质量研究总结

1复方双氢青蒿素片质量研究总结张美义、肖文中、林燕芳、詹利之摘要复方双氢青蒿素片由双氢青蒿素、磷酸哌喹、甲氧苄啶三种主要成分组成。是治疗疟疾的西药三类新药。我们通过对其性状、鉴别、检查、含量测定等各方面的研究，建立了复方双氢青蒿素片的质量标准。以TCL、磷酸盐反应、香草醛硫酸显色等进行鉴别。溶出度主要研究了磷酸哌喹、甲氧苄啶的溶出度，以浆法0.1NHCl900ml为溶剂，转速75r/min，30分钟取样，为溶出度检查条件，溶出量不低于70%。以TCL法进行有关物质检查，并对检出限、点样量等进行了研究。三种成分的含量测定分别采用了不同的方法，双氢青蒿素、磷酸哌喹采用分光光度法；甲氧苄啶采用高效液相色谱法。回收试验、线性试验及样品的测定证明了该方法的可靠性及稳定性。关键词：鉴别检查含量测定一、[性状]复方双氢青蒿素片（ARTECOM）为浅绿色薄膜衣片，除去包衣后片芯显类白色至淡黄色。本品中除磷酸哌喹为类白色至淡黄色，其余原辅料均为白色，但本品中磷酸哌喹含量大，所以未包衣的片是类白至淡黄色。二、[鉴别]1.磷酸盐的鉴别反应。取本品细粉约0.2g，加水10ml，超声振荡10分钟后滤过。取滤液5ml，加氨试液2ml，摇匀，滤过，滤液加硝酸2ml，摇匀，放置10分钟后加钼酸铵试液3ml，产生黄色沉淀，此沉淀能在氨试液中溶解。本品中甲氧苄啶、双氢青蒿素以及片剂辅料在同样实验条件下不产生颜色和沉2淀，不干扰该反应。2.双氢青蒿素的鉴别反应。取本品的细粉约0.2g，加氯仿10ml，搅拌使溶解，滤过，滤液蒸干，残留物加2%香草醛硫酸溶液1滴，即显红色，放置后渐变棕红色。本品中磷酸哌喹、甲氧苄啶以及片剂辅料在同样实验条件下不显色，不干扰该反应。3.薄层色谱法鉴别：（1）展开剂选择：用硅胶GF254薄层板，以醋酸乙酯的碱性系统和酸性系统，氯仿的碱性系统和酸性系统筛选分离条件，结果，酸性系统除双氢青蒿素外其它各组份未能展开。根据调整二乙胺的量达到相互分离的目的，选用氯仿—甲苯—二乙胺（5:4:2）为展开剂展开，双氢青蒿素、甲氧苄啶、磷酸哌喹分离效果较好。曾试验过的展开剂有：1、醋酸乙酯—甲酸—水（10:2:1）2、甲苯—醋酸乙酯—冰醋酸（5:4:1）3、氯仿—甲苯—二乙胺（5:4:2）4、甲苯—二乙胺（8:2）5、甲苯—二乙胺（8.5:1.5）6、甲苯—氯仿—二乙胺（5:4:1、5:4:2）7、环乙烷—丙醇—二乙胺（8:1:1）8、醋酸乙酯—二乙胺（9.2:0.8、9:1.5）9、氯仿—二乙胺（10:1、10:0.6）主斑点分开了但不圆拖尾10、氯仿—甲醇—浓氨（9.5:7.5:1）拖尾11、甲苯—二氧六环—氯仿—二乙胺（8:1:1:0.5）12、甲苯—二氧六环—氯仿—二乙胺（5:1.5:3:0.5）13、甲苯—二氧六环—氯仿—二乙胺—水（8:1:1:0.5:0.2）14、甲苯—醋酸乙酯—二乙胺（5:5:0.5）315、甲醇—冰醋酸（10:0.2）拖尾16、甲醇—二乙胺（10:0.15）分不开17、甲苯TMP在原点，另二者虽可分开，但接近。18、苯三者可分离，但TMP与双氢青蒿素相连。19、氯仿TMPRf约0.6，但另二者至前沿。20、醋酸乙酯—二乙胺（9.2:0.8）可以分开21、氯仿—甲苯—二乙胺（5:4:1）22、氯仿—甲苯—二乙胺（5:4:2）层析薄层板均需预饱和半小时，展开效果才好。（2）检出方法：斑点检视，比较了熏氨后立即置荧光灯（254nm）下观察和喷以香草醛—硫酸试液，后者为双氢青蒿素的显色反应（桃红色），但需先观察鉴别其它组份后才反应显色。前者则各组份均可观察，选用前者检视。磷酸哌喹和甲氧苄啶在紫外光灯下（254nm）检视是很灵敏的，而双氢青蒿素在紫外光灯下（254nm）检视就不很灵敏。采用氨蒸汽熏约20分钟后，立即置紫外灯（254nm）下检视，三种成份均能检出。（3）溶剂选择：本品中三种成份对提取溶剂的溶解度不同。双氢青蒿素、甲氧苄啶经超声能溶于80%乙醇。磷酸哌喹难溶于80%乙醇，操作中是取其80%乙醇饱和的澄清溶液点样。