IS015189认可实验室血涂片复审筛选标准的研究

龙源期刊网认可实验室血涂片复审筛选标准的研究作者：莫和国隋洪陈光辉陈渊博张瑞雄蔡锦梅徐宁来源：《中国医药导报》2011年第23期[摘要]目的：本研究是参与卫生部临检中心IS015189认可委对血涂片复审筛选标准的研究中的子课题；主要采用svsmexXE-2100五分类血细胞分析仪来评估通过国际血液学复审协作专家组推荐的“血细胞涂片复审41条国际规则”对大样本(3800份血标本)多项目、多参数检测的实验数据进行统计学分析，提出适合于我院检验科就诊患者使用的血涂片复审规则，为卫生部临检中心IS015189认可委制订适合我国人群的血涂片复审筛选标准通则提供科学数据。方法：随机检测我院检验科就诊患者血常规标本3800份，同时涂片做细胞形态观察和人工白细胞分类，按照国际血涂片复审规则及日本Sysmex公司提供的21条规则和涂片镜检阳性标准进行评价，通过对实验数据进行统计学分析，计算出真阳性、假阳性、真阴性、假阴性和涂片复审率，制订符合我科实际的最佳血涂片复审筛选标准。结果：根据“血细胞涂片复审41条国际规则”对检测结果进行统计学分析：真阳性率为13.73％(522/3800)，假阳性率为32.05％(1218/3800)，真阴性率为51.05％(1940/3800)，假阴性率为3.11％(120/3800)，涂片复审率为45.78％；按日本Sysmex公司提供的21条规则对检测结果进行统计学分析：真阳性率为11.37％(432/3800)，假阳性率为17.97％(683/3800)，真阴性率为66.58％(2530/3800)，假阴性率为4.08％(155/3800)，涂片复审率为29.34％；且验证试验结果显示，血液病细胞无漏检。结论：全国各医院检验科根据其实际情况制订本科合理适用的血涂片复审筛选标准规则非常重要，既可保证检测结果质量，又可提高工作效率，同时也是IS015189认可实验室之必检项目。[关键词]IS015189；血涂片复审；筛选标准；血细胞形态学；镜检[中图分类号]R446.11[文献标识码]C[文章编号]1673-7210(2011)08(b)-085-03在全国各医院检验科IS015189认可实验室现场评审中所开的“不符合项”或“观察项”中主要集中在有关细胞形态学检验相关方面的工作占有相当大的比例，血细胞分析仪的血涂片复检率过低，缺乏适合本实验室使用仪器的筛选标准等是其主要原因。近年来虽然各种类型的血细胞分析仪得以广泛应用，帮助检验人员快速完成大量血标本的检测，提高了工作效率，但迄今为止血细胞分析仪在形态学检查中仍只能作为一种过筛手段，当遇到可疑情况，尤其是在病理条件下，必须进行人工镜检复查，这已是不争的事实。如何能够让血细胞分析仪更好地为临床服务，一直是各国血液学专家共同关注的问题。2005年国际血液学复检专家组通过对13298份血标本进行详细分析后，推荐了41条自动血细胞分析和分类复检规则。但这只是通则，由于不同仪器或实验室的病源及筛选目的不同，其并无针对性和特异性。为此IS015189认可委要龙源期刊网求各参评实验室必须在参考“血细胞涂片复审41条国际规则”的前提下结合各自实验室仪器性能特点及病源，制订适合于本实验室的血涂片复检规则。1材料与方法1.1材料1.1.1标本来源3800份血标本均为来自我院检验科就诊做血常规的患者，其中，初诊标本3008份，复诊标本792份。所有标本于采血后30min～6h期间用XE-2100自动进样模式进行检测，包括全血细胞计数(CBC)、白细胞分类(DC)、有核红细胞(NRBC)、网织红细胞(PET)，并将检测报告备份存档。1.1.2仪器与试剂XE-2100全自动血细胞分析仪，原装配套试剂，校准品和质控品均由日本Sysmex公司提供。