艾滋病筛查实验室标准操作程序(SOP)

标准操作程序（SOP）艾滋病筛查实验室宾县人民医院艾滋病实验室标准操作程序（SOP）目录BXYY_AIDS_SOP001抽血标准操作程序BXYY_AIDS_SOP002酒精棉球的制备BXYY_AIDS_SOP003样品接收登记处理程序BXYY_AIDS_SOP004检测结果报告程序BXYY_AIDS_SOP005HIV抗体筛查检测程序BXYY_AIDS_SOP006废弃物处置和实验室消毒程序BXYY_AIDS_SOP007检测数据的记录与保存程序BXYY_AIDS_SOP008ELISA法HIV抗体检测操作程序（珠海丽珠）BXYY_AIDS_SOP009仪器保养维护校准程序BXYY_AIDS_SOP010微量可调移液器标准操作程序BXYY_AIDS_SOP011实验室的消毒和处理程序BXYY_AIDS_SOP012实验室质量控制程序BXYY_AIDS_SOP013保密程序BXYY_AIDS_SOP014实验室意外和事故处理程序BXYY_AIDS_SOP015实验室安全防护程序BXYY_AIDS_SOP016ELISA法HIV抗体检测操作程序（上海科华）BXYY_AIDS_SOP017酶标仪标准操作程序（Anthos2010）BXYY_AIDS_SOP018自动洗板机标准操作程序（AnthosFluido）BXYY_AIDS_SOP019生物安全柜标准操作程序（BiobaseBSC-1500ⅡA2）BXYY_AIDS_SOP020人类免疫缺陷病毒抗体操作程序(胶体金法)说明：1、《艾滋病实验室标准操作程序（SOP）》由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，并定期修订。2、修订应该在实验室主任领导下进行，每年至少修订1次。3、日常工作中，工作人员有义务随时发现并报告SOP文件中的不足和错误，实验室主任组织调查核实后负责修订。4、所有实验室各岗位工作人员要在SOP文件上签名，表示已经阅读并掌握了有关内容。工作人员签名：标题：抽血标准操作程序适用范围：需做血液检测的对象试剂与材料：碘酒、酒精棉、棉签、采血垫、橡胶止血带、注射器、试管、止血棉等操作步骤：1、核对被检者姓名，做好记录，并标记试管。2、请被检者入座，伸出手臂放在采血垫上。3、用橡胶止血带扎紧被检者手臂并请其握紧拳头。4、选择静脉，用碘酒棉签在采血部位由里向外擦拭（直径6厘米）消毒。5、用酒精棉脱碘。6、确认一次性注射器（真空采血管）合格后，当着被检者打开，在采血部位穿刺静脉，抽取血液5毫升。7、放松止血带，拔出针头，请被检者用止血棉压迫止血。8、将血液沿试管内壁缓慢注入。编号：BXYY_AIDS_SOP001编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：酒精棉球的制备1、备脱脂棉球若干。2、分别准备一个清洁磨口瓶和100ml量筒或量杯，刷净，烤干。3、准备50Oml蒸馏水。4、将上述脱脂棉球、磨口瓶、瓶盖和蒸馏水包好，用压力蒸汽12l℃102.9Kpa(1.05kg/cm)灭菌20-3min。4、超净工作台紫外灯灭菌30min。5、无菌操作状态下，将灭好的脱脂棉球放入磨口瓶中备用。6、于无菌量筒中加75ml95%医用酒精，再加20ml无菌蒸馏水至95ml。(此时为95ml75%酒精)。7、将配好的75%酒精倒入装有无菌脱脂棉球的磨口瓶中，浸透，盖盖待用。编号：BXYY_AIDS_SOP002编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：样品接收登记处理程序适用范围：1、全县HIV抗体筛查送检的HIV抗体标本2、其他医疗单位及个人委托的HIV抗体筛查标本操作步骤：1、于样品接收登记本做好登记、获取编号。2、送检标本必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护农的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。3、核对样品与“HIV抗体送检单”编号、姓名是否相符，送检单应一式两份，填写规范、完整，并加盖公章。对不规范送检单嘱其补填完整或限时补送。4、检查样品血清量应不少于3ml，过少者应嘱其立即补送。5、检查样品管应无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告科室领导，并做好记录。6、检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人，并嘱其立即补。7、打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。8、样品与送检单验收合格后，收样人应在送检单备注栏签收，并将复写件交送检人带回存档。9、合格样品放置于待检台，立即检测。10、对实验室自己采集的样品、最好将血液先自然存放l～2小时后，再用3000rpm离心15分钟，吸出上清液备用。11、如在几天内检测可放在2～8℃冰箱中。如要贮存，则置干-20℃的低温冰箱内。编号：BXYY_AIDS_SOP003编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：HIV抗体筛查检测程序样品初筛检测筛查试剂阳性反应阴性反应重复检测原有试剂加另外一种筛查试剂一阴一阳均阴性反应均阳性反应送确认实验室确认报告阴性编号：BXYY_AIDS_SOP005编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：检测结果报告程序HIV抗体阴性：1、对HIV抗体筛查试验呈阴性反应者，详细填写“HIV抗体筛查报告”一式复写两份。2、于“结论”处填写“HIV抗体阴性”。3、检测者、审核者手写体签名，并加盖公章。4、“HIV抗体筛查报告”当面交给自愿检测者或送检单位，接收报告者于“备注”处签收后，原件存档，复写件交接收报告者。5、与送检单位协商后，若“HIV抗体筛查报告”为邮寄，则邮寄者应于“备注”处签字注明。原件寄出，复写件存档。HIV抗体待复查：1、对HIV抗体筛查试验呈阳性反应者进行免疫印迹（WB）试验。2、详细填写“HIV抗体确认检测报告单”一式复写两份。于“结论”处填写“HIV-1抗体阳性（+）”、“HIV抗体阴性（-）”或“HIV抗体不确定（±）”3、对“HIV抗体不确定（±）”报告单的备注处填写“3个月后复检”。4、检测者、审核者手写体签名，并加盖公章。5、“HIV抗体确认检测报告单”当面交给自愿检测者或送检单位，接收报告者于“备注”处签收后，复写件存档，原件交接收报告者。