因此制备三种成份的对照品溶液时按制备供试品溶液的条件，双氢青蒿素16mg，甲氧苄啶45mg，磷酸哌喹160mg各加80%乙醇10ml，经超声助溶20分钟，取滤液点样。三、[检查]1、溶出度本品的溶出度研究中以测定磷酸哌喹和甲氧苄啶两种，因双氢青蒿素在水、稀酸中均不溶，亦未查到其溶出4度有关文献报导，因而暂时不能测定。通过对不同溶出介质，不同取样时间的比较，以及六批样品及三个不同批号样品的溶出度检查，确定了溶出度的检查方法。（1）操作方法确定：采用溶出度第二法，以900ml溶剂为介质，本品在用浆法操作时，片子沉在杯底，不漂浮，而且片子在介质中崩散快，操作也方便，所以采用该法。（2）不同溶出介质（0.1mol/L盐酸溶液和水）的比较，结果如下：批号981021采用溶出度第二法溶出时间45分钟溶出量（标示量%）成份50转/min75转/min0.1mol/LHCl水0.1mol/LHCl水9699991009290磷酸哌喹99991009989909795991009392959593949192甲氧苄啶959294969388949496959091从以上结果看，本品以水为介质甲氧苄啶与磷酸哌喹45分钟溶出量均比以0.1mol/LHCl溶液为介质低，而且溶出量不均匀，提高转速也改变不大。以0.1mol/LHCl为介质，75转/min较50转/min溶出量高。经实验甲氧苄啶、磷酸哌喹在水溶液中较稳定，未发现有分解降低的现象，主要还是溶解度问题。故选用0.1mol/LHCl溶液为介质。（3）不同转速（50转/min及75转/min）的比较：溶出时间统一采用45分钟，但为了考察溶出情况，在0.1mol/L盐酸5溶液为介质，每分钟75转条件下，比较了15、30、45分钟不同时间的溶出量。结果见下表：片号15min溶出量（%）30min溶出量（%）45min溶出量（%）磷酸哌喹甲氧苄啶磷酸哌喹甲氧苄啶磷酸哌喹甲氧苄啶11009610198101952100971009598943100959995100964101929596100955999610096999669794989410093平均溶出度X99.5095.0098.8395.6799.6794.83SD1.381.792.131.371.031.16CV%1.391.882.161.431.041.23从上表结果看，本品在15分钟时已溶出90%以上，与30分钟、45分钟差别不大。但考虑本品为试制样品，还未经过放大生产的实践，所以订为浆法75转/min，30分钟时溶出限度为70%。（3）以上述条件进行了6批复方双氢青蒿素片的溶出度检查，结果如下：6复方双氢青蒿素片六批溶出度测试数据成份磷酸哌喹甲氧苄啶溶出量10198100959595第1批(标示量%)9910095969694X±SD98.83±2.1495.17±0.75CV%2.160.79溶出量999999919494第2批(标示量%)969797949693X±SD97.83±1.3393.67±1.63CV%1.361.74溶出量10198102939592第3批(标示量%)9799100949590X±SD99.5±1.8793.17±1.94CV%1.882.08溶出量999899979694第4批(标示量%)1019898939694X±SD98.83±1.1695.0±1.55CV%1.181.63溶出量101100100969597第5批(标示量%)1009997969492X±SD99.5±1.3895.0±1.78CV%1.391.88溶出量101100100959496第6批(标示量%)1009899959396X±SD99.67±1.0394.83±1.17CV%1.041.237上述结果表明，6片中每片的溶出量，按标示量计算，均不低于规定限度（70%）。6片在不同时间溶出量的（X±SD）较小，CV%均在5%之内，因而该法有较良好的均一性。（4）样品测定三批不同批号的样品按以上条件测定结果见下表。浆法0.1mol/LHCl900ml为介质75转/min成份溶出量（标示量%）98102098102198102299991019810198磷酸哌喹9997100971009996971029910095969394909695甲氧苄啶949193929896949495959495（5）测试结果可信性分析a.