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美丽的海医校园细胞病理学检验基础知识—海南医学院热带医学与检验医学院临床检验学教研室吴荣泉13036095326第八章细胞病理学基础检验（总论）◆脱落细胞学检验技术：标本采集与制片、固定、染色、镜捡。◆正常细胞形态：上皮细胞、非上皮细胞、其他成分◆损伤细胞形态：退变、再生、增生、化生、凋亡、炎性变核异质、核异质细胞◆肿瘤细胞形态：细胞核的改变是诊断癌细胞的主要依据。恶性肿瘤细胞形态改变特征：细胞核、细胞质、群体细胞各论部分◆女性生殖道脱落细胞学检验◆呼吸道脱落细胞学检验◆浆膜腔积液细胞学检验◆针吸穿刺细胞学检验脱落细胞学课程设计总论部分1、检验基本技术：标本采集、制片、固定、染色、镜捡。2、正常脱落细胞形态（鳞状，柱状，移行，间皮细胞形态学）3、非肿瘤性疾病细胞学改变（损伤性，炎症性，退变性变化）4、核异质细胞形态特征5、恶性肿瘤细胞的分类与形态特征各论部分1、女性生殖道非肿瘤细胞学与肿瘤细胞学的变化特征2、浆膜腔积液中肿瘤细胞的类型与形态学改变3、呼吸道，泌尿道，消化道肿瘤细胞学检查4、细针穿刺细胞学检查（乳腺穿刺、淋巴结穿刺）脱落细胞学概念（临床细胞学、细胞病理学、细胞诊断学）是人体各部位，组织器官脱落细胞或对病变器官及肿物通过采集，针吸的方法获得细胞，经染色后，在镜下观察这些细胞的形态，从而作出诊断的一门临床检验学科。脱落细胞学检查的局限性，比如，假阴性（20%-30%），假阳性性（5%-10%），因此肿瘤的诊断应配合影像学、肿瘤标志物等检查信息进行综合分析作出诊断恶性肿瘤的诊断：以病理组织学检查结果为金标准。什么是脱落细胞学？脱落细胞发展简史1847Pouchet介绍阴道涂片观察月经周期细胞学1860Beale首次报告痰液中发现癌细胞。1864Sanders尿中发现膀胱癌细胞1904Dufour脑脊液中发现癌细胞1909Marissi胃、食道冲洗液中发现癌细胞1928Papanicolaou用阴道涂片诊断宫颈癌创建巴氏染色法，并于1954年编著《脱落细胞学图谱》60年代，我国扬大望教授推广应用脱落细胞学技术70年代，针吸细胞学的开展和发展。80年代，应用液基细胞学检验技术（TCT）进行TBS分类等（女性生殖道细胞学检查）脱落细胞学的研究内容呼吸系统——痰液细胞学检查消化系统——食管拉网、胃镜细胞学检查泌尿系统——尿沉渣细胞学检查生殖系统——宫颈刮片、精液、前列腺细胞学检查浆膜腔积夜——胸水、腹水细胞学检查乳腺穿刺——乳腺病穿刺细胞学检查淋巴结穿刺——血液病、淋巴结，转移癌细胞检查甲状腺、肺、肝脏、胰腺穿刺等也广泛应用于临床第一节脱落细胞学检验基本技术脱落细胞学检查技术包括：标本采集、涂片制备、标本固定与染色、镜捡分析报告教学目标：※了解不同来源标本的采集方法※掌握脱落细胞标本的制片、固定方法和目的※掌握常用瑞氏、巴氏、HE染色原理与方法※熟悉脱落细胞学镜捡的要求，细胞观察分析方法脱落细胞学检验标本采集——多由临床医师采集标本来源1、自然排除物尿液、痰液、乳头溢液、精液、前列腺液阴道分泌物等。2、体腔抽出物胸腔，腹腔积液、心包积液、脑脊液等3、细针穿刺液淋巴结、乳腺、甲状腺、肝、肺、胰腺等。◆标本采集采集方法：擦取、蘸取、刷取、擦去、刮取、灌洗等◆涂片制备：因标本而异直接涂片、离心沉渣涂片、推片、压拉制片、印片、液基细胞学制片等。◆固定与染色固定的目的，固定的方法（乙醇，甲醇，）染色：巴氏染色、HE染色、瑞氏染色等◆镜下观察方法与细胞分析：采集（检验前）标本采集注意事项制片固定和染色（检验中）镜下观察分析报告书写及发放（检验后）脱落细胞学检查技术质控管理•正确采集标本是细胞学诊断的关键和基础在病变区准确直接采取细胞必须保持标本新鲜，及时送检，固定、制片。避免血液、粘液等干扰物混入标本采集方法应简便，操作应轻柔，减少病人痛苦，防止并发症的发生和肿瘤扩散。