纸色谱和氨基酸的纸上电泳

实验十九、纸色谱实验二十、氨基酸的纸上电泳一、目的与要求：1、了解纸色谱的基本原理。2、学习用纸色谱法分离氨基酸的一般操作。3、了解电泳的基本原理，学会纸上电泳的操作方法。4、初步掌握用纸上电泳法分离鉴定氨基酸。二、基本原理（一）纸色谱是一种分配色谱。滤纸作为载体，纸纤维上吸附的水为固定相，与水不相混溶的有机溶剂作为流动相。当样品点在滤纸的一端，使流动相从有样品的一端上行，通过毛细管作用，流向另一端时，依靠溶质在两相间的分配系数不同而达到分离。极性大的组分在固定相中分配得多，随流动相移动速度慢，极性小的在流动相中分配得多，随流动相移动速度快一些。三、纸色谱实验步骤（观看录像）1、点样；2、展开；3、显色与结果处理——计算出两个物质的Rf值。纸色谱图沿的距离样品原点中心到溶剂前心的距离样品原点中心到斑点中fR（二）在一定的条件下，带电的质点在电场作用下，向着与其所带电荷相反的电极移动，这种现象称为电泳。不同氨基酸在同一pH值的溶液中，所带的电荷不同。在同一电场中，带不同电荷的各个氨基酸泳动的方向和速度不相同，因此将不同的氨基酸在同溶液中进行电泳时，由于各个氨基酸移动的方向和距离都不相同，从而达到分离鉴定的目的。四、纸上电泳实验步骤（观看录像）1、点样与润湿；2、电泳；3、显色；4、结果处理——标明正、负极和氨基酸。氨基酸的纸上电泳图谱实验注意事项：1、整个实验都不应用手直接接触滤纸（手汗中有氨基酸）；2、纸色谱点样点越小越好(点2次即可),纸上电泳点样点越小越好（可重复点4-5次）；3、点完样后，毛细管应放回原试管中，不可放错；4、电泳实验中，当全部滤纸都放入电泳槽后才可以通电；5、电泳结束应先关电源再把滤纸取出（电压较高，注意安全）；6、纸色谱中的显色剂已经加入到展开剂中，不用另外喷，直接吹干即可显色；7、纸上电泳实验所喷水合茚三酮不能太多，并且注意茚三酮不可喷到皮肤上。