兽医药理学实验

兽医药理学实验河南科技大学动物科技学院主讲：赵振升白东英王国永动物医学、动植检专业本课程实验内容实验一药理实验基础知识实验二药物的剂量与剂型对药物效应的影响实验三毛果芸香碱与阿托品对瞳孔及对光反射的影响实验四药物急性半数致死量的测定实验五肝脏损伤对药物作用的影响实验六药物敏感性实验实验七磺胺类药物内服给药后的血中药物浓度测定实验八药物对家兔的利尿作用的影响实验九有机磷酸酯类中毒及解救实验一药理实验基础知识•目的•掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；•更好地掌握药理学基本理论知识；•培养科学思维•基本要求•实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；•实验时•实验器材要妥善保管；•实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录；•注意节约实验药品；•维持良好的课堂纪律。•实验后•各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室；•值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；•书写实验报告。•实验报告的书写•题目•目的•原理•材料：实验动物，器材，药品•方法：用自己的语言简单扼要描述出来；•结果：要求真实、清楚；•讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；•结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。•实验设计基本原则•随机原则•使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。•对照原则•组间对照：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照；•自身前后对照•重复原则•实验动物•动物的选择•小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。•大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。•实验动物•动物的选择•豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。•家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。•狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。•动物捉拿及固定方法•小白鼠右手提起鼠尾,左手拇指和食指捏住双耳及头部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤及尾部,便可将小鼠完全固定。如图1。单手捉持，用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、无名指和手掌压住尾根部，再用腾出的拇指、食指及中指抓住鼠双耳及头部皮肤而固定。如图2。图2图1•动物捉拿及固定方法•豚鼠豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。•家兔可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。•动物的给药方法•小白鼠•灌胃法（i.g.）：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为0.1-0.3m1／10g。•动物的给药方法•小白鼠•腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3ml／l0g。×√•肌肉注射（i.m.）：小鼠因肌肉较少，很少采用肌肉注射，若有需要可注射于股部肌肉，多选后腿上部外侧，一处注射量不超过0.1mL。•动物的给药方法•小白鼠•皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。•静脉注射(i.v.)：将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50'C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。•动物的给药方法•家兔•灌胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。•动物的给药方法•家兔•皮下、肌肉、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0/mg，腹腔为1.0-5.0ml/mg•静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉（兔耳外缘的血管为静脉，中央的血管为动脉，如图），用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。实验二药物的剂量与剂型对药物效应的影响•实验目的•观察不同剂型与剂量对药物效应的影响。•实验材料•l.0ml注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、3.5％硫酸镁溶液（注射液和口服溶液）•观察指标•动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。•实验方法•取禁食12h的昆明种小鼠3只，称重，分别标为对照组、灌胃组和腹腔注射组按以下给药：A：对照组：灌胃给生理盐水0.2ml/10g；B：灌胃组：灌胃给3.5％硫酸镁溶液0.2ml/10g；C：腹腔注射组：腹腔注射给3.5％硫酸镁溶液0.2ml/10g。•给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。•15min后每只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。•炭末灌胃后15min，将小鼠脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，比较3组动物的活动状况和胃肠炭末推进率有何不同。