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试验菌株的质量控制杜平华菌种试验过程中，生物样本可能是最敏感的，因为它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结果一致性的重要保证。质量保证。溯源性适用范围质量控制鉴定純菌菌落形态具其生物学特征等 实验菌株的质量保证注意点!!!菌种的—2015版指导原则原则：药品微生物检验用试验菌应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。使用时应依据《中国药典》2015年版附录ⅩⅧG药品微生物实验规范指导原则的要求。菌种保藏机构菌种保藏机构工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）中国食品发酵工业科学研究所抗生素菌种保藏管理中心（CACC）中国医学科学院医用生物技术研究所四川抗生素研究所华北制药厂抗生素研究所兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）农业部兽医药品监察所林业微生物菌种保藏管理中心（CFCC）中国林业科学院专利微生物菌种保藏管理中心（ACCC）武汉大学国外的菌种保藏机构2015版药典使用菌种来源菌种编号2015版CMCC——中国医学菌种保藏中心CMCC（F）真菌CMCC（B）细菌协调案ATCC美国标准菌种收藏中心NCIMB英国食品工业与海洋菌种保藏中心NBRC日本技术评价研究所生物资源中心CIP法国巴斯德研究所菌种保藏中心菌种保藏的重要性菌种保藏是微生物检验工作中的一项常规技术,菌种的科学保藏和管理直接关系到检验结果的正确性.常用菌种的保藏常用菌种的保藏—2015指导原则菌种的保藏菌种的保藏菌种的保藏菌种的保藏注意点!!!工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。标准菌株实验室指南(WHO)溯源性实验室使用的菌株必须是国内外认可的菌种收藏中心。商业衍生菌株通过实验室试验表明具有同等效力的也可以使用。商业衍生的标准菌株只能作为工作菌株用。传代一次的标准菌株可用来作标准储备菌株。要进行纯度和生化检查。标准储备菌株解冻后，则不能再重新冷冻和储存。建议将标准储备菌株以低温或冷冻干燥方式分装保存。工作菌株是由标准储备菌株培养得到。工作菌液一般不用来进行传代培养。初始标准菌株只能传代培养5代，而且要有标准方法或实验室文件记录证实菌株在传代中未发生任何改变。菌种的保藏不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶段：菌种的保藏要点!!!微生物鉴定技术常规法（生化试验）营养物质代谢试验碳源和氮源利用试验各种酶类试验API试验条各种自动鉴定系统分子生物学16SrRNA分型核糖体分型脉冲场电泳色谱光谱傅里叶变换红外技术API试剂条——菌鉴定国际金标准全自动细菌鉴定仪生化鉴定新技术的引入微生物的鉴定菌种的保藏液氮超低温保藏法超低温广泛数十年复杂、需要专门设备，有效冷冻真空干燥保藏法干燥、缺氧、低温广泛5～10年以上复杂、需要专门设备和方法，有效干燥（沙土、牛奶）保藏法干燥、无营养产孢微生物1～10年较简便，需制备沙土管，有效液体石蜡保藏法低温、缺氧广泛1年以上简便琼脂斜面低温保藏法低温4℃广泛短时间简便液体冷冻保藏法液体培养基低温广泛半年以上简便一定比例甘油低温、缺氧广泛数十年以上简便瓷珠冷冻保藏法低温广泛1年以上简便菌种的传代和使用工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代(从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代）防止过度的传代造成菌种变异。1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。实验室应定期对工作菌株的特性和纯度进行确认。菌种的传代和使用新鲜菌液制备培养基适用性检查和计数方法适用性试验用的菌液基本要求新鲜菌液：微生物保持旺盛的生命活力。各实验室应根据自身操作习惯总结出一套切实可行、快速稳定的菌液制备标准程序。采用适宜的保存方法,不可重复从菌种包装瓶中移取菌种或重新冷冻菌种。传代代数（每接种一次即为一代）。培养物1～3环↓适宜液体培养基，培养18～24h，稀释后预试验（或比浊）↓按试验结果或预实验将菌液稀释到相应倍数↓平板计数(培养、点计菌落数）↓试验、阳性对照平板计数也可和试验同时进行菌悬液的制备和使用菌株培养基培养温度(℃)培养时间(h)枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌黑曲霉胰酪大豆胨琼脂或胰酪大豆胨肉汤。沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖肉汤30～3520～2520～2518～242～3天5～7天，或直到获得丰富的孢子菌悬液制备用培养基—2015修订内容修订前修订后0.9％氯化钠溶液pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。0.9％氯化钠溶液菌悬液制备用稀释液—2015修定内容菌液贮存—2015修定内容修订前修订后菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。稳定的黑曲孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。菌种的衰退与复壮菌种的管理菌种的管理菌种的管理文件化菌种的来源、名称、菌号、接收、传代、分离、复壮、使用和鉴定等均应做好详细记录。详细记录菌保存位置、环境(温度)、种传代或使用时间、代数、传代或保存形式、分离、复壮方式、鉴定情况等都应进行详细的记录。菌种的管理⒈菌种不得随意带出实验室，外单位索取、购买应有证明和登记，并包装严密。⒉菌种处理应严格按操作规程进行，灭菌处理应有详细记录。