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微生物标本的正确采集与运送金秀县人民医院感控科主要内容血培养标本采集与运送痰培养标本采集与运送尿培养标本采集与运送大便培养标本采集与运送手术切口与软组织感染标本采集与运送胸水标本如何送检化脓和创伤标本采集与运送穿刺液标本采集与运送眼、耳、鼻、咽拭子标本采集与运送世界人口死因感染性疾病：25％抗生素时代，感染仍是人类健康的主要“杀手”高死亡率原因新现传染病：近30年，已有近30种新的病原生物，其中包括HIV、SARS、禽流感和各种新型肝炎病毒等引起的各种疾病。再现传染病：以往已被认为得到很好控制的传染病，如结核、登革热等的流行和传播又重新抬头。低免疫人群急剧上升：艾滋病、移植医学国际间交通的快速便捷使得当今疾病传播无国界的概念。气候变暖，人口快速增长，都市化进程加快，伴随人口密度和人口流动增加，清洁水源不足和卫生设施的不完善，以及生态破坏造成人与媒介生物接触机会增多（动物微生物向人类的袭击）等。人类还没有足够的能力战胜病原体。病原微生物的耐药性产生的速度已超过新型抗生素发明的速度（细菌耐药性的快速发展)。提高感染样本送检率加强细菌耐药监测关注细菌性疾病的病原学诊断，已成为临床工作者、临床微生物与微生物工作者、药学家和从事感染控制的工作者共同关注的热门焦点。成功治疗感染症的因素‧成功分离病原菌–标本收集、运送、保存–标本处理方法–检验技师专业知识‧医师判读病原菌培养结果‧选择适当治疗方法正确的微生物学检验始自正确的标本采集。标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关键由于标本的采集和运送常由护士或医生或病人自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题所在之处，造成的后果是:临床医生最不能接受的问题:阳性率低临床医生要合理用好两种数据1.本地区、本单位病原流行病学资料，指导经验用药。（微生物室、院感科、临床科室）2.药敏试验报告，纠正经验用药。重视病原学检查,尽可能在应用抗菌药物之前留取标本送检。以提高病原学诊断率,为选药和调整药物提供依据。国内微生物标本的采集目前存在的问题：标本送检率低从全国来看，抗感染治疗前，送检相关标本可能只占应送标本的一半左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，此时已失去阳性培养的机会。标本有缺陷正确收集各种临床标本，关注特检标本采样与送检的方法和条件，是完成病原学诊断的先决条件。微生物让人类步步为营，我们应该追求：“准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗”正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！标本规范化采集的重要性正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌检验成功的关键。标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础。好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患照顾质量，降低医疗成本。及时采集微生物标本作病原学检查（早期采集）在抗菌药物使用前采集标本（早期采集）采样时严格执行无菌操作（无菌采集）采样后立即送检标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂（无菌采集）不能用棉拭子送检，宜用运送培养基送检标本应注明来源和检验目的微生物标本采集与运送原则如何提高细菌阳性检出率标本采集时机标本采集方法标本的质与量标本的运送与保存镜检筛选合格标本高质量、多种分离培养基培养环境二、标本的处理一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中，脑脊液等则要在25℃保存。患者标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意安全防护。标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。最有价值的细菌学检测项目血液培养脑脊液培养脓液培养痰液培养粪便培养尿液培养生殖道标本培养厌氧标本培养其他无菌体液培养一、血培养标本采集与运送法国生物梅里埃BacT-ALERT3D120血培养仪血培养概念:采集患者的血液或无菌体液标本,送至微生物实验室培养检测.检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存在.如有细菌,则极有可能为致病的细菌.进一步进行鉴定/药敏试验.完整的血培养过程医师开出医嘱护理人员收集送检样本实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物三级报告：为临床医生提供抗菌药物敏感性试验结果目前血培养的问题：采血时机不合适采血套数不够采血量不足只做需氧培养，不同时做厌氧培养采血前或采血时正在使用抗生素治疗“只有在发热时，才需要进行血培养。”————关于血培养指征想采就采答案：血培养的指征当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养怀疑患者有血流感染的症状有：不明原因的发烧(＞38℃)或体温过低(＜36℃)白细胞增多（＞10,000/ul），粒细胞减少（＜1,000ul）休克，寒颤，僵直严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，…)心率异常加快低血压或高血压呼吸频率加快“何时采血进行血培养，无特殊时间要求。”———关于采血时机答案：采集血培养样本的最佳时间尽可能在患者寒战或开始发热时采血在患者接受抗生素治疗前采血如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养细菌量体温时间上升幅度采血部位通常采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。对疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培养。常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。除非怀疑导管相关性血流感染，请参照导管相关性血流感染的采血方法。