注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案

注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-002012年10月南京绿叶思科药业有限公司NanjingLuyeSikePharmaceuticalCo.,Ltd目录1.概述.....................................................................................................................................12.目的.....................................................................................................................................13.范围.....................................................................................................................................14.风险评估.............................................................................................................................15.计划确认时间.....................................................................................................................16.确认人员及职责.................................................................................................................17.确认前准备.........................................................................................................................28.确认内容.............................................................................................................................39.可接受标准...........................................................................................................................810.偏差调查及异常情况.........................................................................................................811.综合分析与结果评价.........................................................................................................812.验证结论和监测建议.........................................................................................................813.附件.....................................................................................................................................9南京绿叶思科药业有限公司注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00第1页共9页1.概述现行的注射用紫杉醇脂质体质量标准为国家药品标准WS-718(X-529)-2002，为了确认包封率、有关物质、含量测定检验方法在本公司质管部实验室条件下的适用性，特制定本确认方案。2.目的确认注射用紫杉醇脂质体质量标准（国家药品标准WS-718(X-529)-2002）中包封率、有关物质、含量测定检验方法在本公司质管部实验室条件下的适用性。3.范围本确认方案适用于注射用紫杉醇脂质体国家药品标准WS-718(X-529)-2002中包封率、有关物质及含量测定检验方法在本公司质管部实验室的方法学确认。4.风险评估编号风险影响SPD风险等级确认活动1未按照方案执行。导致确认结果不可信。322高确认前对参与确认的人员进行培训。2未按照SOP执行操作。导致确认结果不可信。322高确认过程和结果由另一人进行复核。注：S:严重性P:可能性D:可检测性5.计划确认时间确认实施时间计划为2012年10月26日至2012年11月10日。6.确认人员及职责6.1确认小组组长姓名部门职务责任王晟质管部检验员负责确认方案的起草，在方案批准后，对确认小组成员进行本方案的培训。负责确认方案的实施。确认过程中，如有偏差，及时报告并配合调查，保证按偏差处理程序进行调查和处理。确保报告的生成、审核和批准。南京绿叶思科药业有限公司注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00第2页共9页6.2确认小组成员姓名部门职务责任毛圣淼质管部检验员在方案批准后，按确认方案实施，收集、整理数据，完成确认记录，对确认过程中出现的偏差及时报告并配合调查。待确认完成后，起草确认报告。7.