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Page:1微生物基础知识洁净室分级无菌制剂的微生物控制Page:3一类形体微小,结构简单,用肉眼难以看到,必须借助光学显微镜或电子显微镜才能看清的低等微小生物的统称。微生物定义原核•细菌•放线菌•支原体•衣原体•蓝细菌真菌•酵母菌•霉菌非细胞类•病毒•类病毒Page:5微生物特点种类多、分布广个体小、面积大吸收多、转化快适应强、异变异Page:6芽孢杆菌（细菌）Page:8金黄色葡萄球菌（细菌）Page:9大肠杆菌（细菌）Page:10细菌的菌落单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。细菌的菌落特征因种而异。可作为鉴定细菌种的依据。Page:11霉菌丝状真菌的俗称，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。Page:13病原真菌的菌落青霉的菌落Page:15酵母菌的菌落大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。Page:16营养需求水分•水占细胞浆的70%～90%，是细胞的重要组成成分。碳源•碳源是构成细胞的重要物质。氮源•氮是组成蛋白质和核酸的重要元素。无机盐•磷、硫、镁、铁、钾、钠、钙、氯、锰、锌、钴、铜等。生长因子•微生物生长发育所必需，而其自身不能合成的一类营养物质。包括维生素、嘌呤和嘧啶。Page:18新版GMP介绍•中国GMP和WHO一致•WHOGMP的主要内容来源于EU附录1•中国GMP与EU、WHO接近。Page:20沉降菌（90mm）cfu/4小时表面微生物接触（55mm）cfu/碟5指手套cfu/手套A级1111B级10555C级1005025_D级20010050_洁净区微生物监测的动态标准（GMP2011版）Page:21的观点•1、对A级区而言，发现的每个微生物污染都必须彻底调查并考察其对放行批得影响。•2、沉降菌放置时间不得少于4小时，除非整个工艺操作时间少于4小时。•3、无菌药品应根据所用灭菌方法的效果确定灭菌前产品微生物污染水平的监控标准，并定期监控。必要时，还应监控热原或细菌内毒素。（第五十八条）•Page:22概念无菌•不存在活的生物（GMP指南）。FDA、欧洲制药工业界将百万分之一（10-6）微生物污染率作为灭菌产品“无菌”的相对标准。灭菌•用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌（包括繁殖体和芽孢）。消毒•用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但不能破坏其芽孢。消毒是不彻底的，不能代替灭菌。Page:24污染的来源与控制空气水人物料设备药品质量的形成是设计和生产出来的，而不是检验出来的。因此，加强生产工艺过程中的预防污染与差错，就成了药品GMP重要的环节。Page:25药品中微生物污染的特殊性能繁殖的活细胞生物。数量少而分布不均匀。多数处于受损伤状态。无繁殖能力或死亡的微生物。Page:26污染的来源与控制:空气、压缩空气微生物类型来源影响因素监测方法措施与手段•产芽孢的细菌：杆菌属、梭菌属•不产芽孢的细菌：葡萄球菌属、链球菌属•霉菌：青霉属、曲霉•酵母菌：红酵母菌属尘埃人的皮肤人的体液衣服水滴附着的微粒大小空气的湿度决定的沉降系数浮游菌监测沉降菌监测过滤层流技术化学消毒紫外线（UV)Page:27污染的来源与控制:水微生物类型来源影响因素监测方法措施与手段革兰阴性菌（98％）微球菌属酵母菌真菌放线菌原水软化水去离子水蒸馏水反渗透水分配系统原水质量水的处理与分配膜过滤法计数化学法过滤法光处理法Page:28污染的来源与控制:人的皮肤和呼吸道微生物类型来源影响因素监测方法措施与手段•金黄色葡萄球菌•八叠球菌•类白喉菌•不动杆菌•产碱菌•亲脂的酵母菌•真菌类的表皮癣菌、小芽孢癣菌、发癣菌•浮生细菌（耳