磷酸哌喹6批36个溶出度数据，最高溶出度值为102%，最低为95%，最大差异为7%。6个均值及其标准差（X±SD）最高值99.67±1.03，最低97.83±1.16，均值差异仅1.84%，CV5%。b.甲氧苄啶6批36个溶出度数据，溶出度最高值为97%，最低为90%，最大差异为7%，6批均值及其标准差（X±SD），最高值95.17±0.75，最低值93.17±1.94，相差2%，CV5%。由上述试验及3批样品测试结果，我们认为采用的溶出度的试验方法、溶剂、时间和限度，比较合理，溶出度均一性好，测得值可信性高，可以作为该产品的溶出度测试方法。(6)溶出度检查方法总结：取本品，照溶出度测定法（中国药典1995年版二部附录XC第二法），以0.1mol/L盐酸溶液900ml为溶剂，转速为每分钟75转，依法操作，经30min，取溶液20ml，滤过。精密8量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取经80℃真空干燥至恒重的磷酸哌喹对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml约含14μg/ml的溶液，作为对照品溶液照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA）在345nm的波长处，分别测定吸收度，计算出每片中磷酸哌喹的溶出量。另精密量取上述续滤液5ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另分别精密称取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品与经80℃真空干燥至恒重的磷酸哌喹对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并分别制成每1ml约含甲氧苄啶20μg，磷酸哌喹71μg的溶液，作为对照品溶液⑴，对照品溶液⑵。照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA）取对照品溶液⑵，以271nm为测定波长(λ2)，在366nm波长附近（每间隔0.2nm）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求△A=Aλ2-Aλ1=0。再在λ2与λ1波长处分别测定供试品溶液与对照品溶液⑴的吸收度，求出各自的吸收度差值（△A），计算出每片中甲氧苄啶的溶出量。限度均为标示量的70%，应符合规定。2、有关物质检查（供稳定性实验用）⑴方法筛选a.甲氧苄啶有关物质的检查方法按《中国药典》95年版，以氯仿—甲醇（9:1）为溶剂，分别制成含甲氧苄啶20mg/ml，40μg/ml，磷酸哌喹饱和液的对照品溶液。取本品细粉适量（约相当于甲氧苄啶100mg），加上述溶剂5ml制成样品溶液，分别点样于层析硅胶GF254板上，以氯仿—甲醇—浓氨溶液（95:7.5:1）为展开剂，显色剂为铁氰化钾—三氯化铁溶液（取5%铁氰化钾溶液与10%三氯化铁溶液各10ml，临用前混合，摇匀）于1min内显蓝色，但磷酸哌喹与甲氧苄啶主斑点不能分9离。通过更改展开剂比例也没有取得较好的分离效果。b.为了正确反应有关分（降）解产物，在筛选鉴别反应展开剂系统的基础上，采用甲苯—氯仿—二乙胺（4:5:2）为展开剂，紫外254nm灯下检视，能清楚地显示出甲氧苄啶及磷酸哌喹的斑点。c.双氢青蒿素有关物质检查在采用部颁标准中收载的展开剂系统的基础上，用0.5%香草醛硫酸显色，再加热使杂质斑点显色的方法，取得较好的效果。d.对三种成份有关物质检查的点样量进行了考察，杂质斑点均随点样量增多而明显增大，而主斑点附近未发现其它杂质斑点，所以磷酸哌喹、甲氧苄啶选用溶解度大的80%醋酸为溶剂，双氢青蒿素以氯仿为溶剂。⑵检出限复方双氢青蒿素片中三种成份最小检出量的考察