确认前准备7.1确认相关文件（检查记录见附表一：确认文件检查记录）7.1.1方案建立的依据注射用紫杉醇脂质体质量标准（WS-718(X-529)-2002）《中国药典》（2010年版）药品质量标准分析方法验证指导原则《药品GMP指南》（2011年版）分析方法的验证和确认7.1.2公司相关管理制度偏差管理规程（SMP-QA-024）验证程序管理规程（SMP-QA-032）验证文件管理规程（SMP-QA-030）7.1.3确认必备的操作规程无。7.1.4相关质量标准和检验规程及检验仪器的操作规程Agilent1200高效液相色谱仪操作维护保养规程（SOP-EM-521）METTLER-TOLEDOXS105分析天平操作规程（SOP-EM-519）7.2参与确认人员的培训确认开始前必须保证所有人员都经过相应的培训，并做好培训记录。（见附表二：人员培训记录）7.3支持仪器/设备有效期确认确认开始前必须对确认中所需要的检测仪器/设备的有效期进行检查，保证所用检验仪器/设备在确认实施中是处于合格有效的，并做好检查记录。（见附表三：检验仪器的有效性记录）南京绿叶思科药业有限公司注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00第3页共9页8.确认内容8.1试剂及仪器设备试剂列表试剂名称来源紫杉醇对照品自标（云南汉德）甲醇（色谱纯）TediaCompany,InC.USA注射用水制水三室分析仪器列表设备名称生产公司名称型号设备编号电子天平梅特勒-托利多仪器有限公司XS105002高效液相色谱仪美国安捷伦科技公司Agilent1200014色谱柱汉邦科技4C18254F090109048.2包封率检验方法学确认8.2.1检验方法色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇:水（3:1）为流动相，检测波长为227nm。理论板数按紫杉醇峰计算，应不低于1000。供试品溶液的制备：取本品1瓶，加5%葡萄糖注射液7.5ml,旋涡混匀10分钟,使成每1ml中含紫杉醇约为4mg的乳浊液。测定法：取用水充分溶胀后的葡聚糖凝胶(SephadexG-50，100-300µ)加入内径为0.7cm的层析柱中,使凝胶层高约为21cm，用水100ml分次加入柱中，使柱平衡，精密吸取供试品溶液0.2ml,沿管壁加至凝胶层面上，用少量水冲洗层析柱壁，每次1ml，共两次，使样品进入凝胶柱，然后用细玻璃棒轻轻搅匀样品层（约1cm高）。用水洗脱，自洗脱液出现轻微浑浊，即开始定量收集洗脱液15ml，摇匀，精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即为测定被包封的紫杉醇含量ME的溶液。凝胶柱再用不同浓度的乙醇梯度洗脱（沿管壁缓缓依次加入33%乙醇3ml，66%乙醇3ml及无水乙醇），弃去洗脱液10ml，立即开始定量收集游离紫杉醇部分，共收集5ml，作为测定MF的溶液。照含量测定项下的色谱方法，取ME和MF溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积按下式计算包封率和回收率：南京绿叶思科药业有限公司注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00第4页共9页包封率（%）=5M75M75MFEE×100%回收率（%）=%10020575LFEMMM式中：ME为被包封在脂质体中的紫杉醇的峰面积MF为未被包封的游离紫杉醇的峰面积。LM为总紫杉醇的峰面积。8.2.2确认项目的确定根据《药品GMP指南》（2011年版）分析方法的验证和确认，参照含量测定法的确认项目，应该要确认的项目有专属性、精密度；由于包封率的样品由收集获得，可能存在收集不完全而使结果产生偏差，所以准确度也需确认，在本方案中增加回收率实验。则需要确认的项目为专属性、精密度、准确度。8.2.3专属性8.2.3.1操作方法按处方量精密称取辅料，置于20ml西林瓶中，加入5%葡萄糖注射液7.5ml，涡旋振荡10min，配置成空白辅料溶液。取空白辅料溶液，按照8.2.1项下的测定法操作，将收集到的ME、MF和ML各精密量取20μl注入液相色谱仪。记录色谱图。8.2.3.2接受标准用空白辅料溶液收集得到的ME、MF和ML色谱图在紫杉醇峰位置均应无干扰。8.2.4进样精密度8.2.4.1操作方法按照8.2.1项测定法配制ME溶液，分别精密量取20μl注入液相色谱仪，连续测定6次，记录色谱图。8.2.4.2接受标准连续6次测定的ME主峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。8.2.5重复性8.2.5.1操作方法取注射用紫杉醇脂质体3瓶，分别加入5%葡萄糖注射液6.2、7.5、9.4ml涡旋振荡溶解，每瓶按照8.2.1项下的测定法分别操作3次，计算包封率。8.2.5.2接受标准9次包封率的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。南京绿叶思科药业有限公司注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00第5页共9页8.2.6回收率8.2.6.1操作方法取注射用紫杉醇脂质体3瓶，分别加入5%葡萄糖注射液6.2、7.5、9.4ml涡旋振荡溶解，每瓶按照8.2.1项下的测定法分别操作3次，计算回收率。8.2.6.2接受标准9次回收率均应在98.0～102.0%之间，其相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。8.3有关物质检验方法学确认8.3.1检验方法色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇:水（3:1）为流动相，检测波长为227nm。测定法：取本品适量，加甲醇制成每1ml中约含紫杉醇1.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇稀释制成每1ml中含紫杉醇0.045mg的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱方法，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰的高达记录仪满量程