搜索
微生物的实验室培养1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。培养基的成分、配制、主要种类及其应用2．培养基的主要成分营养物质概念作用来源碳源能提供所需碳元素的物质①用于合成微生物细胞结构的物质和代谢产物②异养微生物的主要能源无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需氮元素的物质主要用于合成、蛋白质、核酸以及含氮代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨生长因子生长必不可少的微量有机物一般是酶和核酸组成成分维生素、氨基酸、碱基3.培养基的主要种类划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产、连续培养固体培养基加入凝固剂，如琼脂微生物分类、鉴定、活菌计数等化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确分类、鉴定用途选择培养基添加(或缺少)某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长促进需要的微生物的生长,培养、分离出特定微生物鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物4.培养基的配制(1)配制原则①按照微生物的种类、培养的目的选择原料；②注意各种营养物质的浓度和比例；③PH要适宜。(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。特别提醒：调节PH应在灭菌之前。(3)培养基的营养构成①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。(4)培养基的制备是否合格的验证：将未接种的培养基放在恒温箱中保温1天—2天，若无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。下列关于细菌的叙述，错误的是()A．硝化细菌能以NH3作为氮源和能源物质B．某些细菌可以利用光能固定CO2合成有机物C．生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质D．培养圆褐固氮菌需要在培养基中加入含氮化合物作为氮源，否则不能生存【解析】某些细菌如蓝细菌(蓝藻)、光合细菌以及红螺菌都能进行光合作用。生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括维生素、氨基酸和碱基等。而微生物的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，它们都是要从外界获得补充的。圆褐固氮菌等固氮微生物能够利用空气中的N2作为氮源，将N2转化成NH3【答案】D1．现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，你认为它们适于分离()成分KH2PO4MgSO4·7H2ONaClCaSO4·2H2OCaCO3葡萄糖纯淀粉甲培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%——A.甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙培养基适于分离异养型自生固氮菌B．甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分离自养型自生固氮菌C．甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌D．甲培养基适于分离自养型共生细菌；乙培养基适于分离异养型共生固氮菌答案：B解析：固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌，甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物，由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌；乙培养基中不含有机碳源，所以可用来分离培养自养型的自生固氮菌。无菌技术1．灭菌和消毒比较项目方法目的消毒使用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有有效避免操作者自身被微生物感染的目的。3．实验室常用的消毒方法是煮沸消毒法，此外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用酒精消毒双手、氯气消毒水源等。常用的灭菌方法有灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、干热灭菌，此外，实验室里还用紫外线、或化学药物进行消毒。下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是()A．防止杂菌污染B．消灭杂菌C．培养基和发酵设备都必须灭菌D．灭菌必须在接种前【解析】灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物(杂菌)，所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。【答案】B2．关于灭菌和消毒的不正确的理解是()A．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B．消毒和灭菌实质上是相同的C．接种环用烧灼的方法灭菌D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法答案：B解析：消毒是使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。1．微生物的纯化培养包括制备琼脂固体培养基和纯化微生物。2．纯化大肠杆菌的原理通过平板划线或稀释涂布等方法能将聚集在一起的大肠杆菌分散或稀释成单个细胞，通过培养使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个经过纯化的大肠杆菌菌落。微生物的纯化培养技术3．纯化微生物的方法：平板划线法、稀释涂布平板法。4．平板划线操作的注意事项①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。下列平板划线的操作正确的是()A．使用已经灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养【解析】接种环在每次划线前及划线结束后均需灼烧，故A错；打开装菌种的试管棉塞后需通过火焰灭菌，才能取菌种，取出菌种后试管口需再次通过火焰才能塞上棉塞，B错；为了使菌种分散成单个细胞，必须多次灼烧、划线，故C错。【答案】D3．涂布平板操作需用到()A．接种环、滴管、酒精灯B．接种环、酒精灯、移液管C．酒精灯、移液管、涂布器D．接种环、酒精灯、涂布器答案：C解析：涂布平板时必须在酒精灯旁操作，涂布器是用来涂布平板的，移液管有刻度，可以按照需要将一定体积的菌液转移至平板。