球菌及检验

对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症,又称化脓性球菌。G+C：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌G-C：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌1.了解病原性球菌的概念及种类。2.熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性、致病性和免疫性。3.掌握葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法。学习目的与要求第一节葡萄球菌属(Staphylococcus)（一）形态与染色G+，球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。一、生物学特性（二）培养特性营养：要求不高，耐盐。液体：均匀浑浊生长普通琼脂平板：血液琼脂平板：高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落。（三）生化反应活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。(如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）触酶（＋）（区别于链球菌属）（四）抗原构造１、蛋白抗原（ＳＰＡ）２、多糖抗原金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（检测磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染诊断）凝固酶（－）：甘油磷壁酸（五）分类:３２个种及亚种１、按色素分类：金、白、柠２、按凝固酶分类：凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌３、按噬菌体分类：金葡菌分为5群26型4.据色素、生化反应分：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌三种葡萄球菌的主要性状性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌色素金黄色白色白色或柠檬色血浆凝固酶+－－α溶血素+－－耐热核酸酶+－－甘露醇+－－SPA+－－致病性强弱无（六）抵抗力无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。MRSA常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1.3%、3%及14%。长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）二、致病性和免疫性(一)致病物质金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。1．血浆凝固酶（coagulase)：分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。2．葡萄球菌溶血素（staphylolysin）3．杀白细胞素（leukocidin）4．肠毒素（enterotoxin）：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H9个血清型）5．表皮剥脱毒素（exfoliativetoxin）6.毒性休克综合征毒素1（toxicshocksyndrometoxin1,TSST1）（二）所致疾病1．侵袭性疾病：（1）皮肤软组织感染特点：病灶局限且脓汁粘稠（2）内脏器官感染（3）全身感染（4）尿路感染2．毒素性疾病（1）食物中毒（2）烫伤样皮肤综合征由表皮剥脱毒素引起。（3）毒性休克综合征由TSST1引起（4）假膜性肠炎人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。3、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性三、微生物学检验（一）标本采集（二）检验程序（三）检验方法三、微生物学检验（一）标本采集根据病情采集标本种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。注意：无菌操作，避免污染。（二）葡萄球菌检验程序脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐物直接涂片染色增菌培养分离培养（血平板）分离培养（高盐甘露醇平板）取可疑菌落鉴定试验药敏试验涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶其他鉴定试验报告初报（三）检验方法1、直接涂片适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液）伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等初步报告：“查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”2、分离培养50ml葡萄糖肉汤（增菌）浑浊无菌（7天）报告：无菌生长脑脊液、脓液、穿刺液、咽拭、尿液血平板血液标本5ml粪便、呕吐物高盐甘露醇平板（三）检验方法3、鉴定试验（1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+）（3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（４）肠毒素测定：金黄色葡萄球菌产生（5）SPA检测：金黄色葡萄球菌（6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定（7）API葡萄球菌鉴定试剂盒（四）结果评价和报告1、金黄色葡萄球菌：无论任何标本中分离到均应鉴定并报告临床。2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。3、尿培养计数：103-104为阳性菌尿标准。4、其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。5、金黄色葡萄球菌（MRSA)：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实MRSA对该类抗生素耐药。第二节链球菌属(Streptococcus)一、链球菌一、生物学特性（一）形态与染色G+，球形或椭圆形，呈链状排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。一、生物学特性（二）培养特性条件：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少数专性厌氧。液体：沉淀生长（絮状或颗粒状）。普通琼脂平板：不生长。血液琼脂平板：（三）生化反应活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。菊糖（-）胆汁溶菌试验（-）optochin敏感试验（-）触酶（-）（区别于葡萄球菌属）（区别甲链与肺链）（四）抗原构造１、多糖抗原（C抗原）：群特异性。２、蛋白抗原（M、T、R、S）型特异性，与致病有关的是M蛋白抗原。