两台显微镜均为OlympusCX31型，用于血涂片显微镜检查。1.2方法1.2.1实验人员培训根据《全国临床检验操作规程》和《白细胞计数参考方法》中制订的血涂片检测操作程序(SOP)，对参加实验的人员进行培训，并研讨可能出现的问题和解决的措施。1.2.2仪器的校准、调试及报警(IP)信息的设置均由sys-mex公司工程师按照仪器标准要求进行校准、调试和设置。1.2.3检测方法每份标本在上机检测的同时制备2张血涂片，并编号用瑞氏染液进行染色，然后按照标准操作程序(血涂片检测SOP文件)进行血细胞形态学的镜检，每2人为1组。1.2.4初步复检规则的制订利用XE-2100血细胞分析仪的IP信息报警系统对WBC、RBC、PLT的数量异常和形态学异常的提示。并参照“国际血液学4l条复检规则”，由sySHICX公司工程师制订出的XE-2100血细胞分析仪自动血细胞计数和WBC分类初步复检规则共21条。见表1。龙源期刊网制订血涂片阳性判断标准①RBC明显大小不等，染色异常RBc30％；②巨大PLT15％；③见到PLT聚集；④存在Dohle小体细胞10％；⑤中毒颗粒中性粒细胞0.1；⑥空泡变性粒细胞0.1；⑦原始细胞≥0.01；⑧早幼，中幼粒细胞≥0.01；⑨晚幼粒细胞0.02；⑩杆状核粒细胞0.05；⑩异淋0.05；⑩嗜酸粒细胞0.05；⑩嗜碱粒细胞0.01；有核红细胞0.01；⑩浆细胞0.01。1.2.6对比双盲法(仪器分析和血涂片复审)两者检测结果，分别计算血涂片复审率及仪器分析的真阳性率(触及初检规则且镜检为阳性的比率)、真阴性率(不触及初检规则且镜检为阴性的比率)、假阳性率(触及初检规则但镜检为阴性的比率)、假阴性率(不触及初检规则但镜检为阳性的比率)；以及血涂片复检率(复检率=真阳性率+假阳性率)。表1初步复检规则织红)超出仪器检测线性；稀释标本后重新测定；并全部(初诊+复诊)推片镜检。龙源期刊网、RBC、HGB、PLT无结果；检查标本是否有凝块；重测标本；并全部(初+复)推片镜检。3.WBC30，0x109／L；全部(初+复)推片镜检。4.PLT1000x10(sup)9(/sup)/L；全部(初+复)推片镜检。5.MCV(平均红细胞体积)110n(成人)；全部(初+复)推片镜检。6.MCHC(平均红细胞血红蛋白浓度)380g/l或7.DC(白细胞分类)无结果或结果不全；全部(初+复)推片镜检及人工分类。8.Neut#(中性粒细胞绝对计数)20.0x10(sup)9(/sup)/I；全部(初+复)推片镜检。9.Lvmph#(淋巴细胞绝对计数)5.0x10(sup)9(/sup)/l；全部(初+复)推片镜检。10.Mono#(单核细胞绝对计数)1.5×10(sup)9(/sup)/L；全部(初+复)推片镜检。11.Fos#(嗜酸粒细胞绝对计数)2.0x10(sup)9(/sup)/L；全部(初+复)推片镜检。12.Baso#(嗜碱粒细胞绝对计数)0.Sxl0(sup)9(/sup)/l；全部(初+复)推片镜检。13.WBCIPMessage(白细胞异常散点图)；全部(初+复)推片镜检。14.WBClPMessage(未成熟粒细胞)；全部(初十复)推片镜检。15.WBClPMessage(核左移)；全部(初+复)推片镜检。16.WBCIPMessage(异形淋巴细胞或原始细胞)；全部(初+复)推片镜检。17.WBCIPMessage(原始细胞)；全部(初+复)推片镜检。18.WBClPMessage(有核红细胞)；全部(初+复)推片镜检。19.PLTlPMessage(除PLT聚集外的PLT和MPV(平均血小板体积)报警)；全部(初+复)推片镜检。20.CBC+DC(新生儿标本)；全部(初+复)推片镜检。