标本采集的方法直视采集法：口腔、鼻腔、鼻咽部、眼部、皮肤、阴道、宫颈、肛管等部位直接采集自然分泌液标本采集法：1、痰液涂片检查2、尿沉渣涂片检查3、前列腺液涂片检查4、乳头溢液涂片检查脱落细胞学检查技术灌洗法标本采集：以生理盐水对空腔进行冲洗，收集脱落细胞的方法。比如，胃，肠等摩擦法：用摩擦工具在病变处摩擦，取擦取物直接涂片。常用工具有线网套、气囊、海绵球摩擦法等。可对鼻咽部、食管和胃等组织器官针穿抽吸法：（细针穿刺）对组织器官的积液或某些实质器官穿刺吸取细胞作涂片检查。如淋巴结、乳腺、甲状腺、肝、肺、皮下肿块等涂片制作要求标本要新鲜：取材后尽快制片。操作要轻柔：防止挤压损伤细胞。涂片均匀、厚薄适度。玻片要清洁：硫酸洗涤浸泡、冲洗，再用75％乙醇浸泡。涂片要牢固：含蛋白质的标本；缺乏蛋白质的标本，涂片前先在玻片上涂一薄层粘附剂。涂片数量：每位患者的标本至少要涂4张(编号)涂片制备方法推片法：适用稀薄离心标本：血液、胸腹水。涂片法：用于稍稠的标本，如鼻咽部，痰液细针穿刺法：深部标本乳腺、淋巴结，肝…..压拉法：适于较稠的液体，如痰液涂片。吸管推片法：浆膜腔积液、脑脊液、尿液等标本。喷射法：用于各种吸取较粘稠的标本。包括骨髓印片法：活体组织检查辅助方法。将切取的病变组织切开，立即将切面平放在玻片上，轻轻按印即可。自动制片机：如子宫颈标本，阴道分泌物等涂片的固定固定：保持细胞的自然形态，防止细胞自溶和细菌导致腐败——固定液能凝固和沉淀细胞内蛋白质和破坏细胞内的溶酶体，保持细胞自然形态，使细胞结构清晰，易于着色。固定愈及时，标本愈新鲜，细胞结构愈清晰，染色效果愈好。常用固定剂：95%乙醇常用固定液固定液1、乙醚乙醇固定液：渗透性强，固定效果好。适于一般细胞学常规染色。2、氯仿乙醇固定液（carnoy固定液）：同乙醚乙醇固定液。95％乙醇固定液：制备简单，但渗透作用差，适用于大规模防癌普查。固定方法（1）带湿固定：用于比较粘稠的标本。涂片尚未干燥即固定如痰液，精液，前列腺液，阴道分泌物该法固定细胞染色鲜艳，结构清楚，选用巴氏染色、HE染色、瑞氏染色等。（2）干燥固定：涂片干燥后再固定，如，尿液，脑脊液、穿刺液、浆膜腔积液等适于瑞氏-吉姆萨氏染色。较稀薄标本常用。固定时间固定液不同，固定时间不同。15-30min.标本不同，固定时间不同。（一般15min）稀薄标本，固定时间可酌情缩短。痰液，食管拉网及阴道分泌物因含粘液较多，固定时间应适当延长。细胞成份较少者，固定时间可酌情缩短；细胞成份较多者，固定时间可应适当延长。巴氏染色法：所染细胞具有多色性，色彩鲜艳多样。涂片染色的透明性好，细胞核结构清晰，细胞质颗粒分明。苏木素－伊红染色苏木素－伊红染色（HE）：H是阳离子染料，核染成蓝紫色，Eosin是阴离子染料，胞质和胶原纤维染成粉红色。瑞－吉氏染色瑞氏－吉姆萨氏染色同白细胞分类染色。细胞较为鲜艳，细胞核染成紫红色，细胞质根据发育程度染成蓝色或红色。细胞病理学诊断要点与质量管理收集各类信息，进行综合分析，结合细胞形态作出明确诊断（患者信息，其他检测结果）细胞学诊断：1.明确细胞来源、观察主体细胞数量和背景细胞2.单个细胞与群体细胞的关系，群体细胞形态特征3.细胞核的特征与改变是判定肿瘤细胞的重要依据4.细胞质的改变，提供判断细胞来源，类型依据5.镜捡要求、人为影响：主观与客观影响6.细胞学诊断的优点和局限性（假阴性，假阳性）液基细胞学自动制片、涂片，染色，与TBS报告系统第二节正常细胞形态学一、复层鳞状上皮及分布被覆于全身皮肤、口腔、喉部、鼻咽部，食管、阴道,肛门以及子宫颈外口等．分成基底层、中层和表层,共三层六种.底层:分为内底层、外底层细胞中层:也称棘层细胞表层：分为角化前细胞，角化细胞。角化细胞又可分为不完全角化、完全角化。复层鳞状上皮脱落细胞形态示意图各层鳞状上皮细胞(巴氏染色)表层角化细胞表层角化前细胞角化前与中层细胞内底层,外底层细胞中、表层鳞状上皮细胞基底层鳞状上皮细胞二、柱状上皮细胞（腺上皮细胞）分布被覆于鼻腔、鼻咽、支气管、消化道、子宫颈管、子宫内膜等．