3、核蛋白抗原：无特异性。多糖抗原蛋白质抗原核蛋白抗原链球菌抗原构造模式图荚膜（五）分类40个种及亚种１、按溶血情况分类：（1）甲型溶血性链球菌：菌落周围有1～2mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或α溶血。为条件致病菌。（2）乙型溶血性链球菌：菌落周围形成一个2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血。又称溶血性链球菌。致病力强，引起多种疾病。（3）丙型链球菌：无溶血环，不致病２、按抗原结构分类：按C抗原分群：ABCD…20群，对人致病的以A群为主。按M蛋白分型：如A群：100个型，B群：4型，C群：13个型。（五）分类（六）抵抗力不强，60℃30min杀死，对多种消毒剂敏感。乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。二、致病性和免疫性（一）致病物质1、链球菌溶血素（1）链球菌溶血素O(SLO)SLO抗体抗链球菌溶血素O试验：协助诊断风湿热（1:400)（2）链球菌溶血素S(SLS)：无抗原性。2、致热外毒素（猩红热毒素/红疹毒素）3、M蛋白4、透明质酸酶5、链激酶6、链道酶（二）所致疾病主要由A群链球菌引起。1、化脓性感染：由皮肤伤口侵入，经呼吸道侵入，其他途径（如产褥热、蜂窝组织炎）特点：病灶界限不清,脓汁稀薄2．中毒性疾病：猩红热由产生致热外毒素的A族链球菌所致的急性呼吸道传染病。3．变态反应性疾病：风湿热急性肾小球肾炎二、致病性和免疫性4．其他疾病：甲型（草绿色）链球菌：引起亚急性细菌性心内膜炎。三、微生物学检验（一）标本采集（二）检验程序（三）检验方法（一）标本采集根据病情采集标本种类：脓液、鼻咽拭子、血液等风湿热查血清抗体（二）链球菌的检验程序痰、脓、穿刺液咽拭子等脑脊液血液直接涂片染色测抗原分离培养增菌培养(5%CO2葡萄糖肉汤)血平板（5%CO2）可疑菌落鉴定试验初步报告血清学鉴定（分群）杆菌肽试验optochin胆汁溶菌试验其他鉴定敏感试验试验（三）链球菌的检验方法（1）直接镜检：（痰、脓、穿刺液、咽拭子等）初报：发现G+球菌，呈链状排列（2）分离培养：①血液、脑脊液肉汤增菌②脓液、咽拭子等血平板分离（3）鉴定链球菌的主要试验：根据形态、菌落、溶血情况进行：①杆菌肽敏感试验：A群敏感(d10mm)②Optochin敏感试验：肺炎链球菌d18mm，d15mm为阴性。③胆汁溶菌试验：肺炎链球菌+④CAMP试验：Ｂ群无乳链球菌为＋⑤血清学鉴定：试剂盒STREPTEX。用亚硝酸抽提待测菌的群特异性抗原，分别与包被有抗体的胶乳颗粒反应。⑥抗O试验：风湿性关节炎、急性肾小球肾炎，效价400为+二、肺炎链球菌(S.pneumoniae)属链球菌科，链球菌属。广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。一、生物学特性（一）形态与染色G+，矛头状，成双（或短链）排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。（二）培养特性条件：营养要求较高，兼性厌氧菌，5-10%C02生长最好。产生自溶酶。液体：培养24h呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄清。普通琼脂平板：不生长。血液琼脂平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（α溶血）（三）生化反应活泼分解多种糖类。菊糖（多数+）胆汁溶菌试验（+）Optochin试验(+)区别甲链与肺链（四）抗原构造１、荚膜多糖抗原：据此将肺炎链球菌分85型，对人致病的有20多型。Ⅰ-Ⅲ型引起大叶性肺炎。２、菌体多糖抗原：可与CRP反应，产生沉淀。3、M蛋白抗原：型特异性。（五）抵抗力较弱，加热56℃，20min即死亡。对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。荚膜变异：有荚膜的光滑（S）型菌有毒力，失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消失。（六）变异性二、致病性和免疫性（一）致病物质1、荚膜：肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素O等溶血毒素“O”：自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。（二）所致疾病存在于正常人上呼吸道，为条件致病菌，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。可引起：大叶性肺炎，胸膜炎，脓胸，慢性支气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。三、微生物学检验（一）标本采集痰液，脓液，血液，脑脊液等。（二）检验程序（三）检验方法检验程序痰、脓脑脊液血液直接涂片分离培养革兰染色、美兰染色荚膜肿胀试验增菌培养（葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤）（血平板）挑选可疑菌落纯培养初报兔血清肉汤小白鼠毒力试验涂片荚膜肿胀试验胆汁溶菌试验菊糖发酵Optochin试验药敏试验报告检验方法1、直接镜检适用于：痰、脓、脑脊液标本。报告：“找到肺炎链球菌”2、分离培养硫酸镁肉汤：均匀混浊生长，有绿色荧光。血平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（α溶血）3、鉴定试验（1）荚膜肿胀试验（2）胆汁溶菌试验：+（3）Optochin试验：+（4）菊糖发酵试验：+（5）小鼠毒力试验：有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。胆汁溶菌试验阳性：加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37℃，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。Optochin敏感试验阳性：取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于1-2区），35℃需氧培养过夜，抑菌圈18mm。Optochintest肺炎链球菌的主要鉴定依据1、镜下形态：革兰阳性球菌，矛头状成双排列，平端相对，尖端向外；2、血平板菌落特点：直径0.5-1.5mm，灰白色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平，周围有草绿色溶血环。培养或放置24h以上，菌落中央可塌陷，呈脐窝状。3、生化鉴定：Optochin试验+，胆汁溶菌试验+。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别形态菌落血清胆汁菊糖Opto-小鼠肉汤溶菌chin毒力试验肺链甲链矛头状，稍大，湿润浑浊++++成双，扁平，有荚膜脐窝状圆形，较小，稍干，沉淀————无荚膜圆，凸起（四）结果评价和报告乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌，有利于早期治疗，以减少并发症（如风湿热，肾小球肾炎）的产生。草绿色链球菌在重症感染时，应鉴定到种。第三节肠球菌属是肠道中的正常菌群导致医院内感染：如尿路感染、腹部和盆腔感染、败血症、脑膜炎。一、生物学特性（一）形态染色G+球菌，单个、成双或短链状排列。无荚膜