6、若与送检单位协商后，“HIV抗体确认检测报告单”为邮寄，则邮寄者应于“备注”处签字注明。原件寄出，复写件存档。7、同时上报疫情组。编号：BXYY_AIDS_SOP004编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：废弃物处置和实验室消毒程序废弃物的处置：1、实验过程中产生的污染性液体物质，废弃的液体标本、血液等应小心放在盛有消毒液的严格防渗漏的专用容器中，并及时加盖。2、实验过程中所用的需废弃的，一次性吸头、吸管、离心管、平皿、个人防护用品和其它实验材料等放入防漏耐高压的袋内，扎口封平。3、以上废弃物必须有专人尽责，避免过满并就地高压消毒，确保12l℃至少30分钟。4、高压消毒后经传递窗传出半污染品，由专人送至专门集中焚烧处理。5、采集检验标本或接触装有检验标本的容器，应带手套，一次性使用的手套用后放收集袋内，集中烧毁；可反复使用者用后放消毒液内集中消毒；无手套可用纸套使皮肤不直接与容器表面接触，用后将纸套放入污物袋内烧毁。6、盛标本的容器，若为一次性使用纸质容器及其外面包被的废纸，应焚毁；对可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，可煮沸15min，可用1000mg/L有效氯的漂白粉澄清液或二氯异氰尿酸钠溶液浸泡2-6h，消毒液每日更换，消毒后用水洗净或流水刷洗、沥干。7、废弃标本及其容器应有专门密闭不漏水的污物袋(箱)存放，专人集中，烧毁或消毒，每天至少处理一次。实验室消毒：1、废弃物缸：50O0mg/L次氯酸钠。2、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。3、溢出物：50O0mg/L次氯酸钠。4、污染的台面和器具：2000mg/L次氯酸钠，也可以用过氧化氢或过氧乙酸。5、器械可用2％戊二醛消毒。编号：BXYY_AIDS_SOP006编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：检测数据的记录与保存程序1、按试验顺序，按送检标本编号逐一填写《酶标检测原始记录》。2、将试验结果记录于《酶标检测原始记录》。3、于《酶标检测原始记录》上详细记录试验方法、试剂厂家、出厂日期、失效日期、操作人和试验日期。4、试验结束，将《样品采集单》、《酶标检测原始记录》、《酶标仪机打记录单》和《传染病管理检验鉴定书》装订成一档。编号：BXYY_AIDS_SOP007编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：ELISA法HIV抗体检测操作程序（珠海丽珠）原理及用途：本品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和Ⅱ型(HIV-1／HIV-2)抗原(合成肽或基因重组蛋白)包被的微孔板和酶标记的HIV-l／HIV-2抗原及其它试剂组成，应用双抗原夹心法原理(SandwichELISA)检测人血清或血浆中的HIV-1／HIV-2抗体。操作步骤:l.将试剂盒平衡至窒温，取出所需的条板，剩余的即时封存。2.用去离子水或蒸馏水20倍稀释浓缩洗涤液。3.将所需数量的条板固定于支架，按顺序编号，设置样品孔、空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔。在样品孔中加入50ul待测样品，空白孔不加任何液体，阴性、阳性对照孔分别加入50ul阴性或阳性对照，轻拍混匀。4.置37℃水浴温育60分钟。5.将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍，扣干。(注：洗涤时各孔要加满洗液，勿使孔间交叉污染。采用洗板机时应设定每遍有60秒的浸泡时间。)6.每孔加入50ul酶标记物(空白孔除外)，轻拍混匀。7.置37℃水浴温育30分钟。8.将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍，扣干。(注：洗涤时各孔要加满洗液，勿使孔间交叉污染。采用洗板机时应设定每遍有60秒的浸泡时间。)9.每孔加入50ul底物缓冲液和50ul底物液，轻拍混匀置37℃避光温育30分钟。lO．每孔加入50ul终止液终止显色反应。11．用酶标仪单波长450nm(需设空白对照，并以空白对照孔调零)或双波长450nm／630nm测定各孔A值。编号：BXYY_AIDS_SOP008编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰结果判定1.临界值(Cutoff)=O，15+阴性对照平均A值2.样品的A值≥Cutoff值者为HIV抗体反应阳性。3.样品的A值Cutoff值者为HIV抗体反应阴性。4.正常时，阴性对照A值应≤0.12，阳性对照A值应≥O.80，阴性对照值若小于O.08以O.08计算。5.若阳性对照A值超出正常范围或其孔问之差大于30％，应重复试验。6.初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实验室做确认试验，确认报告阴性者，血可以发放使用：凡确认实验阳性和可疑者，血不能发放使用，统一送确认实验室处理。注意事项1.本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIv初筛实验室。2.整个HIV榆测必须符合《全困艾滋病枪测工作规范》，严格防止交叉感染。操作时必须戴手套、穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。3.H1V-1／HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。4.样品、酶结合物溶液等应用加液器加注，并经常校对其准确性。5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。6.所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。7.微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方可使用；未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。8.用于检测的样品应保持新鲜。9.剩余样品及废弃物应经12l℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.Og