道）皮肤衣着化妆品首饰分泌物不良操作习惯接触药物的机率卫生操作习惯培训接触皿法个人卫生措施（洗涤、更衣、消毒）洁净服无菌手套护目镜Page:29污染的来源与控制:物料微生物类型来源影响因素监测方法措施与手段•动物源性致病菌如：大肠杆菌、沙门菌•植物源性致病菌如：欧文菌、假单胞菌、乳酸菌、芽孢杆菌、链球菌、黑霉菌、链格菌、镰刀霉菌、无菌丝酵母菌等未经处理的物料物料操作中的污染，如取样、操作等物料处理的效率储存条件物料未保护，导致污染微生物限度热处理过滤辐射环氧乙烷卫生操作Page:30污染的来源与控制:建筑、设备微生物类型来源影响因素监测方法措施与手段霉菌：分枝孢子霉菌、曲霉菌墙壁天花板地板排水门窗设备管道材料选型施工维护洁净设计接触皿法清洁验证卫生设计卫生材料清洁（SOP、清洁剂、消毒剂）灭菌清洗室设计清洁工具Page:31常用消毒剂•消毒剂和抗菌剂：酒精（65～75％，w/w）、异丙醇、新洁尔灭（0.1%）、过氧化氢（3％）、碘伏（0.05％）、酚类（酸性、碱性）等•灭菌剂（杀孢子剂）：甲醛、戊二醛、过氧化氢、过氧乙酸、次氯酸钠（3~5％）等Page:33消毒剂作用机理•钝化胞内酶活性，影响细胞的正常代谢酚类•阻断物质运输通道季铵盐类（＋电荷），附着于细胞膜特定部分（－电荷）•破坏微生物细胞（膜）的结构和功能醛类、含氯、过氧化物Page:34消毒剂的SOP•使用频率•交替使用•接触时间•适当稀释•清洁方法•使用期限•无菌状态Page:36轮换两种杀菌剂依次使用，定期轮换，如需要可添加灭菌剂Page:37干热灭菌常见的有火焰、烧灼、干烤和红外线灭菌等。•火焰、烧灼：通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材料制成的器具的灭菌。•干烤和红外线：利用干热空气或热辐射进行灭菌。一般135~145℃需3~5h，160~170℃需2h以上，170~180℃需1h以上，180~200℃需0.5~1h。除热原，则需250℃30min，或200℃45min，180℃2h。空气传热慢，穿透力不强，故干热灭菌时间长。干热灭菌时烤箱内装入物品应留有空隙，以利空气流动，否则使箱内温度不均，部分物品灭菌不彻底。Page:39高压蒸汽灭菌（热压灭菌）通过加压提高蒸汽温度，灭菌效果最好。它简便、经济、可靠、无毒，是最可靠、应用最广泛的灭菌法。此法适用于耐高温和潮湿的物品。常用条件为：115.5℃、30min；121.1℃、20min；126.5℃、15min。Page:40人员要求•健康，有下列情况之一者应及时报告•发烧•鼻炎•咳嗽•传染病•创伤•严格按照SOP操作Page:42人员在洁净室（区）内的自我约束严格遵守洁净室（区）的规则。洁净区工作的操作人员自我约束：操作动作的幅度及工作服的质量、式样、穿戴等对微粒的含量有明显的影响。出入次数应尽可能地少，操作减小动作幅度，避免不必要的走动和移动，以保持洁净室（区）的气流、风量和风压。无菌区的操作人员自我约束：操作人员正戴着无菌手套，就不要破坏它的无菌状态。开门的话，用肘而不是使用抓门把手的方法；不要碰口罩或帽子；不要直接用手拾地上的东西；开始工作前和碰了未消毒的东西后均要以消毒剂擦洗。此外，每次休息或手套碰破或脏污时要更换手套。口罩在休息时或间隔一定时间就要更换一次。Page:43常见缺陷无菌工作服穿着不规范未对无菌更衣进行监控无菌操作不规范Page:44行为的对比•洁净区更衣•无菌工作服的穿着•无菌工作服的微生物控制•无菌操作Page:46洁净区更衣工作服的纽扣应完全扣上Page:48洁净区更衣不能配戴手表、首饰Page:50无菌工作服的穿着手套尺寸不对戴法不正确Page:52无菌工作服的穿着鞋套穿戴不正确Page:54无菌工作服的微生物控制手指接触碟试验Page:56无菌操作不操作时，应将前臂和双手放在前面，身体不能斜靠Page:58无菌操作定时或在任何关键操作前，应消毒手套Page:60无菌操作填写批记录后，手套应消毒Page:61无菌操作层流下的操作台应始终保持干净整洁Page:63!