•实验结果•实验结果填入下表中鼠号体重(g)药物及剂量给药途径动物反应炭末推进率（%）ABC不同剂型对药物效应的影响•思考讨论题•灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同？为什么？•本次实验结果对临床用药有何提示？实验三毛果芸香碱与阿托品对瞳孔及对光反射的影响•目的•了解毛果芸香碱的副交感神经节后拟胆碱作用和阿托品的对抗作用。•材料•兔子１只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液•方法•取兔放于兔固定箱内固定，避免阳光直射眼睛，用毛剪剪去兔两眼睫毛，然后用瞳孔量尺测量瞳孔大小，连续三次，取平均值。•在兔左眼滴入０.2%毛果芸香碱3滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。•滴入毛果芸香碱20分钟后，分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴，15分钟后测量两瞳孔大小，连续3次，取平均值并进行比较。•滴入肾上腺素15分钟后，分别于两眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分钟后观察两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续3次，并取平均值项目正常毛果芸香碱肾上腺素阿托品瞳孔大小左眼右眼•记录•讨论题•从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮抗作用？实验四药物急性半数致死量的测定实验目的•通过实验，学习测定药物的半数致死量的方法、步骤和计算过程，了解测定药物半数致死量的意义。实验要求•半数致死量（LD50）是衡量药物毒性大小的重要标志，LD50表示能使全部实验动物死亡半数的药物剂量，是以动物死亡或存活作为质反应标志。LD50小说明药物的毒性大，LD50大表明药物毒性小。实验器材与药物注射器，乙酰甲喹试验方法预备试验取雏鸡20只，以5只为1组，分成4组。分别灌服不同剂量的药物，连续观察24h，出现中毒症状并记录死亡数。找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围。预试验组中给予雏鸡500mg/Kg剂量5只雏鸡全部死亡，而给予100mg/Kg剂量组的5只雏鸡全部存活。通过预试验结果按照下面公式算出剂量间的等比值（1：r）1NDnrDMr≈0.7式中N为分组组数，Dm是估计100%死亡的致死量，Dn是估计0%死亡的致死量，r为比值。计算各组剂量：第一组500mg/kg第二组350mg/kg第三组245mg/kg第四组171.5mg/kg第五组120.05mg/kg第六组空白对照组正式试验一个班分两大组，每大组用50只雏鸡（50-60g）进行急性LD50测定。每大组将雏鸡50只分为5组，每组10只，按上述计算的剂量口服灌服给药，每只给1mL。空白组不给药。实验记录组别剂量mg/kg动物数死亡数死亡率P存活率q第一组第二组第三组第四组第五组第六组计算1.LD50的计算按综合计算法公式计算2．计算logLD50的标准误S3.计算95%置信区界（FL）上述公式中：Xm为最大死亡率组剂量对数；i为组距（相邻两组剂量比值的对数）；∑P为各组死亡率总和（用小数表示）；X50为logLD50；Xi相邻对数剂量差。150log[(0.5)]mLDxip50log/LDSipqn2150log(1.96)1ippFLxxn如果试验结果最高死亡率在80～100%之间，最低死亡率在20～0%之间，可用下列公式求得校正值：LD50=log-1[Xm-i(∑p-(3-Pm-Pn)/4]式中：Pm—最高死亡量组Pn—最低死亡量组实验五肝脏损伤对药物作用的影响实验目的通过实验，观察肝损伤后对药物作用的影响。实验目的肝脏是药物代谢的主要器官，而药物的代谢主要靠酶的催化。在肝细胞内有专门催化药物等外源性化学物质代谢的微粒体酶，简称药酶。四氯化碳是一种对肝细胞有严重毒害作用的化学物质，可引起中毒性肝炎，使肝脏对药物的代谢能力降低。本实验用四氯化碳损害小白鼠的肝脏，使肝药酶活性受到抑制，从而减缓对硫喷妥钠的代谢，使麻醉时间延长。实验仪器、设备•仪器：注射器，针头，天平，鼠笼。•药物：四氯化碳、硫喷妥钠实验内容•给健康小白鼠注射四氯化碳（0.1mL/10g)，造成肝损伤，后用0.3%硫喷妥钠注射(0.15mL/10g)，与健康小白鼠对照，比较它们麻醉出现及维持的时间的不同；•解剖所有小白鼠，分别观察它们肝和肾的病理变化，并与健康小白鼠比较。实验记录肝脏损伤对药物作用的影响鼠号体重（g）硫喷妥钠剂量（mL）注射时间麻醉开始时间麻醉维持时间健康鼠肝损鼠注意事项“麻醉开始时间“为小鼠从腹腔注射硫喷妥钠溶液后至翻正反射消失时间；“麻醉消失时间”为从翻正反射消失至翻正反射恢复的时间。实验六药物敏感性实验学习内容•药物敏感实验——纸片法•定量药敏实验——试管二倍稀释法学习要求•掌握两种药物敏感实验的原理、方法及注意事项。抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：•用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。常用最低抑菌浓度（MIC）表示，即体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度。通常根据MIC结合常用剂量时体内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏感或耐药的界限，给出S（敏感）、I（中介）、R（耐药）等定性的结果，方便临床用药。•检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。用于流行病学调查及院内感染的监控，控制和预防耐药菌株的流行。为经验用药提供参考依据。•方法：扩散法（纸片法）、稀释法（有琼脂稀释法和液体稀释法）药敏纸片的人工制作•定性滤纸用打孔器打成直径6mm的圆片，每100片放入一小瓶中，160℃干热灭菌1---2小时，或用高压灭菌（6.8kg30min）后在60℃条件下烘干。（此应提前做好）•抗菌药物的浓度（指有效药物浓度）青霉素200U/ml其它抗菌药物100