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第一组成员分工关于贝诺酯镇痛的药效学评价实验设计一、实验设计的目的意义1、实验设计的目的意义：贝诺酯是乙酰水杨酸和对乙酰氨基酚的酯化物，作为一种前药具有对胃刺激性小的优点，吸收后即有阿司匹林的抗炎作用又有对乙酰氨基酚的解热、镇痛作用，药理作用优于单用一种药的作用。对于贝诺酯的药理实验少有研究报道，此次实验目的是验证贝诺酯的镇痛作用。2、国内外研究现状：镇痛药效学评价主要分为以下几类化学刺激法1、炎剂扭体法[1]：腹腔注射016%冰乙酸012ml/只或0.5%酒石酸锑钾012ml/只致痛。本法适于筛选非麻醉性镇痛药,尤其是筛选甾体抗炎药镇痛作用的一种敏感而简便的一种方法,但缺乏特异性,个体差异大,故腹腔时的部位和操作技术应尽量保持一致。2、佐剂关节炎模型[1]：其基本方法是在大鼠尾根部皮内或足跖部注射福氏完全佐剂,注射后原发病变为致炎局部的炎症反应。此模型与人的类风湿性关节炎很相似,其造模特异性高,假阳性率低,被认为是慢性痛最为理想的模型之一。3、钾离子皮下透入或注射致炎性疼痛模型[2]：饱和KCl溶液,经一定强度的直流电透入或直接注射进入动物的不同皮下部位,引起疼痛。该模型主要用于药物或针刺在外周的镇痛机制。4、辣椒素静脉推注致偏头疼模型[1]：用辣椒素静脉刺激和电刺激的方法,造成大鼠硬脑膜内血浆蛋白渗出,建立神经源性炎症动物偏头痛模型。热刺激法1、热板法[3]：用热板测痛仪测量每鼠的痛阈(即痛反应情况潜伏期,指小鼠触热板至舔后足的时间)。本法对组织损伤最小,动物可反复利用,且简便易行,但对甾体类抗炎药不太敏感且适用于雌鼠。2、辐射热刺激甩尾法：全反射式电影放映灯泡发出光来,聚集照射,以启动光源至鼠尾急速摆动的时间为甩尾潜伏期测痛阈。实用于麻醉性及非麻醉性阵痛药物的筛选,是纯粹的脊髓反射。3、热水缩尾法：将鼠尾下部垂直浸入45-55℃水浴中，浸入长度为3cm左右，以尾回缩出水面的潜伏期为测痛指标。此法仅适用于阿片类药物。电刺激法1、大鼠牙髓刺激[4]法：牙髓传入纤维主要传导伤害信息，对牙髓刺激可看作“纯痛”刺激。在牙骨-釉质交界处打小孔引入导线，刺激时通电。本法适用用于大用部分动物，不过观察指标不明显且过程繁琐。2、电刺激大鼠甩尾法[4]：用帆布带固定大鼠于木板上，用适当电压刺激尾部，引起甩尾和嘶叫的电流强度作为痛反应指标。此法简单易行但电刺激不是纯粹的痛觉，个体差异较大。3、电刺激三叉神经偏头疼模型[2]：麻醉大鼠，沿正中线切开皮肤,暴露颅骨，给于神经电刺激。此模型造成大鼠硬脑膜内血浆蛋白渗出，是一成功的神经源性动物疼痛模型。机械刺激法1、大鼠压足法[4]：给鼠足施加连续递增的压力，足缩回时所用的压力值为痛域指标。此法简单易行但鼠的自我移动会造成指标准确。2、小鼠尾根加压法[4]：通过对小鼠尾部施加连续压力，尾缩回和全身退缩反映时为痛域指标。此法准确、灵敏、快捷，适用于大部分镇痛实验。3.存在的问题：就目前而言贝诺酯作为一个传统的药物，对其药效学的研究已经较少，更多的是研究贝诺酯的合成工艺和制剂工艺。并且在已有的药效学实验所采用的扭体法对实验动物造成的伤害过大。而小鼠热板法对性别有要求（雄鼠受热后阴囊下垂对热刺激敏感），所以选用大鼠尾根加压阀。4实验设计对于各种方法的考察本实验组选定使用尾根加压法。原理，通过微调旋钮缓慢下移加压杆，压力自受压钢丝垂直传至自动计量仪直接读取数值（g）为鼠尾在支撑点处承受的压力[4]。当机械加压产生疼痛时出现缩尾或全身退缩反应，此时压力值为痛阈指标。1实验所需物品1.1.材料：Wistar大鼠200g-220g，生理盐水，贝诺酯片剂制剂（规格：0.5g/片），布洛芬片剂制剂（规格：0.1g/片），苦味素，棉签，随机数字表，大鼠灌胃针，手套，研钵，烧杯，记号笔1.2.仪器：电子天平，带有加压杆的移动架（江湾I型脑立体定向仪的移动架)，带有钢丝（横切面积0.5mm2）的小木块，压力仪（DS-88自动计量仪：范围0g-200g）2.实验方案:2.1.装置组装：如图2.2.动物筛选：鼠尾居尾根1cm用记号笔标记，标记点放在受压钢丝上缓慢加压，测定每只鼠的基础潜伏期，剔除反应过敏（5g）和反映迟钝（100g）的个体，雌雄各筛选出30只[2]。将大鼠用随机数字表分为，空白组，阴性对照组，阳性对照组，低、中、高药物组，每组雌雄个体各5只，苦味酸标记。2.3.试剂配制：将贝诺酯片剂用研钵研磨成粉末状，用蒸馏水配置成10mg/ml溶剂，布诺芬使用同样方法配制。2.4.测定痛阈值：为消除个体差异采用自身对照，首先测定出每只鼠的基础痛阈值，测定两次（间隔5min）取平均值。然后给阳性组灌胃0.312ml/100g布洛芬溶液（按市售成人用药换酸），低、中、高药物组分别灌胃1.04ml/100g，2.08ml/100g,3.12ml/100g贝诺酯溶液（同上），阴性组灌胃与中剂量组等体积的生理盐水，测定两次出各组10min，20min，30min痛阈值，超过100g无反应者，痛阈值按100g计。求出每组平均数记入下表按痛阈提高率%计算药效：痛阈提高率%=（给药后痛阈-基础痛阈）/基础痛阈*100%参考文献[1]蔺兴遥，邱德文，许建阳.[J],疼痛实验动物模型的探讨：中国实用医药，2007.12.2（34）；146-149[2]张均田，杜冠华.[M],现代药理学实验方法：中国协和医科大学出版社：2010.9；1382-1385[3]许蓬娟，花春艳，艾洪宾，等.[J]，石榴皮水提物的镇痛实验研究：生物医学工程研究，2003.28（4）；263-266[4]徐叔云，卞如濂，陈修主编，[M]，药理学实验方法.第三版，人民卫生出版社，2001；822-888实验组基础痛阈值（g）给药后各时间段的痛阈值（g）10min20min30min空白组阴性组阳性组低药物中药物高药物