“为减轻患者痛苦，只从一个穿刺部位采一份血液标本即可。”———关于采血套数及部位基本概念成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫“一份”注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。采血套数Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;45:3546-3548表皮葡萄球菌的临床意义阳性套数采集套数临床意义％污染可能％无法确认％11097312295322603371301000237502533100002－3套血培养，有助于污染的判断。Tokars,JI.ClinInfectDis2004;39:333采集1套无法判断是病原菌还是污染菌。答案：关于血培养套数与采血部位每位患者每次采血最少2套，3套更好初发患者，绝不能只采1套标本多个穿刺部位采血。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断要求：从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血培养。必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。“两套血培养采集间隔无特殊要求。”———关于采血间隔答案：关于标本采集间隔时间5.血培养次数和采血时间只要怀疑血液细菌感染，应即刻采集。采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行，在1h内采集2～3次做血培养。对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采2份。可疑细菌性心内膜炎，在1到2小时内采集3份血标本，如果24小时后阴性，再采集3份以上标本“每瓶采集多少血液无特殊要求。”———关于采血量采血量(ml)与检出率的关系010203040506070809010051015202530354045505560ml%RelativeYieldOverall血培养物每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加3％但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例为1：5－1：10答案：关于采集血液量采血量是影响灵敏度最关键因素成人一份标本2个培养瓶（需氧＋厌氧），每瓶8－10ml，共20ml；要求至少采两份标本，即40ml。儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量＜1％总血量下，一般为1－5ml采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90％以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染先采生化、凝血标本，再采血培养标本。”———关于各种血液标本的采集顺序血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。所以要最先采集血培养标本。污染率的指标是3%（100份标本里只能有不到3个标本出现污染。）答案：采各种血液标本的先后顺序“消毒的重点是足够量的消毒剂。”———关于皮肤及培养瓶消毒皮肤消毒要求：使用碘伏、碘酊、次氯酸或洗必泰作为血培养的皮肤消毒剂，碘酊的作用时间不能少于30秒，碘伏的作用时间则需要1.5～2分钟。对年龄小于2个月的新生儿，需使用70%的酒精进行皮肤消毒。消毒剂需要有足够的作用时间以保证消毒效果。皮肤消毒确定采血部位：用碘伏消毒液原液局部擦试2遍，作用至少2分钟，穿刺部位消毒时由里向外涂圆圈擦拭，圆圈直径大于5cm穿刺前让采集部位风干；不能再触摸穿刺处静脉生物梅里埃菌血症诊断护士版培养瓶的准备检查培养瓶的表面、培养基。确保培养瓶在效期内无渗漏、破裂或明显的污染；确保培养液清澈取下顶部保护性的弹性帽盖注意：内部的隔膜盖并非无菌的，必须进行消毒用70%的酒精或碘溶液消毒隔膜盖，接种前干燥1分钟培养瓶的消毒程序：1、去掉培养瓶口的塑料瓶盖。2、75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60秒。3、自然待干。4、将标本注入培养瓶内。5、颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集静脉穿刺和培养瓶加样使用针头和注射器的方法抽取适量血液直接注入血培养瓶中使用注射器刻度控制正确的标本体积血管导管尖（intravascularcathetertips）及腹膜透析导管（peritonealdialysiscatheters）培养是监测血流感染源方法之一先经导管取血20ml进行血培养导管周围的皮肤消毒步骤，然后以无菌剪刀取下约5公分长度导管尖，置于无菌容器中送检再由静脉端抽血进行另外一套血培养实验室将导管尖于培养基上滚动数次后进行半定量培养，如果菌落数大于15CFU/Tip以上或定量肉汤培养（超声法）菌落数大于100CFU/Tip以上，表明导管上存在细菌定植血管内导管相关感染诊断血管内导管相关感染诊断与处理实用指南ＩＤＳＡ.2009血管内导管尖端培养标本采集和培养示意图确诊ＣＲＢＳＩ需要至少一份经皮采样血液培养和导管尖端培养出同一种微生物，或两份血液培养（一份采自导管，另一份采自外周静脉，并满足以下要求定量血培养时，导管血培养菌落数是静脉血液培养菌落数的至少多三倍即为ＣＲ-ＢＳＩ导管血培养阳性时间比外周静脉血培养阳性时间早至少２小时即为ＣＲ-ＢＳＩ标本留取应当在抗微生物治疗开始前进行血管内导管相关感染诊断“培养瓶未使用时，需要冷藏或冷冻。”———关于培养瓶的储存温度不需冷藏，更不能冷冻。保存在15－25℃的室温即可，温度过低会导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。答案：关于未用培养瓶的储存温度“加入标本后的培养瓶夜班未能及时送到检验科，可以冷藏或放入35℃的温箱。”———关于夜班血培养的送检培养瓶夜班未能及时送到检验科，存在室温即可，不能冷藏也不能放入35℃的温箱。过夜不会对检测造成影响，但仍需尽快送检。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。温箱会导致细菌进入生长对数期，从而错过检测的最佳时期。答案：关于夜班血培养的送检血培养标本的运送要求