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实验室生物安全第一章实验室生物安全概述2第一节实验室生物安全的概念3一、生物危害广义的生物危害是指各种生物因子对人、环境和社会造成的危害或潜在的危害。狭义的生物危害是指在实验室进行感染性致病因子的科学研究过程中对实验室人员造成的危害和对环境的污染。4二、生物安全1.生物安全是指防范、处理微生物及其毒素对人体危害的综合措施。2.实验室生物安全是指以实验室为科研和工作场所时，避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施。5三、生物安全的相关术语1.有害生物因子是指那些能够对人、环境和社会造成危害作用的生物因子。2.危害废弃物是指具有潜在生物危险、可燃、易燃、腐蚀、有毒、放射和起破坏作用的对人、环境有害的一切废弃物。3.气溶胶是指悬浮于气体介质中的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系（粒径一般为0.001~10μm）。64.缓冲间是指设置在清洁区、半污染区和污染区相临两区之间的缓冲密闭室，具有通风系统，其两个门具有互锁功能，且不能同时处于开启状态。5.生物安全柜生物安全实验室中极为重要的设备，其主要原理是使安全柜内保持负压，气流只能从外部进入安全柜，使柜内的病原微生物不能溢出，从而保护工作人员，同时其循环风和排风经过高效过滤器过滤，又能保护环境。7第二节实验室感染的类型和来源8一、实验室感染的类型1.气溶胶导致的实验室感染由于实验室中的病原微生物可以以气溶胶的形式飘浮在空气中，工作人员吸入了这种污染的空气而造成感染。2.事故性感染因为实验室人员操作过程中的疏忽，使本来接触不到的病原微生物污染环境，直接或间接感染实验室人员甚至危及周围环境。3.人为破坏有意播散生物制剂。9二、实验室感染的来源（一）标本1.检测标本：实验室标本；临床标本。2.菌毒种：一类；二类；三类；四类。（二）仪器设备使用过程中产生的污染1．离心机：可能造成实验室感染的有气溶胶、飞溅物和离心管泄漏等。2．组织匀浆器、粉碎器及研磨器：可能造成实验室感染的有气溶胶、漏和容器破碎等。3．超声波器具：气溶胶。104．真空冷冻干燥机及离心浓缩机：气溶胶；直接接触污染。5．培养搅拌器、振荡器和混匀器：气溶胶；飞溅物；溢出物。6．恒温水浴器和恒温震荡水浴器：微生物生成；气溶胶7．厌氧罐：爆裂，散布传染性物质。11（三）操作过程产生的污染1.接种：气溶胶。应使用无弹力的铂丝接种环，细菌接种后接种环火焰灭菌易崩散，酒精灯烧灼时要特别注意。2.混匀：气溶胶。吸管吸吹菌液时不要产生气泡，应沿容器壁排出。3.研磨：气溶胶。最好使用组织研磨器，乳钵易产生气溶胶。4.移液：吸管上端的棉花松紧要适度，吸液时要从管底吸取，吹出时要轻缓，不要全部吹净，以免产生气泡，形成气溶胶。125.开封：溢出，要避免压力和气流的急剧变化。6.离心：离心管套底垫要完好，使用匹配的管、套、离心头，加盖。7.注射：做好个人防护，正确使用注射器。8.搬运：室内移动要避免滑落，移出室外要有坚实密闭的外包装。13第三节实验室生物安全防护14一、实验室防护器材1.一级屏障是操作者和被操作对象之间的隔离，以防止操作人员被感染为目的，也称一级隔离。如：生物安全柜、防护服、手套、安全眼镜、呼吸防护装置、紧急冲洗装置等。2.二级屏障是生物安全实验室和外部环境的隔离，也称二级隔离。是一级屏障的外围设施。以防止实验室以外的人员被感染为目的。如：实验室的建筑、结构和装修、电气和自控、通风和净化、给水排水和气体供应、消防和灭菌等。15二、规范化实验室管理1.实验室管理规章制度：包括培训制度、准入制度、健康监测报告制度、个人良好行为制度、意外事故报告制度等。2.标准操作程序：包括实验废弃物处置标准操作程序、进出实验室标准程序、菌毒种使用标准操作程序、实验室消毒标准操作程序、意外事故处理标准操作程序及各种仪器设备和实验标准操作程序等。16第二章实验室生物安全风险评估17第一节病原微生物的风险评估18一、病原微生物的风险等级第一类病原微生物能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。如:鼠疫耶尔森菌、霍乱弧菌；天花病毒、新疆出血热病毒、埃博拉病毒、猴痘病毒等29种病原体。第二类病原微生物能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。如：炭疽杆菌、布氏杆菌、结核分枝杆菌、艾滋病病毒、高致病性禽流感病毒、乙型脑炎病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、SARS冠状病毒、西尼罗病毒等70种。19第三类病原微生物:能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。如:沙眼衣原体、破伤风梭菌致病性大肠杆菌、脑膜炎球菌、伤寒沙门菌、志贺菌、葡萄球菌；钩端螺旋体；白假丝酵母菌、肠道病毒、轮状病毒、肝炎病毒、风疹病毒、流感病毒、疱疹病毒等275种。第四类病原微生物:在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。