相流速(µL/min)建议色谱柱内径(mm)毛细管温度(°C)鞘气(psi)辅助气(arb)≤10毛细管200到25