21.CBC+DC(血液病标本)；全部(初+复)推片镜检一龙源期刊网份标本的仪器检测数据和显微镜人工镜检结果：①根据“血细胞涂片复审41条国际规则”的检测结果进行统计学分析，真阳性率为13.73％(522/3800)，假阳性率为32.05％(1218/3800)，真阴性率为51.05％(1940/3800)，假阴性率为3.11％(120/3800)，涂片复审率为45.78％；②按Sysmex公司提供的21条规则对检测结果进行统计学分析，真阳性率为11.37％(432/3800)，假阳性率为17.97％(683/3800)，真阴性率为66.58％(2530/3800)，假阴性率为4.08％(155/3800)，涂片复审率为2934％。2.2验证试验为了验证svsmex公司提供的21条复检规则的有效性，将这21条复检规则设置在xE-2100血细胞分析仪的Lab-msn程序中，选择300份(主要是血液病、感染性疾病、新生儿和肿瘤化疗患者)血标本在xE-2100血细胞分析仪上进行检测，并与涂片镜检结果对比分析。结果显示：真阳性率为53.33％(160/300)，假阳性率为30.67％(92/300)，真阴性率为12.33％(37/300)，假阴性率为3.67％(11/300)，血液病细胞及原幼细胞无阳性漏检现象发生。3讨论为了保证血液细胞形态学检查结果的准确，原则上每个标本都应镜检，但实际是不可能做到的，因此复检筛选标准的制订至关重要。这是解决当前“供需矛盾”最有效的办法，而准确的筛选取决于适合本实验室具体情况和要求的筛选标准的制订及严格、准确的实施。在IS015189认可现场评审开出的“不符合项”或“观察项”主要集中在有关细胞形态学检验相关方面的工作缺乏适合本实验室使用的仪器筛选标准和复片率过低等现象。血涂片复审虽然是血细胞分析后质量保证措施，但显微镜检查为定性或半定量分析方法，对于仪器法定量分析的项目是否适合以镜检“验证”，比如I)“RBC明显大小不等”验证“红细胞体积分布宽度(RDW)增大”、“低色素RBC0.3”验证“平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)减低”科学与否。另外，由于观察者的技术水平不同和涂片中细胞分布的差异，故要充分认识显微镜检查的局限性。总之。临床实验室制订血涂片复审筛选标准是一项科学性强、涉及面广、影响因素多的工作。应该循证规律，切勿草率从事。“假阴性”是关键参数。具有诊断意义的重要参数不能出现假阴性。其他参数假阴性率也应龙源期刊网份标本中，国际41条复检规则得到的假阳性率为32.05％(1218/3800)；而Sysmex公司提供的21条复检规则得到的假阳性率为17.97％(683/3800)；远低于国际41条复检规则，但两者的假阴性率分别为3.11％(120/3800)和4.08％(155/3800)，差异不大，均未超过5％的最大可接受的假阴性率标准。如果按照国际41条复检规则进行复检。涂片复审率为45.78％；而按照Sysmex公司提供的21条复检规则进行复检，涂片复审率为29.34％，复审率远低于国际41条复检规则，并且试验血液病细胞及原幼细胞无阳性漏检现象发生。从而在保证检验质量的前提下大大提高了工作效率。综合SysmexXE-2100五分类血细胞分析仪的性能特点和我科的病源常规工作情况，笔者认为Sysmex公司提供的21条复检规则作为“三甲”医院规模的检验科血涂片复审筛选标准较为实用。在实际工作中只需根据具体情况对个别条款加以修正、完善和改进即可。对于血液病患者(尤其是白血病)及临床医生提出阅片需求的血细胞分析标本必需镜检，无论仪器有无提示，是初诊还是复诊，都必需进行镜检，无须遵守复检规则；由于仪器初筛的异常与镜检阅片的异常不完全相符，也有必要进行镜下确认。龙源期刊网