如:小鼠白血病病毒；减毒、弱毒菌株，以及不属于以上三类的各种低致病性微生物菌种。20第二节实验室仪器设备的风险评估21实验室仪器设备的风险评估应从以下各方面进行：1.所有仪器设备是否都经过安全使用认证。2.在对仪器设备进行维护之前，是否进行了清除污染工作。3.生物安全柜和通风橱是否进行定期检测和保养。4.高压灭菌器和其他压力容器是否定期检查。5.离心机的离心吊桶及转子是否定期检查。6.是否有盛放碎玻璃的安全容器。7.是否配备并使用供丢弃锐器的容器。8.是否配备并使用污染废弃物专用容器。22第三节实验室生物安全的环境评估23实验室生物安全环境评估因素涉及：1.实验室建筑2.储存设施3.环境卫生和工作人员设施4.实验室生物安全保障5.暖气和通风6.照明24实验室建筑总体是否整齐，并且周围没有障碍物实验室建筑是否清洁地板是否有任何结构缺陷，是否防滑活动空间和走廊是否满足人员通行和大型仪器设备的搬运试验台表面是否耐溶剂和腐蚀性化学品的侵蚀是否每个实验室房间都有洗手池实验室建筑在结构和维护中能否避免啮齿类动物和节肢动物进入及滞留所有暴露在外的蒸汽管道和热水管道是否采取了隔热或防护措施来保护人员安全是否配备有断电时使用的独立供电系统是否安排了储存设备、储存架来确保储存物品不会滑动、倒塌或掉落储存设施里是否堆积有易造成人员绊倒、火灾、爆炸和昆虫匿藏的垃圾、闲杂材料和物品冰箱和储存区域是否上锁建筑物是否处于清洁、有序和卫生的状态是否有饮用水是否提供冷热水、肥皂和毛巾是否分别给男女工作人员提供了更衣间实验室的每一位成员是否都配备了存放日常服装的设施是否有实验室人员进行午餐等活动的房间是否有适当的机构来收集和处理普通生活垃圾噪声水平是否在可接受范围内普通照明是否充分试验台上是否有工作照明日光灯色彩是否和谐是否已经进行了定性的危险度评估来明确规定安全保障系统所保护的范围在不用时整个建筑物是否可以安全的锁上门和窗是否是防破碎的装有危害性物品以及贵重仪器设备的房间是否上锁使用这样的房间、仪器和物品是否进行控制并需批准工作温度是否舒适对于直接暴露在阳光下的窗户是否装有避光窗帘是否有足够的通风换气通风系统是否装有高效空气过滤器机械通风系统是否会影响生物安全柜和通风橱内部及周围气流第三章实验室生物安全防护水平25一、实验室生物安全防护水平的分级1.根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将实验室生物安全防护水平分为4级，1级防护水平最低，4级防护水平最高。2.分别以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示实验室的相应生物安全防护水平。3.一、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。4.三、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动，要通过国家认可，颁发相应级别的生物安全实验室证书，证书有效期为5年。26二、BSL-1安全实验室1.生物安全水平能够安全操作，对实验室工作人员和动物无明显致病性的、对环境危害程度微小的、特性清楚的病原微生物的生物安全水平。2.用途(1)生物实验教学。(2)从事具有明确生物学特征的、已知在健康成人中不引起疾病的微生物菌株的研究。3.安全装备(1)一般不需要生物安全柜。(2)工作人员在实验室应穿工作服。(3)必要时戴手套或眼罩。(4)配备常规的实验及清洁用具。2728BSL-1安全实验室三、BSL-2安全实验室1.生物安全水平能够安全操作对实验室工作人员和动物致病性低的、对环境有轻微危害的病原微生物的生物安全水平。2.用途从事与某些严重人类疾病有关的，但具有有效治疗和预防措施的微生物菌株研究。3.安全装备：（1）生物安全柜（II级）。（2）实验外罩、手套等在离开时必须留在实验室中,不能污染非实验区。（3）在生物安全柜（II级）外操作感染性物质，要使用个体防护装备。（4）实验室提供带锁的门,以及相应的实验清洁设备。2930BSL-2安全实验室四、BSL-3安全实验室1.生物安全水平能够安全地从事国内和国外的、可能通过呼吸道感染、引起严重或致死性疾病的病原微生物研究工作的生物安全水平。2.用途从事国内和国外的、可能通过呼吸道感染，引起严重或致死性疾病的病原微生物的研究工作。3.安全装备（1）生物安全柜（II级）。（2）呼吸器、面罩和防护服。（3）实验室由清洁区、半污染区和污染区组成，污染区和半污染区之间设缓冲间。必要时半污染区和清洁区之间亦设缓冲间。（4）建造空气管道通风系统以进行气体消毒。3132BSL-3安全实验室五、BSL-4安全实验室1、生物安全水平能够安全地从事国内和国外的、能通过气溶胶传播的、严重危害人和动物生命的、无特效治疗和预防措施的微生物菌株研究工作的生物安全水平。2、用途从事国内和国外的、能通过气溶胶传播的、严重危害人和动物生命的、无特效治疗和预防措施的微生物菌株研究工作。3、安全装备（1）生物安全柜（III级）。（2）防护服，呼吸器、正压面罩。（3）实验室应为负压，由清洁区、半污染区和污染区组成。（4）配备应急电源和专用供电线路，安装安全防护排水管。3334Thankyou!35