分类1纤毛柱状上皮2黏液柱状上皮(腺体组织)成团脱落的纤毛柱状上皮细胞聚集成堆，细胞界线不清，胞核互相堆叠，形成核团，核周围胞质融合成胞质带。细胞团边缘可见有纤毛。纤毛柱状上皮细胞正常态、炎性变形态特征11纤毛柱状上皮细胞粘液柱状上皮细胞--腺细胞呈蜂窝状结构，胞质内富含粘液，多有大空泡细胞较大，可见印戒样细胞间皮细胞：胸腹水中常见间皮细胞细胞损伤、修复和再生细胞死亡（凋亡）1，细胞的程序性自然死亡称为细胞凋亡。细胞形态发生明显退化变性2，细胞坏死：病理性、理化因素刺激引起，如细胞的急性坏死、慢性增生等细胞损伤特征1，细胞的炎性变，核变性，多样变。2，细胞的化生变化。上皮细胞类型的转化化生是由长期慢性病理性因素刺激，导致一种成熟上皮组织逐渐演变成另一类成熟上皮组织的过程。容易引起细胞基因突变发生恶性改变。细胞凋亡鳞状细胞化生细胞的修复和再生非肿瘤性细胞学形态1.化生在病理因素刺激下，一种上皮细胞逐渐转化为另一种成熟上皮细胞的过程。多见鳞状细胞变为柱状细胞（鳞化）2.增生、（多由长期慢性刺激引起）见于慢性刺激引起的细胞的数量和增次增加，组织器官的体积也有所增大的现象。3萎缩：包括病理性的，和生理性的，由组织学来确定4炎性变：急性坏死，慢性增生，肉芽肿等，由组织学确定脱落上皮细胞的退化变性与炎性变肿胀性退变细胞水肿主要是细胞内水钠潴留，细胞肿胀，体积增大，胞浆内出现空泡变性，胞核也可肿大，有时胞核被挤压向一边呈印戒样，染色质成淡蓝色云雾状，核增大变形，最后细胞膜破裂，形成裸核。（多见柱状上皮和中底层鳞状上皮细胞）固缩性退变细胞脱水因细胞脱水或缺乏营养，细胞体积变小，细胞核固缩、浓染，胞质内可见蛋白质颗粒或细菌。表层细胞多表现为固缩性退变鳞状细胞炎性变形态：肿胀性变、固缩性变、炎性核异质、畸形改变等A：表层嗜碱或嗜酸性细胞B：萎缩型细胞，核固缩脑神经细胞萎缩柱状上皮细胞：炎症性变化核肿胀与核固缩脱落上皮细胞的退化变性脱落细胞退变肿胀性退变子宫颈管炎症：细胞炎性改变分叶核白细胞，单核-巨噬细胞混合病毒感染上皮细胞形态改变单纯疱疹病毒感染：分为两型Ⅰ型：主要经口和呼吸道传播Ⅱ型：主要通过性器官传播。细胞核中、重度肿大呈弱嗜碱性不透明毛玻璃样外观，偶见核空泡。可见多核巨细胞，细胞核中心出现大的嗜酸性包涵体，包涵体周围有亮晕，核边清楚巨细胞病毒感染：主要侵犯婴幼儿。细胞体积增大，20－40um，胞质与胞核内可见包涵体包涵体周围有亮晕。单純疱疹病毒感染的細胞学改变挖空细胞或核周孔穴细胞人乳头状瘤病毒有關的細胞學改變核周孔穴细胞各类炎症脱落细胞特征急性炎症和亚急性炎症：涂片中退变细胞、坏死细胞多见，中性粒细胞、淋巴细胞、吞噬细胞易见。肉芽肿性炎症：（以结核病为例）类上皮细胞：由组织细胞吞噬结合杆菌后变形而形成。细胞呈多边形或梭形，15－25um，胞质丰富淡红色，细胞边界不清。核为圆形或卵圆形，常见核变狭长，呈鞋底状或黄瓜状，两端钝圆。核边薄，染色质疏松呈细颗粒状。可见1－2核仁。类上皮细胞成堆并伴有干酪样坏死时，更具有诊断意义。朗罕式细胞：结核巨细胞朗罕氏细胞多个类上皮细胞融合而成。细胞体积大，达200－300um,呈不规则圆形，有十几个至几十个核，核排列在细胞周边部，呈马蹄形或环形。仅朗罕细胞诊断结核意义不可靠，需同时见类上皮细胞和干酪样坏死，才具有诊断意义。干酪样坏死：无结构红染的颗粒状物，坏死较彻底，在背景上难以找到细胞核碎片。其附近出现类上皮细胞，则更支持结核的诊断四、标本中非上皮细胞包括红细胞、中性粒细胞、嗜酸中性粒细胞、淋巴细胞、吞噬细胞、组织细胞、多核巨细胞、内皮细胞、间皮细胞等．坏死物、黏液及异物．如细菌，寄生虫等非上皮细胞（背景细胞）血管内皮细胞少量出现意义不大，组织损伤时可增多淋巴细胞；免疫性疾病，慢性疾病可增加吞噬细胞或组织细胞细菌，